子宫肌瘤患者VEGF、VEGFR2 表达水平与肌瘤数量、直径的相关性分析

张莹

（河南省郑州市第六人民医院 郑州 450000）

子宫肌瘤是女性常见的生殖系统良性肿瘤，发病机制临床尚未阐明，多认为与性激素水平密切相关，通过多个环节促进肌瘤生长[1]。近年来，有学者提出血管生成的核心因子，如血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）在疾病发生和发展中起到重要作用，但临床相关研究报告较少[2]。鉴于此，本研究探讨子宫肌瘤患者VEGF、VEGFR2 表达水平与肌瘤数量、直径的相关性。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2018 年8 月～2020 年3 月我院收治的97 例子宫肌瘤患者，年龄57～77 岁，平均（65.39±6.35）岁；肌瘤类型：肌壁间肌瘤56 例，其他肌瘤41 例。本研究通过医院医学伦理委员会审核同意。

1.2 入选标准（1）纳入标准：符合《妇产科学》[3]中的相关诊断；入组前均未经药物治疗；患者或其家属签署知情同意书；均行子宫肌瘤手术治疗。（2）排除标准：伴有全身感染、免疫障碍等疾病；伴有心、肝、肾等器官功能异常；伴有其他良性肿瘤或恶性病变。

1.3 检查方法

1.3.1 超声检查 所有患者均采用飞利浦公司生产的iU22 型超声诊断仪行超声检查，探头频率为3.5～5.0 MHz，检查前嘱咐患者憋尿、充盈膀胱，检查时将探头置于耻骨联合上方，行多方位扫查，探查子宫肌瘤直径、数量情况，并仔细记录相关数据。

1.3.2 VEGF、VEGFR2 检测（1）收集标本。子宫肌瘤术后取患者3 cm3新鲜的病理组织，标本组织用生理盐水清洗后，放入液氮中冷冻储存。（2）试剂和仪器。选购Bio-RaD 公司生产的电泳、显影以及转膜等设备；选购Dupont 公司生产的PVDF 膜；选购上海酶联公司生产的ML-dr3518 型酶标仪；选购Beck-man 公司Microfuge 20 型低温高速离心机；鼠抗人VEGF 和VEGFR2 单抗购自于Santa-Cruz 公司；HRP 标记以及BCA 蛋白定量试剂盒自购于上海酶联科技公司。（3）标本检测。取出标本后将其剪碎，放入PBS 缓冲液中清洗两遍后，加入1 ml 的总蛋白提取液，摇匀后进行冰浴，同时进行30 min 振摇处理；振摇结束后，使用低温高速离心机，在4℃环境下，以15 000 r/min 离心20 min，取上层清夜，保存于-30℃环境中；使用DSD-PAGE 电泳对50 μg 总蛋白样品液处理，电镀结束后进行转膜以及封闭处理，封闭后可实施一、二抗处理。但在PVDF 膜处理过程中，应使用KCTM 显色处理，并将结果在X 胶片上曝光，与此同时，对样本可进行显影以及定影处理，以上步骤处理完后，可参考鼠抗GAPDH 单抗（1:5 000）确定VEGF、VEGFR2 水平。

1.4 统计学方法 采用SPSS23.0 软件进行数据处理，以（±s）表示计量资料，组间用独立样本t检验，计数资料用%表示，采用χ2检验，分别作Logistic 回归分析，检验VEGF、VEGFR2 水平对子宫肌瘤直径、数量的影响，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 超声检查肌瘤数量、直径 入组97 例子宫肌瘤患者中，经超声检查有56 例肌瘤数量＜2 个，肌瘤数量（1.52±0.32）个，有41 例肌瘤数量≥2 个，肌瘤数量（2.66±0.45）个；且经超声检查，有32 例肌瘤直径＜5 mm，肌瘤直径为（3.26±1.01）mm，有65例肌瘤直径≥5 mm，肌瘤直径为（7.59±2.15）mm。

2.2 不同肌瘤数量、直径VEGF、VEGFR2 水平比较肌瘤数量＜2 个患者的VEGF、VEGFR2 水平低于肌瘤数量≥2 个患者，且肌瘤直径＜5 mm 患者的VEGF、VEGFR2 水平低于肌瘤直径≥5 mm 患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1、表2。

表1 不同肌瘤数量VEGF、VEGFR2 水平对比（ng/ml，±s）

表1 不同肌瘤数量VEGF、VEGFR2 水平对比（ng/ml，±s）

表2 不同肌瘤直径VEGF、VEGFR2 水平对比（ng/ml，±s）

表2 不同肌瘤直径VEGF、VEGFR2 水平对比（ng/ml，±s）

2.3 Logistic 回归分析结果 将子宫肌瘤的数量作为因变量（1=≥2 个，0=＜2 个），分别将VEGF、VEGFR2 作为协变量，经Logistic 回归分析结果显示，VEGF、VEGFR2 水平升高均可能是子宫肌瘤数量≥2 个的影响因素（OR＞1，P＜0.05）；将子宫肌瘤的直径作为因变量（1=≥5 mm，0=＜5 mm），分别将VEGF、VEGFR2 作为协变量，经Logistic 回归分析结果显示，VEGF、VEGFR2 水平升高均可能是子宫肌瘤直径≥5 mm 的影响因素（OR＞1，P＜0.05）。见表3、表4。

表3 VEGF、VEGFR2 水平对子宫肌瘤数量影响的多因素分析

表4 VEGF、VEGFR2 水平对子宫肌瘤直径影响的多因素分析

3 讨论

目前临床尚未明确子宫肌瘤的发病机制，药物和手术均可治疗该疾病，但具体临床治疗方案仍需依据患者肌瘤数量及直径进行制定，故临床早期准确诊断肌瘤数量及其直径可为治疗方案的制定提供重要依据。

临床部分学者认为，血管生长是肿瘤发生和发展的重要环节[4～5]。本研究结果显示，肌瘤数量＜2 个患者的VEGF、VEGFR2 水平低于肌瘤数量≥2 个患者，且肌瘤直径＜5 mm 患者的VEGF、VEGFR2水平低于肌瘤直径≥5 mm 患者，且经Logistic 回归分析检验结果显示VEGF、VEGFR2 水平升高均可能是子宫肌瘤数量≥2 个、肌瘤直径≥5 mm 的影响因素。VEGF 是人体中比较特殊的血管内皮生长因子，对促进血管生成有重要作用。该因子是一种有效的促有丝分裂原，对内皮细胞的分化有促进作用，可提高目标细胞的特异性，有助于血管生成，同时可将血管内皮细胞转化为血管胶原，加强毛细血管样结构的形成。此外，该因子还可增加微血管的通透性，对内皮细胞分泌组织蛋白酶有诱导作用，增强内皮细胞和血浆蛋白通透性，诱导间质产生，形成新血管，从而对肿瘤生长起到促进作用[6～7]。VEGFR 是膜蛋白受体，在人体结构组织中，可分为VEGFR1、VEGFR2 以 及 VEGF 三 种 分 型，VEGFR1 和VEGFR2 结合，相当于EGF-A 特异性结合，可促进人体内皮细胞分裂增长、新生血管生成，以及提高人体血管通透性[8]。且VEGFR1、VEGFR2 在细胞外区共有7 个免疫球蛋白样结构，分别为络氨酸激酶序列和跨膜区域。但VEGFR1 和VEGF 的相互作用较弱，其表达主要依赖于缺氧诱导因子HIF-1，但目前临床尚未明确该因子功能。VEGFR2 则是血管生成、调节内皮细胞分裂增生和微血管通透性的重要因素之一[9～10]。在临床动物实验中，猪的动脉内皮细胞内内源性VEGFR1 和VEGFR2 水平较低，而当猪感染质粒的VEGFR2 后，则和VEGF 有一定反应，且可和VEGF 结合，激发VEGFR2 本身酶活性，激活信号通路，最终起到抑制细胞凋亡、激发细胞增殖的作用。但转染VEGFR1，则对VEGF 无任何反应，以上可见VEGF 以及VEGFR2 在肿瘤发生和发展中的重要作用。

综上所述，VEGF、VEGFR2 表达水平与子宫肌瘤患者肌瘤数量、直径有密切联系，临床准确检测VEGF、VEGFR2 表达水平可为治疗方案制定提供参考依据。