乌蕨的不同提取组分治疗大鼠急性咽喉炎模型初步研究*

陈乐 胡燕珍 吴先昊 何小群 张媛媛 赵诗云

（江西省中医药研究院 南昌330046）

急性咽炎是耳鼻喉科常见疾病，病变部位为咽黏膜，是一种可累及黏膜下及淋巴组织的急性炎症，常继发于急性鼻炎或急性扁桃体炎症之后[1]。乌蕨[Stenoloma chusanum（Linn.）Ching]是鳞始蕨科（陵始蕨科）乌蕨属植物[2]，又名大叶金花草、大金花草、小叶野鸡尾、乌韭、雉鸡尾、蜢蚱参、细叶凤凰尾等，有清热解毒、止血生肌、活血利湿等功效；主治感冒发热、痈疮肿毒、咳嗽、肠炎、湿热带下、肝炎、疼腮、口疮、烫火伤、毒伤、狂犬咬伤、皮肤湿疹、吐血、尿血、便血、痢疾和外伤出血[3]。在第四次全国中药资源普查中，我们的普查队员发现，在民间采用乌蕨治疗咽喉炎效果很好。我院工作人员和部分普查队员出现咽喉炎症后亲身试用，发现乌蕨鲜品或干品代茶饮治疗咽喉炎的效果的确优异。本研究对乌蕨治疗急性咽喉炎的有效部位进行了初步研究。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 动物 Wistar大鼠50只，180～220 g，雌雄各半，购入后在动物房分笼饲养。购于江西中医药大学实验动物中心，许可证号为SYXK（赣）2014-0008。

1.2 受试药与试剂 乌蕨药材由我院中药资源普查队成员2018年8～9月在江西省安义县、上饶广丰区等地采集，清洗、干燥后备用。取400 g干燥样品，剪碎，加水煎煮2次，浓缩至400 ml，分别用正丁醇和乙酸乙酯萃取得到正丁醇组分、乙酸乙酯组分和水提取剩余组分，减压回收有机溶剂后，再将各组分的干浸膏分别用0.5%羧甲基纤维素钠和生理盐水稀释成含生药4 g/ml的溶液，装入喉头喷雾器中备用。25%氨水、蒸馏水均为自制。

1.3 实验仪器 喉头喷雾器（江苏平安医疗器械有限公司）；奥林巴斯BX53显微镜；2 000 ml梨形分液漏斗；TLS-2000A电子秤（上海医疗器械集团）。

1.4 实验方法

1.4.1 治疗组 将15%的氨水装入喉头喷雾器内，于第1～3天上午、下午，各喷大鼠咽部1次，3揿/次；每日观察所有个体的咽部情况及状态。造模成功标准：观察到大鼠咽部黏膜呈暗红色，光泽度欠佳，黏膜分泌物增加。第4天开始，用制备好的各组分溶液分次进行喷雾治疗，均给药10 ml/d，治疗4 d后，第10天处死后，取咽部黏膜及其下组织作病理切片，观察超微结构。

1.4.2 模型组 第1～3天上午、下午，用15%的氨水各喷其咽部1次，每次用喷雾器喷3揿；每日观察大鼠的咽部情况及状态。造模成功标准：观察到大鼠咽部黏膜呈暗红色，光泽度欠佳，黏膜分泌物增加。第4天开始，不再喷雾，让其自然恢复，第10天处死后，取咽部黏膜及其下组织作病理切片，观察超微结构[4～5]。

1.4.3 空白组 第1～9天上午、下午，分别用喷雾器喷生理盐水1次，10 ml/d；第10天处死后，取咽部黏膜及其下组织作病理切片，观察超微结构。

1.5 观察指标 比较各组大鼠炎细胞浸润程度和咽组织黏膜上皮增生程度的病理评分。炎细胞浸润程度判定标准如下，正常：无炎细胞浸润，计0分；基本正常：炎细胞浸润偶见，计1分；轻度：炎细胞浸润散在，计2分；重度：大量炎细胞浸润，计3分。黏膜上皮增生程度判定标准如下，正常：咽组织黏膜上皮无增生，计0分；基本正常：咽组织黏膜上皮偶见增生，计1分；轻度：咽组织黏膜上皮部分增生，计2分；重度：咽组织黏膜上皮明显增生，计3分[6～7]。

1.6 统计学处理 采用SPSS13.0统计学软件对评分数据进行处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

空白组大鼠咽部组织的黏膜上皮无增生，无炎细胞浸润；乙酸乙酯组和水提取剩余组黏膜上皮细胞增生及炎细胞浸润程度积分显著低于模型组，差异显著，P＜0.05。见表1。

表1 各组黏膜上皮细胞增生及炎细胞浸润程度积分比较（分，±s）

表1 各组黏膜上皮细胞增生及炎细胞浸润程度积分比较（分，±s）

注：与模型组相比较，*P＜0.05。

组别 n 黏膜上皮细胞增生积分 炎细胞浸润程度积分空白组模型组乙酸乙酯组正丁醇组水提取剩余组10 10 10 10 10 0.34±0.05 2.45±0.45 1.56±0.24*2.33±0.03 1.48±0.32*0.00±0.00 1.72±0.75 0.93±0.53*1.61±0.48 0.87±0.57*

3 讨论

急性咽炎是一种常见的耳鼻喉科疾病，易反复发作，给患者带来不适感。在我院承担的第四次全国中药资源普查中，发现在民间常采用乌蕨治疗咽喉炎。我院工作人员和部分普查队员出现咽喉炎症后亲身试用，发现乌蕨鲜品或干品代茶饮治疗咽喉炎的效果的确优异。国内已经有关于乌蕨的抗炎作用的研究，蔡建秀等[8]研究发现，乌蕨总黄酮及水提液均能减轻二甲苯致小鼠的耳肿胀，缩短出血时间。陈明等[9]研究表明，乌蕨提取物可显著抑制冰醋酸导致的小鼠腹腔毛细血管通透性增高，显著降低小鼠血清中环氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和一氧化氮（NO）水平。笔者课题组在之前的研究中也对乌蕨、金粉蕨和骨碎补等三种蕨类的抗炎效果进行了初步研究，发现乌蕨水煎煮液有抗炎的效果。但是，关于乌蕨治疗咽喉炎的研究尚未见报道，本研究在前期基础研究和部分普查队员的亲身尝试经验的基础上，采用大鼠急性咽喉炎模型对乌蕨的抗咽喉炎效果进行了初步研究。结果显示，乌蕨乙酸乙酯组分和水提取剩余组分可显著改善大鼠急性咽喉炎症状。