北沙参炮制工艺的优化

王凤娇，钟凌云，钟国跃，张寿文

（江西中医药大学，江西 南昌 330004）

北沙参为伞形科植物珊瑚菜Glehnia littoralisFr.Schmidt ex Miq 的干燥根，夏秋二季采挖，除去须根，洗净，稍晾，置沸水中烫后除去外皮干燥，或洗净直接干燥［1］，其性甘、微苦、微寒，归肺、胃经，具有清肺养阴、润肺止咳、益胃生津等功效［2］，主要化学成分有挥发油、糖苷、香豆素等，还含有淀粉、三萜酸、豆甾醇、磷脂、氨基酸等［3］。其中，香豆素类具有抗炎、抗菌、镇痛等作用［4］，主要包括补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素等［5］。

北沙参的炮制始于近代，《中药炮炙经验集成》中收载有切制、炒黄、蜜炙、米炒等方法，目前临床以切段生用为主，但各地炮制规范中仍有蜜炙存在；2015 年版《中国药典》未收录北沙参饮片含有量的测定方法。本实验同时测定其中补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素5 种香豆素的含有量，并以其为评价指标对炮制工艺进行优化，以期为该药材规范化生产提供科学依据，也为新版《中国药典》的修订提供参考。

1 材料

1.1 仪器 101-1A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海沪粤明科技仪器有限公司）；DFY-400 型摇摆式高速中药粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；KQ-500E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；C21-RK2106 型美的多功能电磁炉（广东美的生活电器制造有限公司）；铁锅（浙江苏泊尔股份有限公司）；Raynger ST20 型红外测温仪（美国Raytek 公司）；SQP 型电子天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司］；AE240 型电子天平（十万分之一，瑞士Mettler-Toledo 公司）；UItiMate 3000型高效液相色谱仪，配置PDA-3000 型二极管阵列紫外检测器、Chromeleon 工作站（美国Dionex 公司）。

1.2 试剂与药物 补骨脂素（批号17061203）、花椒毒素（批号17072005）、佛手柑内酯（批号17041303）、欧前胡素（批号wkq16121908）、异欧前胡素（批号wkq17050304）对照品（四川省维克奇生物科技有限公司，质量分数≥98%）。北沙参由内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司提供，经江西中医药大学中药鉴定学教研室葛菲老师鉴定为伞形科植物珊瑚菜Glehnia littoralisFr.Schmidt ex Miq的干燥根。汪氏蜂蜜（江西汪氏蜜蜂园有限公司）。乙腈为色谱纯；甲醇为分析纯；水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 生品制备 取长短粗细相似的药材9 份，按正交试验方案闷润一段时间、切制一定长度后放入电热恒温鼓风干燥箱中，设置不同温度进行干燥，取出，放凉，即得。

2.2 蜜炙品制备 将蜂蜜置于锅内，加热至徐徐沸腾后改用文火，保持微沸，除去泡沫及上浮蜡质，罗筛或纱布滤去死蜂、杂质，再倾入锅内，加热至116～118 ℃，当满锅鱼眼泡、用手捻之有黏性、两指间无长白丝出现时迅速出锅，作为炼蜜［1］。取生品各100 g，按正交试验方案加入含一定比例开水的炼蜜，拌匀，闷润，置于炒药锅中，按设定的不同温度（红外温度仪测定锅温）炒炙一段时间，取出，晾凉，筛去碎屑，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 色谱条件［6-8］Inertsil ODS-3 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相乙腈-水，梯度洗脱（0～5 min，40%～45% 乙腈；5～20 min，45%～80% 乙腈；20～30 min，80%～40% 乙腈）；体积流量1.0 mL／min；检测波长310 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。色谱图见图1。

图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various consituents

2.3.2 对照品溶液制备［9-10］精密称取补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素对照品适量，甲醇稀释定容，即得（各成分质量浓度分别为0.031、0.075、0.065、0.046、0.054 mg／mL）。

2.3.3 供试品溶液制备［11-13］取生品、蜜炙品粉末（过40 目）各约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加甲醇20 mL，称定质量，超声30 min，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.3.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液0.5、1、2、4、5、8 mL 至10 mL 量瓶中，甲醇稀释定容至刻度，摇匀，精密吸取10 μL，在“2.3.1”项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行回归，得方程分别为补骨脂素Y＝0.302 3X－0.198 1（r＝0.999 2），线性范围0.496～7.44 μg／mL；花椒毒素Y＝1.183 2X－0.995 9（r＝0.999 4），线性范围1.2～18 μg／mL；佛手柑内酯Y＝1.686 8X－1.043 3（r＝0.999 3），线性范围 1.04～15.6 μg／mL；欧前胡素Y＝0.707X－0.507 7（r＝0.999 2），线性范围0.736～11.04 μg／mL；异欧前胡素Y＝0.973 1X－0.693 5（r＝0.999 1），线性范围0.864～12.96 μg／mL。

2.3.5 精密度试验 精密吸取“2.3.2”项下对照品溶液10 μL，在“2.3.1”项色谱条件下进样测定6 次，测得补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素峰面积RSD 分别为0.76%、0.23%、0.12%、0.39%、0.42%，表 明仪器精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液10 μL，于0、2、4、12、24 h 在“2.3.1”项色谱条件下进样测定，测得补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素峰面积RSD 分别为0.57%、0.34%、0.25%、0.31%、0.52%，表 明溶液在24 h内稳定性良好。

2.3.7 重复性试验 精密称取同一生品粉末6 份，按“2.3.3”项下方法制备6 份供试品溶液，在“2.3.1”项色谱条件下进样测定，测得补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素含有量RSD 分别为0.68%、0.53%、0.34%、0.29%、0.46%，表明该方法重复性良好。

2.3.8 加样回收率试验 取含有量已知的生品、蜜炙品粉末各约1 g，各精密称定6 份，精密加入等量对照品溶液，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.3.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，生品中补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素平均加样回收率（RSD）分别为99.6%（0.63%）、99.8%（0.54%）、100.3%（0.32%）、98.8%（0.28%）、97.8%（0.46%），蜜炙品中分别为99.2%（0.64%）、99.8%（0.54%）、101.2%（0.33%）、98.7%（0.27%）、97.9%（0.48%）。

2.4 炮制工艺优化 以润制时间（A）、切段长度（B）、干燥温度（C）为影响因素，正交试验优化生品制备工艺，因素水平见表1；以炼蜜与水比例（A）、闷润时间（B）、炒炙温度（C）、炒炙时间（D）为影响因素，正交试验优化蜜炙品制备工艺，因素水平见表2。

表1 生品因素水平Tab.1 Factors and levels for raw products

表2 蜜炙品因素水平Tab.2 Factors and levels for honey-fried products

选择饮片性状及补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素含有量作为生品评价指标。参照2015 年版《中国药典》北沙参性状项下规定，将饮片性状评分标准确定为表面黄白色80～100 分，表面淡黄白色50～70 分，总分100分；精密吸取对照品溶液及生品1～9 号供试品溶液各10 μL，在“2.3.1”项色谱条件下进样测定，计算各成分含有量。再计算综合评分［14］，满分100 分，公式为：综合评分＝饮片性状评分×0.5＋补骨脂素含有量×0.1＋花椒毒素含有量×0.1＋佛手柑内酯含有量×0.1＋欧前胡素含有量×0.1＋异欧前胡素含有量×0.1，结果见表3，方差分析见表4。由此可知，因素B（切段长度）对试验结果有显著影响（P＜0.05）；最优工艺为A2B1C3，即润制24 h后切制5 mm 短段，60 ℃下干燥，烘干，取出，放凉，筛去碎屑。

选择饮片性状及补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、异欧前胡素含有量作为蜜炙品评价指标。参照2015 年版《中国药典》北沙参性状项下规定，将饮片性状评分标准［15］确定为深黄色有光泽40 分，黄色略有光泽30 分，黄白色无光泽20 分；不黏手30 分，略黏手20 分，黏手10 分；蜜香味浓30 分，有蜜香味20 分，蜜香味淡10 分，满分100 分，再同法计算各成分含有量和综合评分，结果见表5，方差分析见表6。由此可知，因素A（炼蜜与水比例）、C（温度）对试验结果有显著影响（P＜0.05）；最优工艺为A2B2C3D2，即炼蜜与水按1∶1 比例混合后加入干净饮片，拌匀，闷润40 min，150 ℃（锅底温度）下炒炙30 min，取出，放凉，筛去碎屑，每100 kg 饮片加炼蜜25 kg。

表3 生品试验设计与结果Tab.3 Design and results of tests for raw products

表4 生品方差分析Tab.4 Analysis of variance for raw products

表5 蜜炙品试验设计与结果Tab.5 Design and results of tests for honey-fried products

表6 蜜炙品方差分析Tab.6 Analysis of variance for honey-fried products

2.5 验证试验 取3 份粗细大小均匀的药材，按“2.4”项下优化工艺制备生品，发现其表面呈黄白色，质坚而脆，各成分含有量稳定，RSD（n＝3）＜1%；取3 份生品，每份100 g，按“2.4”项下优化工艺制备蜜炙品，发现其表面呈深黄色，不粘手，具有蜜香气，各成分含有量稳定，RSD（n＝3）＜1%。

3 讨论

本实验所选取的外观性状指标是较直观的色泽、气味等，可通过眼观、鼻闻、手触等传统饮片质量鉴别方法进行考察，可避免单纯以化学指标定质量的不足，从而可更全面地对北沙参质量进行判断。另外，北沙参中补骨脂素、花椒毒素、欧前胡素、异欧前胡素具有镇痛、抗炎、抗菌作用，而佛手柑内酯具有抗肿瘤作用，同时这5 种香豆素又为该药材主要化学成分，故以其为评价指标考察炮制工艺。

正交试验考察指标时采用了综合评分，将外观性状和内在质量相结合，可较客观地反映各因素之间的关系，以及因素水平对北沙参生品、蜜炙品质量的影响。本实验通过该方法筛选出北沙参最佳炮制工艺，在闷润时间、切制长度、干燥温度方面确定了生品具体参数，而在炼蜜与水比例、闷润时间、炒炙温度、炒炙时间方面确定了蜜炙品的具体参数，可为规范药材炮制、指导企业生产、保证饮片质量提供参考依据。