猪瘟病毒与猪圆环病毒2型混合感染病例的诊断

杨志刚，汤德元，廖少山，韩超逸，晏仁潭

(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025)

2019 年11 月上旬，贵阳市某规模化养猪场部分猪出现食欲减退、精神沉郁、体温升高、喘气、咳嗽、卧地不起等症状，随后发病母猪出现流产，仔猪发生急性死亡。 为了查明病因，贵州大学动物科学学院动物医院对该场病例进行病原学检测和诊断，现报道如下。

1 发病情况及临床症状

该猪场共存栏猪30 头，仔猪发病初期出现食欲减退、懒动、喘气、体温升高等现象。 随着病程的进一步发展，出现精神沉郁，其中部分发病仔猪耳部发绀、流黏性鼻液、咳嗽、呼吸困难、步态不稳。 4 天后发病仔猪卧地不起，母猪流产，个别猪出现呕吐，随后食欲废绝、呼吸困难，最终衰弱死亡。 病程5 天，发病 5 头，死亡 3 头，病死率为60% 。

2 病理变化

病死猪口腔内有白沫、皮肤有红点。 剖检病死猪可见：心肌软化；脾脏边缘锯齿状梗死；胆囊肿大；肺脏萎缩，间质变宽，有实质性病变(见图1)；肾脏表面有瘀斑，肾锥体充血，肾内出血(见图2)；膀胱内膜充血(见图3)；全身淋巴结不同程度肿大、充血、出血；后肢膝关节有积液。

3 实验室检查

3.1 细菌分离培养无菌操作取病死猪的心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏，划线接种血清琼脂培养基(含胎牛血清)，37 ℃需氧和厌氧培养 24 ～72 h。 结果：培养基上未见菌落生长。

3.2 相关病毒分子生物学检测采集病死猪的心脏、淋巴结、肺脏、肝脏和脾脏混合研磨，反复冻融3 次，匀浆器匀浆 20 min 后收集匀浆液。 匀浆液12 000 r/min 离心 10 min，取上清液 200 μL，用TaKaRa Mini BEST Viral DNA/RNA Extraction Kit Ver.5.0 试剂盒提取总DNA/RNA 进行猪伪狂犬病、猪圆环病毒2 型PCR 扩增，猪蓝耳病毒、猪瘟病毒RT-PCR 扩增(扩增目的片段及引物见表1)。 反应结束后取 PCR 产物 5 μL 于 1.5% 1×TAE 琼脂糖凝胶中电泳检测(90 V，35 min)，凝胶成像系统拍照记录。结果：病料中检测出猪圆环病毒2 型(PCV2)ORF2基因片段283 bp 及猪瘟病毒(CSFV)E 2基因片段516 bp 特异性条带(见图4、图5)，未检出猪伪狂犬病毒(PRV)及高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)。

表1 PCR 扩增目的片段及引物

4 结论

根据发病情况调查、临床症状、病理变化、细菌分离培养、相关病毒分子生物学检测，确诊发病死亡猪为猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2 型(PCV2)混合感染。

5 防治建议

(1)病死猪及污染物进行无害化处理。 (2)淘汰发病猪，对可疑病猪进行隔离饲养。 (3)对发病猪所在圈舍及使用器械进行彻底清洁和消毒并空栏通风7 天以上，防止病毒进一步扩散。 (4)改善养殖条件，保证饲料质量，提供干净的饮用水并添加电解多维，猪场适度通风，保证畜舍内温度相对稳定。(5)健康猪紧急进行猪圆环病毒2 型、猪瘟病毒疫苗补免，同时加强饲养管理，定期监测抗体，一旦出现阳性猪立即净化淘汰。 (6)对其他常见传染病也要进行疫苗接种，减少各种应激因素。

6 讨论

秋冬季节是猪呼吸道及繁殖障碍疾病的高发期，贵阳市秋冬交际时温差较大、气候潮湿，容易引起呼吸道疾病和多种病毒混合感染。 根据相关报道，近年来贵州省部分地区临床病例中PCV2 混合感染率较高，可能是由于PCV2 引发猪免疫力下降而导致的继发感染[1]。 CSFV、PCV2 皆可导致免疫抑制性疾病，没有特效药物治疗，应以预防为主，对新生仔猪应按要求进行疫苗免疫，免疫后21 天采集血液进行ELISA 抗体检测免疫是否合格，不合格者要进行补免[2]。 同时猪场应注重猪群保健，补充所需维生素，增强猪群体质及抵抗力，保持圈舍卫生，灭鼠驱虫，减少传染源，以防止类似疾病的发生[3]。