QuEChERS-GC-ECD法检测柑橘类水果中腐霉利等7种常用农药残留

毕思远 ，李保玲，朱志强*，曹涛，甘慧，金虹*

1. 哈尔滨体育学院滑雪教学训练基地博士后科研工作站（哈尔滨 150008）；2. 广东省检迅检测科技有限公司（东莞 523843）；3. 深圳市汇知科技有限公司（深圳 518000）；4. 深圳市易瑞生物技术股份有限公司（深圳 518101）

中国是柑橘的重要原产地之一，柑橘资源丰富，优良品种繁多，有4 000多年的栽培历史。柑橘酸甜可口，营养丰富，是许多人喜爱的水果之一。医学上，柑橘味甘酸、性凉，入肺、胃经；具有顺气、止咳、健胃、化痰、消肿、止痛、疏肝理气等多种功效，是很好的中药材。随着柑橘经济效益的提升，柑橘的种植面积不断扩大，柑橘产业作为果农收入的主要来源，成为当地农作物经济的支柱产业。由于柑橘病虫种类多，危害大，许多农户为防治病虫害及提高柑橘产量，经常喷洒大量农药，导致部分柑橘农药残留超标[1-6]。菊酯类农药是柑橘类经常喷洒的农药种类之一，具有蓄积性，即使低剂量长期接触也会引起慢性疾病。因此，检测柑橘中菊酯类农药的残留情况具有十分重要的意义。

菊酯类农药目前应用最多的是农业部NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》的测定方法。该前处理方法用时较长，且用到正己烷、丙酮、乙腈3种溶剂。QuEChERS是近年来国际上发展迅速的用于农产品检测的前处理技术，于2003年首次被报道使用于水果蔬菜中。该方法与NY/T 761—2008的前处理方法相比，减少了样品取样量和溶剂的使用量，解决了分析时间长、溶剂使用量大等问题，被广泛推广于很多国家和地区[7-14]。因此，试验采用QuEChERS前处理方法对柑橘类水果样品提取、净化，气相色谱仪配备ECD检测器上机检测，分析柑橘类水果中的7种菊酯类农药的残留量，为柑橘类农药残留的风险评估提供重要的数据支持。

1 材料与方法

1.1 仪器

7890A型气相色谱仪配备ECD检测器（安捷伦科技公司）；DB-17毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，安捷伦科技公司）；ME204电子天平（瑞士梅特勒公司）；DSY-VI型氮吹仪（上海东精华苑科技公司）。

标准物质：质量浓度均为100 μg/mL的百菌清、腐霉利、三唑酮、联苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯，农业部环境保护科研监测所。

丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正己烷（均为色谱纯，TIDEA化学试剂公司）；醋酸钠（分析纯，国药化学试剂有限公司）。

QuEChERS萃取包（5 g硫酸镁，1.5 g乙酸钠）；QuEChERS净化管（1.2 g硫酸镁、500 mg PSA和400 mg GCB，上海安谱科技有限公司）。

1.2 色谱条件

进样口温度220 ℃；检测器温度250 ℃；柱流量1.2 mL/min；尾吹65 mL/min；载气，氮气；分流比10︰1。

升温程序：初始温度60 ℃，以15 ℃/min升温速率升至180 ℃，保持3 min，再以20 ℃/min升温速率升至300 ℃，保持2 min。

1.3 样品处理

样品溶液的制备：取新鲜的柑橘样品，经缩分后将其切碎，充分混匀后放入食品粉碎机粉碎，制成待测样品。放入包装容器中备用。

样品提取：准确称取10.0 g已制备好的柑橘样品，放入25 mL离心管中，加入10 mL一酸乙腈溶液，旋涡混合后，加入QuEChERS萃取包（5 g硫酸镁、1.5 g乙酸钠），剧烈振荡3 min，在离心机中以5 000 r/min离心3 min。上清液备用。

样品净化：移取5 mL离心后的上清液到QuEC-hERS净化管（1.2 g硫酸镁、500 mg PSA和400 mg GCB）中，强力振摇1 min使之得以净化完全。以5 000 r/min离心3 min。精密移取2 mL离心好的上清液到刻度试管中，在氮吹仪中吹至近干后，加入1 mL正己烷溶解残渣。经0.22 μm有机滤膜过滤，进样色谱系统。

1.4 标准溶液制备

标准储备溶液：精密移取质量浓度均为100 μg/mL的百菌清、腐霉利、三唑酮、联苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯，标准溶液，各1 mL，置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，摇匀，即得10 μg/mL的各单标溶液储备液，备用。

2 结果与讨论

2.1 萃取溶剂的确定

乙腈、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷为常见的农药残留测定所用的萃取溶剂。相比于其他3种溶剂，乙腈能很好地降低对脂肪、糖类等的溶解性（柑橘中含有大量糖类）。而且用乙腈提取时，提取物中杂质较少，干扰小。为更好地萃取对酸碱度敏感的农药，降低降解程度，采用1%乙酸乙腈作为提取溶剂，7种农药的回收率有了很大提高（见表1）。综合考虑，选择1%的乙酸乙腈作为提取溶剂。

表1 2种萃取溶剂回收率结果比较

2.2 色谱柱的选择

色谱柱作为气相色谱的核心部分，在待测物的分离及灵敏度的高低方面起着至关重要作用。试验选择DB-17（30 m×0.25 mm，0.25 μm），HP-5（30 m×0.25 mm，0.25 μm）和DB-1（30 m×0.25 mm，0.25 μm）3种色谱柱，配制0.5 μ g/mL 7种农药的混标溶液进行色谱分离测试，比较DB-17、HP-5和DB-13种色谱柱上7种农药的分离度和灵敏度。结果表明，DB-17和DB-1毛细管柱分离效果较HP-5好，但是DB-17较DB-1待7种农药的灵敏度高。为保证检测结果能准确定量，选择测DB-17（30 m×0.25 mm，0.25 μm）作为测定的分离柱。图1为7种农药在DB-17上分离的标准图谱，图2为阳性样品的典型谱图。

图1 7种农药在DB-17上分离的标准图谱

图2 阳性样品典型图谱

2.3 线性方程及检出限

精密移取一定量1.4的标准储备溶液，用正己烷依次配制成百菌清、腐霉利、三唑酮、联苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯和氯菊酯的质量浓度均为0.02，0.10，0.50，1.00，1.50和2.00 μg/mL的混合标准溶液，作为标准曲线溶液，进样气相色谱。以各农药残留的色谱峰面积为纵坐标，对应的质量浓度为横坐标，做线性分析。ECD检测器具有较高的灵敏度，采用以3倍信号与噪声比（S/N）计算7种农药的检出限。结果见表2。

表2 7种菊酯类农药线性范围、线性方程、相关系数和检出限

2.4 加标回收及精密度试验

称取3份10.0 g的样品，分别加入最终理论值为（0.1 mg/kg）、中（0.5 mg/kg）、高（1.0 mg/kg）3个水平浓度的混合标准溶液，按照1.3样品的提取及净化过程处理样品，待仪器稳定后，进样气相色谱分析。得到7种农残的实际含量值，以实际含量值与理论加标浓度的比值计算3个水平的回收率。每个水平浓度点的样品溶液重复进样6针，计算仪器的精密度。回收率及精密度测定结果见表3。由表3可以看出，7种农药在3个水平的加标回收率范围在85.7%～95.2%之间，精密度测定值在1.65%～3.26%之间，符合分析测定的要求。

表3 回收率试验结果

2.5 重复性试验

称取10.0 g的样品，加入7种农药残留的混标溶液，使最终理论值为0.1 mg/kg，按照1.3样品的提取及净化过程处理样品，同法配制6份待测溶液。计算6份样品溶液检测结果，计算精密度测定的相对标准偏差。结果见表4。由检测数据得出，7种农药精密度测试的RSD在1.29%～3.90%之间。

表4 重复性结果

3 结论

建立一种改进的QuEChERS前处理柑橘类水果，DB-17色谱柱分离、气相色谱仪配备ECD检测器检测柑橘类水果中百菌清、腐霉利、三唑酮、联苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯7种常用农药残留的方法。方法中确定1%的乙酸乙腈作为提取溶剂。通过比较，选择DB-17色谱柱对7种农药进行分离；同时对方法的线性及检出限、加标回收与精密度、重现性进行考察。结果表明该方法具有前处理操作简便、成本低、检出限低、准确度及灵敏度高的优点，适用于柑橘类水果中有机氯及菊酯类农药的测定。