酚氨咖敏颗粒质量标准研究

董秋香，张月寒，姚 辉，付萍萍，王 腾，王 楠

（河北省保定市食品药品检验所，河北 保定 071051）

酚氨咖敏颗粒曾用名为克感敏颗粒、克感敏冲剂，是解热镇痛类处方药，用于治疗感冒、发热、头痛、神经痛及风湿痛等疾病。该药由对乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因及马来酸氯苯那敏4种成分组成，现行标准［1］中缺少主要成分对乙酰氨基酚的鉴别及含量测定，其他成分的含量选用2种不同的高效液相色谱（HPLC）系统分别测定。酚氨咖敏片现行标准［2］采用HPLC法测定4种成分的含量，因各成分处方量及其紫外吸收强度差异均较大，需分别制备2种供试品溶液在不同波长下测定，无法实现同时检测。郭琦等［3］报道，采用气相色谱（GC）内标法可同时测定4种成分。为加强对该药品的质量控制并简化操作，本研究中建立了快速定性鉴别4种成分的薄层色谱（TLC）法，以及可同时测定4种成分含量的GC外标法。现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent 7820A型气相色谱仪，包括FID检测器，G4513A型自动进样器，EC Chrom Elite工作站（美国Agilent公司）；Sartorius BP211D型电子分析天平（德国Sartorius公司，十万分之一）；CAMAG型薄层色谱成像系统（瑞士Camag公司）；SK250HP型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）。

1．2 试药

酚氨咖敏颗粒（市售品，批号分别为16062211，15121471，15121375）；对乙酰氨基酚对照品（批号为100018-201610，纯度为99．9%），氨基比林对照品（批号为100503-201302，纯度为99．9%），咖啡因对照品（批号为171215-201512，纯度为99．9%），马来酸氯苯那敏对照品（批号为100047-201507，纯度为99．7%），均购自中国食品药品检定研究院；硅胶GF254板（德国Merck公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 薄层色谱鉴别

称取对乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因、马来酸氯苯那敏对照品适量，加三氯甲烷制成质量浓度分别为20，25，6，0．4 mg／mL的混合溶液，必要时滤过，取滤液作为对照品溶液。称取本品细粉适量（约相当于马来酸氯苯那敏4 mg），加三氯甲烷10 mL，振摇使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液。除去4种待测成分，模拟处方（生产企业提供）按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。分别吸取上述3种溶液各10μL，点于同一硅胶GF254板上，三氯甲烷-甲醇-丙酮-乙醚-氨水（9∶0．8∶1∶5∶0．2，V／V／V／V／V）为展开剂，展开（展开距离约为8 cm），取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。紫外光灯下，4种待测成分完全分离，比移值分别为0．1，0．4，0．5，0．8，3批样品所显斑点颜色与位置分别与对照品相同，辅料无干扰。色谱图见图1。

图1 薄层色谱图

2．2 含量测定（GC法）

2．2．1 色谱条件

色谱柱：TR-1弹性石英毛细管柱（30 m×0．32 mm，0．25μm，S／N：11019B03，Thermo科技公司）；升温程序：起始温度为180℃，保持1 min，再以8℃／min的速率升至240℃，保持2 min；进样口温度：240℃；分流比：20∶1；载气：氮气；柱流量：1．5 mL／min；检测器：FID，温度260℃；氢气流量：30 mL／min；空气流量：400 mL／min；尾吹流量：25 mL／min；进样量：1μL。

图2 气相色谱图

2．2．2 溶液制备

对照品溶液：取对乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因、马来酸氯苯那敏对照品适量，精密称定，加乙醇制成质量浓度分别为15．0，10．0，3．0，0．2 mg／mL的混合溶液，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液5 mL，置50 mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取本品10包，精密称定内容物总质量，研细，取细粉适量（约相当于马来酸氯苯那敏1 mg），精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50 mL，超声（功率250 W，频率53 kHz）提取20 min，放冷，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：除去4种待测成分，以模拟处方按供试品溶液制备方法制备。

2．2．3 方法学考察

专属性试验：取2．2．2项下3种溶液各1μL，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图2。结果，在此色谱条件下，4种待测成分峰与相邻峰分离良好，分离度均大于1．5，辅料对测定无干扰。

线性关系考察：精密量取对照品贮备液适量，加流动相等倍逐级稀释成系列质量浓度的对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。分别以4种待测成分的质量浓度（X，μg／mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，对乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和马来酸氯苯那敏的回归方程分别为Y乙＝3．999×103X乙-1．238×105（r＝0．999 9），Y氨＝4．506×103X氨＋3．736×104（r＝0．999 9），Y咖＝2．391×106X咖-2．125×103（r＝1．000 0）和Y马＝3．922×106X马＋5．964×103（r＝0．999 9）。结果表明，该4种成分质量浓度分别在186．3～596 0μg／mL，124．9～3 996μg／mL，38．24～1 224μg／mL，2．525～80．80μg／mL范围内与峰面积线性关系良好。

定量限（LOQ）测定：取2．2．2项下的对照品贮备液适量，等倍逐级稀释，按拟订色谱条件进样测定。结果对乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和马来酸氯苯那敏的LOQ分别为0．09，0．06，0．10，0．07 ng。

精密度试验：取2．2．2项下混合对照品溶液适量，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林和马来酸氯苯那敏峰面积的RSD分别为0．69%，0．50%，0．65%，0．68%（n＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取样品（批号为15121471），依法制备供试品溶液，分别于室温下放置0，1，2，4，6，8，10，12，24 h时，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果对乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和马来酸氯苯那敏色谱峰面积的RSD分别为1．69%，1．78%，1．75%，1．29%（n＝9），表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。

重复性试验：取同一批（批号为15121471）样品，依法制备供试品溶液6份，按拟订色谱条件进样测定，以外标法计算平均含量。结果样品中对乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和马来酸氯苯那敏的平均含量分别为99．51%，99．53%，99．32%，98．48%，RSD分 别 为0．58%，0．70%，1．79%，1．15%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为15121471），取细粉适量（约相当于马来酸氯苯那敏1 mg）9份，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，分别精密加入低、中、高质量浓度的混合对照品溶液，依法制备供试品溶液（n＝3），按拟订色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果见表1。

2．2．4 含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，以外标法计算4种成分的含量，咖啡因计算结果与1．092 7相乘，并与现行标准检验结果进行比较。结果见表2。

表1 加样回收试验结果（n＝9）

表2 2种方法样品含量测定结果（%）

3 讨论

3．1 薄层色谱法建立

酚氨咖敏胶囊现行标准［4］采用薄层色谱法鉴别4种成分，展开剂为三氯甲烷-甲醇-丙酮-乙醚-氨水（9∶0．8∶1∶3∶0．012），该方法要求展距达到15 cm，耗时较长，且展开后马来酸氯苯那敏的Rf值较小。经反复试验和筛查，最终确定三氯甲烷-甲醇-丙酮-乙醚-氨水（9∶0．8∶1∶5∶0．2）为展开剂。当展距达到8 cm时4种待测成分即可达到有效分离，操作简便快速，适宜于本品的快速鉴别。

3．2 含量测定方法选择

在酚氨咖敏颗粒现行标准的色谱条件下，咖啡因和对乙酰氨基酚色谱峰不能达到有效分离，无法准确定量［5］。本研究中建立的气相色谱外标法，可实现1次制备样品、1次进样同时测定4种组分，且10 min之内即可达到有效分离，操作更加简便、快速，亦可用于咖啡因及马来酸氯苯那敏含量均匀度的测定［6］。

3．3 提取溶剂选择

本研究结果比较发现，氨基比林和咖啡因的测定结果接近，马来酸氯苯那敏的测定结果差距较大。现行标准马来酸氯苯那敏的含量测定选用乙腈为溶剂提取后测定。张轶华等［7］报道，用乙腈作溶剂提取马来酸氯苯那敏，提取率较低。本研究中对标准方法提取剩余残渣中马来酸氯苯那敏进行考察，测定剩余量约相当于标示量的6%，表明此方法提取不完全，致使其含量测定结果偏低。马来酸氯苯那敏在乙醇中易溶［8］，超声提取20 min即可提取完全。