荧光免疫微流定量检测急性心肌梗死三联的性能及诊断效果评价

陈桂芳，楚华星，邢 喆，吴 蕾

北京大学首钢医院检验科,北京 100144

近年来，由于人们生活方式的改变和人口老龄化问题的影响，急性心肌梗死(AMI)的发病率逐年升高。有研究发现，早期诊断和治疗能显著降低AMI病死率，改善患者预后[1]。心肌标志物为人体内在心肌损伤时能够出现特异性变化的指标[2-3]，理想的心肌标志物要求具有高灵敏度和高特异度。AMI三联(以下称心梗三联)包括肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)，是目前临床常用的辅助AMI诊断的心肌损伤标志物。不同的检测方法所检测的心肌标志物水平可能存在差异，对其诊断AMI的灵敏度和特异度产生影响。深圳微点生物公司研发的esLabs hyper i300全自动干式荧光免疫分析仪是一款主动式微流控芯片检测仪，该仪器具有操作简便、通量高和速度快等优点[4]。本研究评价了荧光免疫微流定量检测心梗三联的性能及诊断效果，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2018年11月至2019年5月本院急诊科收治的53例疑似AMI患者为研究对象，其中经冠状动脉造影确诊为AMI的患者33例为AMI组，其中男24例、女9例，平均年龄(66.7±16.8)岁；诊断为冠心病等其他疾病的患者20例为非AMI组，其中男15例、女5例，平均年龄(69.4±18.5)岁。选取同期健康体检者30例为对照组，其中男22例、女8例，平均年龄(67.4±16.4)岁。纳入标准：临床资料完整者。排除标准：合并肿瘤者；合并骨骼及肾脏疾病者。3组研究对象年龄、性别比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器与试剂 深圳微点生物公司生产的esLabs hyper i300全自动干式荧光免疫分析仪和微流控定量试剂盒(免疫荧光法)。

1.3方法

1.3.1诊断性能分析 以冠状动脉造影结果为诊断标准，评价荧光免疫微流定量检测结果的阳性率；并采用ROC曲线(以Myo>100 ng/mL、CK-MB>5.0 ng/mL、cTnI>0.5 ng/mL为切点)分析心梗三联对AMI的诊断性能。各指标的参考值：Myo<100 ng/mL、CK-MB<5.0 ng/mL、cTnI<0.5 ng/mL；阳性判断标准：参考值上限以下为阴性，超出参考值上限为阳性。

1.4统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行数据分析。偏态分布的计量资料以M(P25，P75)表示，组间比较采用秩和检验；计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；采用ROC曲线分析心梗三联对AMI的诊断性能。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.13组Myo、CK-MB和cTnI水平比较 3组Myo、CK-MB和cTnI水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；其中AMI组与非AMI组Myo、CK-MB、cTnI水平高于对照组(P<0.05)；AMI组CK-MB和cTnI水平高于非AMI组(P<0.05)。见表1。

表1 3组Myo、CK-MB、cTnI水平比较[M(P25，P75)，ng/mL]

注：与对照组比较，*P<0.05；与非AMI组，#P<0.05。

2.2荧光免疫微流定量检测Myo、CK-MB和cTnI的阳性率比较 53例疑似AMI患者中，荧光免疫微流定量检测Myo、cTnI的阳性率分别为 56.6%(30/53)、60.4%(32/53)，与冠状动脉造影诊断AMI的阳性率[62.3%(33/53)]比较，差异无统计学意义(P>0.05)；而荧光免疫微流定量检测CK-MB的阳性率为41.5%(22/53)，与冠状动脉造影的诊断阳性率(62.3%)比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3Myo、CK-MB、cTnI单独及联合检测诊断AMI的性能分析 ROC曲线分析结果显示，cTnI诊断AMI的AUC值最大(0.901)，与Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串联、并联比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；cTnI诊断AMI的灵敏度(87.9%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串联(P<0.05)，特异度(85.0%)高于Myo、CK-MB、Myo+CK-MB+cTnI并联(P<0.05)。Myo+CK-MB+cTnI并联诊断AMI的灵敏度(97.0%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串联(P<0.05)，但特异度仅为35.0%。Myo+CK-MB+cTnI串联诊断AMI的特异度(100.0%)高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI并联(P<0.05)，但灵敏度仅为39.4%。见图1、表2。

2.4批内精密度验证 荧光免疫微流定量检测Myo、CK-MB、cTnI的批内精密度均不超过10%，符合判断标准。见表3。

表2 Myo、CK-MB、cTnI单独和联合诊断AMI的性能分析

注：与Myo比较，*P<0.05；与CK-MB比较，#P<0.05；与cTnI比较，△P<0.05；与Myo+CK-MB+cTnI串联比较，▲P<0.05。

表3 Myo、CK-MB和cTnI 批内精密度验证结果

图1 Myo、CK-MB、cTnI单独及联合检测诊断AMI的ROC曲线

2.5批间精密度验证 荧光免疫微流定量检测Myo、CK-MB、cTnI的批间精密度均不超过10%，符合判断标准。见表4。

表4 Myo、CK-MB和cTnI 批间精密度验证结果

3 讨 论

AMI是心肌持续缺血引发心肌细胞坏死的一种急性冠脉综合征。AMI诊断的金标准为冠状动脉造影。近年来，随着敏感性更强的心肌标志物的出现，心肌标志物对AMI等急性冠脉综合征的诊断价值成为研究的热点。CK-MB是肌酸激酶的同工酶，心肌内含量较多，骨骼肌中也少量存在，所以在急性骨骼肌损伤时其可出现一过性升高。有研究发现，AMI时CK-MB的释放量与梗死面积、程度、部位有关，所以即使其诊断AMI时的灵敏度和特异度不及cTnI,但可用于梗死程度和再发梗死的评估[6]。cTnI是横纹肌的一种调节蛋白，是骨骼肌和心肌的结构蛋白，心肌缺血导致心肌损伤时，外周血cTnI水平迅速升高，且升高持续时间可达2周，有较长的诊断窗口期[7]。此外，cTnI对心肌损伤的诊断具有高灵敏度和特异度的特点，2007年美国临床生化学会推荐cTnI为心肌梗死诊断的首选标志物[6]。Myo存在于肌肉中，尤其在心肌中含量丰富，其通常在AMI发作后1.5 h即可升高，是AMI时出现最早的血清标志物，其灵敏度高，但特异度较低，骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病都可引起Myo水平的升高[8]。有研究证实，Myo、CK-MB和cTnI三者联合检测更有利于AMI的诊断[9]。

本研究采用微流控定量试剂盒，应用esLabs hyper i300全自动干式荧光免疫分析仪定量检测cTnI、 CK-MB和Myo水平，进行精密度验证，并用冠状动脉造影诊断结果作为金标准，评价其检测性能。研究结果表明，荧光免疫微流定量检测cTnI、 CK-MB和Myo的批内、批间精密度均不超过10%，符合判定标准。荧光免疫微流定量检测Myo、cTnI的阳性率分别为56.6%、60.4%，与冠状动脉造影的诊断阳性率(62.3%)比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明两种方法诊断结果一致性较好；而荧光免疫微流定量检测CK-MB的阳性率(41.5%)明显低于冠状动脉造影诊断的阳性率(62.3%)(P<0.05)，表明用CK-MB诊断AMI时可能出现漏诊情况，考虑与受试对象CK-MB的释放量和发病时间可能影响CK-MB的检测准确性有关。

本研究中，AMI组与非AMI组Myo、CK-MB、cTnI水平均高于对照组(P<0.05)；AMI组CK-MB、cTnI水平高于非AMI组(P<0.05)。表明Myo、CK-MB和cTnI水平与心肌损伤相关，并且CK-MB和cTnI水平与心肌损伤的严重程度有关,对AMI患者的诊断和疾病评估方面有重要的价值。以冠状动脉造影的诊断为标准，制作ROC曲线，结果显示，cTnI的AUC值最大，与Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串联、并联比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；cTnI诊断AMI的灵敏度高于Myo、CK-MB及Myo+CK-MB+cTnI串联(P<0.05)，特异度高于Myo、CK-MB、Myo+CK-MB+cTnI并联(P<0.05)，表明cTnI诊断AMI的特异度、灵敏度高，诊断性能好，为心肌损伤的首选标志物，与文献[10]报道一致。而CK-MB、Myo对心肌梗死也具有一定的诊断价值，但本研究Myo、CK-MB和cTnI诊断AMI的灵敏度、特异度等与部分文献的结果存在一定差别，可能与研究对象中有部分早期AMI患者Myo、CK-MB和cTnI还未升高有关。Myo+CK-MB+cTnI并联诊断AMI的灵敏度为97.0%，但特异度仅为35.0%；而Myo+CK-MB+cTnI串联诊断AMI的特异度最高(100.0%)，但灵敏度仅为39.4%。所以临床可根据实际需求选择联合检测的方式，以提高诊断的准确性，减少漏诊和误诊。

综上所述，cTnI诊断AMI的特异度、灵敏度高，心梗三联并联诊断AMI灵敏度高，串联诊断AMI的特异度高，可根据临床需求有选择性地进行检测，以提高诊断的准确性。荧光免疫微流定量检测心梗三联的性能良好，诊断效果佳，能基本满足AMI的辅助诊断应用，适用于临床实验室。