锦灯笼中酸浆苦素类成分的分离与鉴定

夏天乙，钟仁兴，丁子禾，杨燕妮，王武静，王毅，刘禹熙，商立峰，舒尊鹏

(1.广东省中药饮片规范化炮制工程技术研究中心，广东 广州 510006； 2.广东药科大学中药学院，广东 广州 510006； 3.广州峰华舒宝生物科技有限公司，广东 广州 510006； 4.广东安道医疗器械有限公司，广东 佛山 528200)

锦灯笼是茄科酸浆属多年生草本植物，果实、根及全草皆可入药，味酸、苦，性寒，具有清热、解毒、利咽化痰、利尿通淋等作用，用于咽痛、音哑、痰热咳嗽、小便不利，外治天疱疮、湿疹[1]。目前，已知锦灯笼中含有甾体类、黄酮及其苷类、苯丙素类、生物碱类和脂肪酸类等多种活性成分[2]。甾体类成分中的酸浆苦素类化合物是锦灯笼中主要的活性化合物，日本学者在1970年从锦灯笼中分离鉴定的结构，之后大量physalin类化合物被发现报道[3]。相关药理实验表明，此类化合物具有抗菌、抗感染[4]、体外抗肿瘤细胞增殖和体内抗肿瘤移植性[5]等多种生物活性。

为更深入探究此类活性化合物，本课题组对锦灯笼的50%乙醇提取物进行了更为系统的化学成分提取分离研究，分离鉴定了7个化合物，为锦灯笼中酸浆苦素的进一步开发利用提供了参考依据。

1 仪器与材料

德国Bruker AM-400型核磁共振波谱仪；美国Nicolet公司的Magna FTIR-750型傅立叶变换红外光谱仪；美国Thermo Finnigan公司MAT-95型质谱仪；美国GLSCIRNCES Inc. Inertsil PREP-ODS；柱色谱硅胶和薄层色谱用硅胶(青岛海洋化工有限公司)；乙醇(EtOH)、甲醇(MeOH)和二氯甲烷(CH2Cl2)等溶剂均为分析纯(上海国药集团化学试剂有限公司)。

锦灯笼购自广州市药材市场，经广东药科大学中药资源系李书渊教授鉴定为锦灯笼PhysalisalkekengiL. var.franchetii(Mast.) Makino的宿萼。

2 提取与分离

取锦灯笼6 kg，用体积分数70%乙醇回流提取2次，每次2 h，减压回收溶剂得到乙醇提取物1.5 kg，使用大孔吸附树脂柱色谱吸附，再用体积分数50%乙醇进行洗脱，收集第0.3～0.8 BV间的洗脱液，取洗脱物105 g进行硅胶柱色谱，依次用CH2Cl2-MeOH(体积比9∶1)、CH2Cl2-MeOH(体积比5∶1)、CH2Cl2-MeOH (体积比1∶1)、MeOH和水进行洗脱，洗脱至无色，分离得到9个部分P1～P9。

将P3用甲醇重结晶得到化合物1。将P4进行硅胶柱色谱，用CH2Cl2-MeOH (体积比10∶1)洗脱，分离得到7个部分(P4-1～P4-7)，P4-4经ODS柱色谱后用HPLC[ODS柱，流动相MeOH-H2O(体积比40∶60)]精制得到化合物2。将P1进行柱色谱，依次用CH2Cl2、CH2Cl2-MeOH(体积比9∶1)洗脱，分离得到3个部分(P1-1～P1-3)，P1-2用甲醇重结晶得到化合物3。P1-3经ODS柱色谱后用HPLC(ODS柱，流动相MeOH-H2O 45∶55)分离得到化合物4和5。将P1-3经反相ODS柱色谱后使用HPLC(ODS柱，流动相MeOH-H2O 60：40)精制得到化合物6。P1用甲醇重结晶得化合物7。

3 结构鉴定

化合物1：白色无定形粉末(甲醇)。ESI-MSm/z：544 [M+NH4]+，分子式为C28H30O10。1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ：6.04(1H，dd，J=2.0，10.4 Hz， H-2)，6.59(1H，ddd，J=2.0，4.8，10.4 Hz，H-3)，3.65(1H，dt，J=2.8，19.6 Hz，H-4a)，2.69(1H，dt，J=2.8，19.6 Hz，H-4b)，4.16(1H，br s，H-6)，2.85(2H，m，H-7)，3.13(1H，m，H-8)，4.20(1H，dd，J=8.0，10.8 Hz，H-9)，2.37(1H，m，H-11a)，1.54(1H，m，H-11b)，2.32(1H，d，J=9.2 Hz，H-12a)，1.98(1H，dd，J=9.2，15.6 Hz，H-12b)，3.13(1H，s，H-16)，1.58(3H，s，H-19)，2.29(3H，s，H-21)，4.69(1H，t，J=2.8 Hz，H-22)，2.07(2H，d，J=2.8 Hz，H-23)，2.95(1H，d，J=4.4 Hz，H-25)，4.76(1H， dd，J=4.4，13.2 Hz，H-27a)，3.98(1H，d，J=13.2 Hz，H-27b)，1.30(3H， s，H-28)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：204.3(C-1)，127.9(C-2)，141.6(C-3)，35.6(C-4)，76.7(C-5)，73.7(C-6)，27.4(C-7)，39.0(C-8)，30.7(C-9)，54.4(C-10)，25.3(C-11)，24.9(C-12)，79.4(C-13)，107.5(C-14)，209.5(C-15)，54.8(C-16)，80.7(C-17)，172.8(C-18)，13.3(C-19)，81.1(C-20)，21.7(C-21)，76.8(C-22)，30.5(C-23)，31.9(C-24)，50.1(C-25)，166.8(C-26)，60.6(C-27)，26.1(C-28)。以上数据与文献[6]报道的酸浆苦素D进行比较，两者基本一致，鉴定化合物1为酸浆苦素D(physalin D)。

化合物2：白色无定形结晶(甲醇)。UV(MeOH)λmax：228 nm，结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测分子式为C28H32O11。1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ：6.04(1H，dd，J=2.0，10.4 Hz，H-2)，6.59(1H，ddd，J=2.0，4.8，10.4 Hz， H-3)，3.35(1H，dt，J=2.8，19.6 Hz，H-4a)，2.69(1H，dt，J=2.8，19.6 Hz， H-4b)，2.85(2H，m，H-6)，4.20(1H，dd，J=8.0，10.8 Hz，H-7)，3.13(1H，m，H-8)，4.16(1H，m，H-9)，2.37(1H，m，H-11a)，1.54(1H， m，H-11b)，2.32(1H，d，J=9.2 Hz，H-12a)，1.98(1H，dd，J=9.2，15.6 Hz， H-12b)，3.13(1H，s，H-16)，1.30(3H，s，H-19)，2.29(3H，s，H-21)，4.69(1H，t，J=2.8 Hz，H-22)，2.07(2H，d，J=2.8 Hz，H-23)，2.95(1H，d，J=4.4 Hz，H-25)，4.76(1H，dd，J=4.4，13.2 Hz，H-27a)，3.98(1H，d，J=13.2 Hz，H-27b)，1.58(3H，s，H-28)；13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：203.8(C-1)，128.3(C-2)，145.1(C-3)，34.7(C-4)，78.9(C-5)，31.0(C-6)，71.6(C-7)，42.7(C-8)，31.4(C-9)，55.8(C-10)，31.0(C-11)，26.1(C-12)，80.2(C-13)，107.5(C-14)，209.5(C-15)，55.8(C-16)，81.4(C-17)，173.0(C-18)，9.5(C-19)，81.9(C-20)，22.3(C-21)，79.8(C-22)，31.4(C-23)，32.7(C-24)，50.8(C-25)，167.7(C-26)，57.2(C-27)，25.6(C-28)。以上数据与文献[7]报道的酸浆苦素E进行比较，二者基本一致，鉴定化合物2为酸浆苦素E(physalin E)。

化合物3：白色无定形结晶(甲醇)。紫外光谱UV(MeOH) λmax：224 nm。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测分子式为28H30O9。1H-NMR(400 MHz， C5D5N)δ：6.57(1H，ddd，J=2.0，4.8，0.4 Hz，H-2)，5.85(1H，dd，J=2.8，10.4 Hz，H-3)，5.40(1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，1.06(3H，s，H-19)，2.38(3H，s，H-21)，4.76(1H，t，J=2.8 Hz，H-22)，2.97(1H，d，J=3.6 Hz，H-25)，4.82(1H，dd，J=3.6，12.4 Hz，H-27a)，4.00(1H，d，J=12.4 Hz，H-27b)，1.32(3H，s，H-28)。13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：203.2(C-1)，127.8(C-2)，145.4(C-3)，34.3(C-4)，136.1(C-5)，124.8(C-6)，30.7(C-7)，41.2(C-8)，32.9(C-9)，53.1(C-10)，25.4(C-11)，25.4(C-12)，79.9(C-13)，107.6(C-14)，209.8(C-15)，55.9(C-16)，81.9(C-17)，167.8(C-18)，17.3(C-19)，81.4(C-20)，22.6(C-21)，77.6(C-22)，30.7(C-23)，50.9(C-25)，167.7(C-26)，55.9(C-27)，25.7(C-28)。以上数据与文献[8]报道的酸浆苦素B进行比较，二者基本一致，鉴定化合物3为酸浆苦素B(physalin B)。

化合物4：白色无定形结晶(甲醇)。UV(MeOH)λmax：226 nm。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测分子式为C28H30O10。1H-NMR(400 MHz，C5D5N)δ：6.51(1H，ddd，J=2.0，4.8 Hz，10.4，H-2)，5.86(1H，dd，J=2.8，10.4 Hz，H-3)，5.58(1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，3.87(1H，t，J=11.6 Hz，H-7)，0.99(3H，s，H-19)，2.02(3H，s，H-21)，4.71(1H，t，J=2.8 Hz，H-22)，2.97(1H，d，J=3.6 Hz，H-25)，4.82(1H，dd，J=3.6，12.4 Hz，H-27a)，4.00(1H，d，J=12.4 Hz，H-27b)，1.70(3H，s，H-28)。13C-NMR(100 MHz，C5D5N)δ：203.4(C-1)，129.2(C-2)，146.2(C-3)，37.6(C-4)，141.3(C-5)，128.8(C-6)，64.1(C-7)，49.3(C-8)，33.9(C-9)，55.6(C-10)，32.6(C-11)，31.8(C-12)，81.8(C-13)，103.6(C-14)，215.3(C-15)，56.1(C-16)，84.2(C-17)，174.3(C-18)，15.8(C-19)，84.7(C-20)，23.0(C-21)，77.0(C-22)，33.3(C-23)，55.8(C-25)，163.8(C-26)，65.9(C-27)，31.1(C-28)。以上数据与文献[9]报道的酸浆苦素N进行比较，二者基本一致，鉴定化合物4为酸浆苦素N(physalin N)。

化合物5：白色无定形结晶(甲醇)。UV(MeOH)λmax：226 nm。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测分子式为C28H32O10。1H-NMR(400 MHz， C5D5N)δ：6.53(1H，ddd，J=2.0，4.4，10.0 Hz，H-2)，5.78(1H，dd，J=2.4，10.0 Hz，H-3)，5.85(1H，dd，J=1.6，6.4 Hz，H-6)，3.87 (1H，t，J= 11.6 Hz，H-7)，1.46(3H，s，H-19)，2.07(3H，s，H-21)，4.70(1H，t，J=2.8 Hz，H-22)，1.23(1H，d，J=7.6 Hz，H-27)，1.00(3H，s，H-28)。13C-NMR(100 MHz， C5D5N)δ：203.4(C-1)，129.2(C-2)，146.6(C-3)，35.6(C-4)，141.3(C-5)，128.8(C-6)，64.1(C-7)，47.9(C-8)，32.9(C-9)，54.0(C-10)，30.6(C-11)，25.8(C-12)，81.9(C-13)，103.9(C-14)，217.4(C-15)，55.1(C-16)，84.3(C-17)，174.4(C-18)，15.6(C-19)，84.5(C-20)，23.1(C-21)，78.5(C-22)，29.3(C-23)，40.9(C-25)，173.8(C-26)，18.4(C-27)，30.3(C-28)。以上数据与文献[9]报道的酸浆苦素O进行比较，二者基本一致，鉴定化合物5为酸浆苦素O(physalin O)。

化合物6：白色无定形结晶(甲醇)。UV光谱(MeOH)λmax：226 nm。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测分子式为C28H32O10。1H-NMR(400 MHz， C5D5N)δ：6.54(1H，dd，J=10.4，6.0 Hz，H-2)，5.85(1H，d，J=10.4 Hz，H-3a)，6.54(1H，dd，J=10.4，6.0 Hz，H-3b)，5.38(1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，1.04(3H，s，H-19)，2.38(3H，s，H-21)，4.76(1H，t，J=2.8 Hz，H-22)，2.88(1H，d，J=3.6 Hz，H-25)，4.82(1H，dd，J=3.6 Hz，12.4，H-27a)，4.00(1H，d，J=12.4 Hz，H-27b)，1.31(3H，s，H-28)。13C-NMR(100 MHz， C5D5N)δ：204.8(C-1)，125.7(C-2)，139.9(C-3)，116.5(C-4)，157.9(C-5)，71.6(C-6)，33.9(C-7)，49.3(C-8)，37.6(C-9)，55.6(C-10)，31.8(C-11)，32.6(C-12)，78.1(C-13)，107.7(C-14)，209.4(C-15)，55.9(C-16)，80.7(C-17)，24.4(C-18)，16.9(C-19)，84.5(C-20)，21.5(C-21)，76.2(C-22)，33.3(C-23)，49.2(C-25)，167.1(C-26)，60.7(C-27)，24.4(C-28)。以上数据与文献[10]报道的酸浆苦素G进行比较，二者基本一致，鉴定化合物6为酸浆苦素G(physalin G)。

化合物7：白色无定形结晶(甲醇)。UV光谱(MeOH) λmax：226 nm。结合1H-NMR谱和13C-NMR谱，推测分子式为C28H32O10。1H-NMR(400 MHz， C5D5N)δ：5.98(1H，dd，J=1.6，10.0 Hz，H-2)，6.59(1H，dq，J=2.4，10.0 Hz，H-3)，3.00(1H，m，H-4a)，2.48(1H，m，H-4b)，5.85(1H，dd，J=1.2，10.0 Hz，H-6)，6.30(1H，dd，J=4，10.0 Hz，H-7)，2.91(1H，m， H-8)，2.98(1H， m， H-9)，2.53(1H， m，H-11a)，2.05(1H， m， H-11b)，2.91(1H，m，H-12a)，2.49(1H，m，H-12b)，3.28(1H，s，H-16)，1.00(3H，s，H-19)，2.08(3H，s，H-21)，4.73(1H，dd，J=4.4，2.4 Hz，H-22)，1.58(1H，m，H-23a)，2.02(1H，m，H-23b)，4.82(1H，dd，J=2.8，12.4 Hz， H-27a)，4.31(1H，d，J=12.4 Hz，H-27b)，1.51(3H，s，H-28)；13C-NMR(100 MHz， C5D5N)δ：204.2(C-1)，129.8(C-2)，142.8(C-3)，39.8(C-4)，74.0(C-5)，132.6(C-6)，130.3(C-7)，50.1(C-8)，33.9(C-9)，55.7(C-10)，27.4(C-11)，31.7(C-12)，81.5(C-13)，81.5(C-14)，175.2(C-15)，50.4(C-16)，85.5(C-17)，176.1(C-18)，17.8(C-19)，84.2(C-20)，23.2(C-21)，78.2(C-22)，30.8(C-23)，32.0(C-24)，42.8(C-25)，171.6(C-26)，63.0(C-27)，31.7(C-28)。以上数据与文献[11]报道的酸浆苦素P进行比较，二者基本一致，鉴定化合物7为酸浆苦素P(physalin P)。

4 讨论

本研究从锦灯笼中分离得到7个单体化合物，分别鉴定为酸浆苦素D(1)、酸浆苦素E(2)、酸浆苦素B(3)、酸浆苦素N(4)、酸浆苦素O(5)、酸浆苦素G(6)以及酸浆苦素P(7)。据文献报道，酸浆苦素D能够抑制破骨细胞生成和骨质流失[12]；酸浆苦素B和E具有一定的抗感染、抗菌作用，并且酸浆苦素B活性较酸浆苦素E强[13]；酸浆苦素B和G能够抑制淋巴细胞功能，可防止小鼠异基因异位心脏移植排斥[14]；酸浆苦素N、酸浆苦素O和P目前尚未有相关活性研究报道，有待进一步开发利用。另外，根据本课题组的研究和相关文献报道，酸浆苦素类的甾体化合物具有广泛的药理活性[4,15]，具有很大的开发前景。

目前，国内尚未有统一的酸浆苦素类成分归属与鉴定的文献报道，本次研究归属了该7个化合物的详细谱学数据作为当前相关研究的补充，以供参考。本研究内容仅限于从锦灯笼中提取分离酸浆苦素类化合物，所获得的化合物的药理活性及作用机制仍需进一步研究。