血清雌激素及IL-17A 与原发性干燥综合征的相关性研究

王 莉，许 飞，杜文清，朱 蓉

原发性干燥综合征（pSS）是以外分泌腺受累为主的慢性自身免疫性疾病，其特征是唾液腺和泪腺导管周围单核细胞浸润，引发自身免疫反应，导致内皮细胞损伤及凋亡。同时，pSS 还可累及腺体外器官，包括关节、肝脏、肺脏，脑和肾脏等［1］。pSS 的发病机制目前仍不十分清楚。已有文献报道女性雌激素（E2）可能在pSS 中具有保护性作用［2］，且pSS 的发病年龄通常在女性雌激素急剧下降的更年期前后，进一步提示女性雌激素水平可能在pSS 发病中具有重要作用。同时在pSS 动物模型中已发现效应性T 细胞与调节性T 细胞存在明显失衡，尤其效应性Th17 细胞在pSS 中发挥了重要的致病作用［3］，而Th17 的特征性及致炎性细胞因子为白细胞介素-17A（IL-17A）。本研究旨在进一步探讨E2及IL-17A在原发性干燥综合征中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择宁夏医科大学总医院风湿免疫科2017 年6 月-2018 年12 月收治的pSS 患者26例为研究对象，其中女性24 例，男性2 例；年龄26～64 岁，平均（49.72±12.65）岁；病程3 个月～21 年，平均病程43.23 个月。选取同期与年龄、性别相匹配的健康志愿者26 例作为对照组。pSS 纳入标准：符合原发性干燥综合征分类诊断标准［4］。排除标准：合并其它风湿性疾病，内分泌系统疾病；既往有卵巢手术史，多脏器功能衰竭。所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 ELISA 法检测血清雌激素和IL-17A 水平：取外周静脉血5 mL，室温放置2 h，以1 000 g 离心20 min，取上清液血清置于-80 ℃超低温冰箱储存。检测前将标准品震荡混匀，洗涤液按1∶20 稀释为洗涤缓冲液，分别往预先包被人雌二醇和IL-17A 抗体的包被微孔中依次加入标准品和样本，标准品孔各加不同浓度的标准品50 μl，样本孔中加待测样本50 μl，空白孔加样本稀释液50 μl。之后每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100 μl，用封板膜封住反应孔，37 ℃水浴锅温育60 min，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液350 μl，静置1 min。甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此反复4 次，然后每孔加入底物100 μl，37 ℃避光孵育15 min，每孔加入终止液50 μl，用酶标仪在450 nm 波长处测定各孔的OD 值。

1.2.2 其他免疫学指标检测：包括dsDNA、免疫球蛋白、补体C3、C4 由我院实验中心进行检测。

1.3 统计学方法：采用SPSS 19.0 软件进行统计学分析，计量资料用±s 表示，2 组间比较若符合正态分布采用t 检验，非正态分布采用Mann-Whitney U检验。相关性分析用Spearman 检验，检测指标的特异性和敏感性用ROC 曲线分析，应用GraphPad 5进行数据分析和作图，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2 组患者血清雌激素水平的比较：血清雌激素水平在pSS 患者与对照组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。然而由于血清雌激素水平受月经期影响，因此根据是否绝经进行分层分析发现绝经后女性pSS 患者血清雌激素水平低于对照组（P＜0.05），见图1。

2.2 2 组患者血清IL-17A 水平的比较及与临床指标的相关性：血清IL-17A 水平在pSS 患者中显著高于正常对照（P＜0.05）。同时与免疫性指标进行相关性分析显示，血清IL-17A 水平与免疫球蛋白IgG 呈正相关性（r=0.403 8，P＜0.05），见图2。

2.3 血清IL-17A 在pSS 诊断中的特异性和敏感性：通过ROC 其曲线下面积显示AUC 值为0.690 8，见图3-图4。

3 讨论

pSS 主要发生在女性绝经期前后，而绝经期最为重要的特征是体内雌激素水平的变化。本研究显示绝经后女性pSS 患者血清雌激素水平低于健康对照组，这与国外Sara 等学者的研究结果一致，他们发现女性pSS 患者的雌激素补充水平低于对照组，并且增加雌激素水平与pSS 的病情进展呈负相关性［2］。雌激素主要通过其受体ERα 和ERβ 在人体中发挥着重要的免疫调节作用［5］。已有研究发现人唾液腺上皮细胞（SGEC）同样有雌激素受体的表达，然而在体外培养pSS 患者的SGEC 发现，给予雌激素刺激后pSS 患者的SGEC 与对照组相比，其对雌激素反应明显减低［6］。此外，高雌激素水平通过抑制NF-KB 等免疫炎症通路，从而发挥抗炎症作用［7］。因此，本研究结果进一步提示绝经后雌激素水平减低可能参与了pSS 的发病。

IL-17A 主要是由Th17 细胞产生的促炎因子，在T 细胞介导的自身免疫性疾病中具有重要意义［8］。在pSS 小鼠模型中已观察到IL-17A 与炎症细胞浸润具有相关性，Lin 等人研究表明，IL-17A 基因缺陷小鼠的外分泌腺中无淋巴细胞浸润［9］。另一项研究表明，IL-17A 水平的增加与DNA 损伤诱导蛋白153（GADD153）的上调和白细胞黏附抑制剂Del-1 下调有关［10］。此外，IL-17A 也可以进一步上调其他致炎因子及炎症细胞的产生［11］。本研究结果显示血清IL-17A 在pSS 患者中高于健康对照组（P＜0.05），与Katsififis 的研究结果相一致［12］。同时本研究发现IL-17A 与免疫球蛋白IgG 水平呈正相关性。在pSS中，由于B 细胞功能亢进，导致大量免疫球蛋白的产生，并以免疫球蛋白IgG 增高最为多见，且已有文献报道免疫球蛋白IgG 水平与pSS 病情活动明显相关。因此，本研究结果也进一步提示IL-17A 可能通过增强B 细胞活性导致免疫球蛋白及自身抗体产生而参与pSS 的发病。而最新研究的结果也支持这一推测，Brinda 等学者研究发现IL-17 可以增强干眼病小鼠的B 细胞增殖和生发中心的形成。此外，IL-17 还促进B 细胞向浆细胞的分化［13］。本研究结果进一步说明IL-17A 是pSS 发病中重要的致炎因子。

ROC 是通过ROC 曲线下面积（即AUC 值）反映检测指标在疾病诊断中的特异性和敏感性，其AUC值介于0～1，AUC 值越大说明诊断特异性和敏感性越高［14］。本研究结果提示IL-17A 在pSS 诊断中具有一定的意义。