热敏灸对慢性萎缩性胃炎模型大鼠胃肠激素的影响 *

★ 李琳慧 付勇 洪恩四 熊俊 章海凤**

(1.江西中医药大学研究生院 南昌 330004；2.江西中医药大学附属医院 南昌 330006)

慢性萎缩性胃炎(CAG)是以胃黏膜上皮和腺体萎缩、数目减少或消失，胃黏膜变薄，黏膜基层增厚为特征的慢性消化系统疾病。伴有幽门腺化生和肠腺化生，或不典型增生者被认为是胃癌前病变[1]。在我国，CAG在正常人群中的检出率呈上升趋势，2014年由中华医学会消化内镜学分会牵头开展的一项横断面调查中显示CAG患者比例占受检人群的20%左右[2]。CAG是一种多致病因素性疾病及癌前病变。近年来,多项研究结果表明该病的发生发展与胃肠激素的失调密切相关[3-4]。胃肠激素是一组由胃肠黏膜的化学信使细胞分泌的，广泛存在于胃肠道的多肽类物质，对胃肠功能、炎症、肿瘤等具有调节作用[5]。CAG患者的胃肠激素水平明显异于正常人[6]，检测胃肠激素的水平对评估CAG的严重程度和治疗效果具有重要的临床意义。因此本研究观察CAG大鼠胃泌素(GAS)、生长抑素(SS)、胃动素(MTL)以及炎症因子IL-6的变化情况，探讨热敏灸治疗CAG的可能效应机制，为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 SPF级SD雄性大鼠66只，5周龄，体质量150～180g(湖南斯莱克景达实验动物有限公司，SCXK湘：2016-0002)。采用笼养，恒温(25±2)℃，湿度60%～70%，保持实验室环境安静舒适，大鼠适应性喂养3d，按随机数字表随机分为空白组12只，造模组54只，第8周开始，造模组每2周抽取2只大鼠送检观察造模是否成功，12周后随机取2只空白组大鼠对比观察，并根据胃黏膜组织病理学检查确立建模成功(造模期间观察模型建立8只，造模组死亡4只，进入治疗期大鼠共54只，空白组10只，造模组44只)。造模组随机分为模型组11只，维酶素组11只，艾灸组22只。艾灸组根据每日艾灸过程中尾温(尾根1/3)波动情况，在治疗28d内大鼠尾温波动>1℃为热敏灸组，尾温波动≤1℃为非热敏灸组[7-8]，尾温在1℃上下波动则不纳入观察对象。其中，治疗28d内尾温波动>1℃(热敏灸组)大鼠11只，尾温波动≤1℃(非热敏灸组)大鼠8只，尾温在1℃上下波动大鼠3只，每组各随机抽取6只纳入最终观察对象。

1.2 主要试剂与仪器 艾条(江西中医药大学附属医院，二级精艾绒，规格：0.8×12cm)；1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine，MNNG，东京化成工业株式会社，NJAII-NH)；维酶素片(乐普恒久远药业有限公司，20170210)；胃泌素(GAS)ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司，E2NZZCNI)；生长抑素(SS)ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司，CYM8RRGDYK)；胃动素(MTL)ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司，R2CGX7XD)；白介素6(IL-6)ELISA试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技有限公司，5T84VG82P9)。

电子秤(凯丰集团，ACS-30)；红外电子体温计(深圳华盛昌机械实业有限公司，DT-8806S)；数字式医用红外热像仪(上海维恩伟业红外医疗器械有限公司，WNⅢ0805)；Leica正置荧光显微镜(德国Leica仪器有限公司，DM2000)；石蜡包埋机(德国Leica仪器有限公司，EG1150H)；切片机(德国Leica仪器有限公司，RM2255)；微型高速离心机(美国Labnet公司，C2500-R-230V)；电热恒温培养箱(日本亚斯旺公司，ICV-450)；全自动酶标仪(赛默飞世尔科技有限公司，Multiskan MK3)。

1.3 模型建立与评价方法 采用文献法[9-10]，用蒸馏水配置MNNG为100ug/mL饮用液，锡纸包裹饮水瓶，大鼠自由饮用，每日更换1次。每次按1mL/100g予30%乙醇和2%水杨酸钠混合液灌胃，3次/周，灌胃前、后禁食水1h。同时辅以饥饱失常方法，即足量喂食1d，禁食1d。模型评价方法：参照《中药新药临床研究指导原则》(2002)组织病理检查示：①固有腺体萎缩；②黏膜肌层增厚；③可有肠上皮化生或假幽门腺上皮化生；④固有膜炎症；⑤可有淋巴滤泡形成。

1.4 治疗方法 造模结束后第1天起，艾灸组艾灸“中脘”穴区(取穴定位参照《实验针灸学》[11])，去除毛发后将点燃艾条置于大鼠“中脘”穴约3cm处，每次灸40min，灸后按2mL/kg/d予0.9%NaCl灌胃；维酶素组束缚40min后灌服等量维酶素溶液；模型组束缚40min后灌服等量0.9%NaCl，各组均每日1次，共治疗28d。治疗期间空白组不予以任何刺激。

1.5 艾灸“中脘”穴敏化标准 参照相关研究建立热敏灸模型方法制定敏化标准[7-8]：艾灸前后应用数字式医用红外热像仪分别探测大鼠尾部的红外线温热信息，用医用红外热像系统V2.1记录小于0.05℃的温度变化。40min治疗过程中，用红外电子体温计每5min精确测量大鼠尾温(尾根1/3)，28天中每天尾温均升高>1℃即可判为腧穴热敏现象。

1.6 观察指标与方法 (1)血清GAS、SS、MTL、1L-6检测：治疗结束后，10%水合氯醛(0.4mL/100g)腹腔麻醉大鼠，腹主动脉采血约5mL，静置2h，离心15min(3000 r/min)取血清，按照ELISA试剂盒说明操作检测GAS、SS、MTL、1L-6表达。

(2)胃黏膜组织病理学观察：取胃后沿胃大弯剪开，冰0.9%NaCl冲洗，肉眼观察胃黏膜并记录，取胃黏膜组织大小约0.5cm×0.5cm，10%甲醛固定，HE染色，光镜下观察胃黏膜组织病理学变化。

2 结果

2.1 模型建立情况 造模12周后，光镜下胃组织检查示：空白组胃黏膜层和肌层厚度正常，黏膜无充血、水肿，腺体丰富且排列整齐；造模组胃黏膜层变薄、充血明显，肌层增宽，固有层腺体萎缩甚至消失，且排列稀疏不规则，部分腺体囊性扩张，可见淋巴滤泡和炎症细胞，可见异形增生，符合CAG病理诊断，提示造模成功(见图1)。

注：黑色箭头示异形增生；四角星号示淋巴滤泡浸润；五角星号示胃腺囊性扩张。

图1 光镜下胃黏膜组织病理切片观察(HE染色×100)

2.2 治疗后各组血清GAS、SS、MTL、1L-6比较 由表1可见，与空白组相比，模型组、非热敏灸组血清GAS表达降低(P<0.05，P<0.01)，但热敏灸组及维酶素组差异无统计学意义；与模型组相比，热敏灸组及维酶素组血清GAS表达均升高(P<0.05，P<0.01)，非热敏灸组差异无统计学意义；与非热敏灸组相比，热敏灸组血清GAS表达升高(P<0.05)，但维酶素组差异无统计学意义；热敏灸组血清GAS表达虽比维酶素组升高，但差异无统计学意义。

与空白组相比，模型组、非热敏灸组、维酶素组血清SS表达均降低(P<0.05，P<0.01)，但热敏灸组差异无统计学意义；与模型组相比，热敏灸组血清SS表达升高(P<0.05)，非热敏灸组、维酶素组差异无统计学意义；与非热敏灸组相比，热敏灸组血清SS表达升高(P<0.05)，但维酶素组差异无统计学意义；热敏灸组血清SS表达虽比维酶素组升高，但差异无统计学意义。

与空白组相比，模型组、非热敏灸组血清MTL、1L-6表达均升高(P<0.05，P<0.01)，热敏灸组MTL、1L-6两者差异均无统计学意义，维酶素组MTL升高(P<0.05)，1L-6差异无统计学意义；与模型组相比，非热敏灸、热敏灸组、维酶素组血清MTL、1L-6表达降低(P<0.05，P<0.01)；与非热敏灸组相比，热敏灸组血清MTL、1L-6表达降低(P<0.05)，维酶素组差异无统计学意义；与维酶素组相比，热敏灸组血清MTL、1L-6表达差异无统计学意义。

3 讨论

CAG为胃黏膜发生淋巴细胞和浆细胞浸润的慢性萎缩性炎症性的病变，相当于中医学中的“胃脘痛”“嘈杂”“痞满”“纳呆”等病。西医认为胃黏膜血流量降低、黏膜营养因子缺乏及血管活性因子改变等是其发病发病主要机制，因此治疗上多给予改善胃黏膜及胃肠动力等药物，然而难以从根本上逆转其病理进程。而针灸的多途径、多环节、多靶点的整体调控不但可以控制病情发生发展，甚至可以逆转萎缩、肠上皮化生及异型增生[12-13]。因此杜元灏等在效能等级针灸病谱中，将CAG界定为针灸Ⅱ级病谱[14](即以针灸治疗为主,可获得整体好转)。

表1 各组治疗后血清GAS、SS、MTL、1L-6比较 pg/mL

注：与空白组比较，1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较，3)P<0.05，4)P<0.01；与非热敏灸组比较，5)P<0.05。

胃肠激素是一组广泛存在于胃肠道的多肽类物质，对维持胃肠道黏膜的完整性和调节胃酸分泌及胃肠运动等有着重要作用[3-4]。其分泌失调或受体结构及功能的异常均可导致胃肠道疾病的发生发展。胃肠激素种类繁多，其中与CAG关系密切的有胃泌素(GAS)，生长抑素(SS),胃动素(MTL)等。

GAS、SS主要由胃窦部G、D细胞分泌，GAS能促进胃酸分泌，增加胃泌酸区黏膜血流量，对胃黏膜有营养和保护作用[15]。SS则可通过保护谷胱甘肽还原酶活性以维持胃黏膜内非蛋白结合巯基水平，从而防止脂质过氧化，保护胃黏膜[16]，SS还可抑制胃酸分泌及GAS释放,二者可组成GAS-SS-胃酸分泌轴，在功能上相互协调,共同维持胃肠道生理功能[17]。有研究表明CAG大鼠因胃窦部黏膜腺体发生萎缩，数量减少从而导致GAS、SS的含量下降[18-19]。本实验的研究结果表明模型组的GAS、SS含量均下降，说明CAG大鼠存在血清GAS、SS低表达，与文献报道结果一致。MTL是一种能够刺激胃体运动的物质，对胃肠动力和胃肠电活动有显著影响。MTL增高时，一方面胃运动增强，胃壁平滑肌持续强烈收缩，阻断了通过胃壁的小血管，使胃黏膜血流量减少，黏膜缺血，从而造成胃黏膜损伤。另一方面MTL增高可使胃幽门口紧闭，造成胃窦、幽门及十二指肠不协调运动，从而延缓了胃排空，导致胃内容物停留时间过长，加重了胃黏膜炎性反应[20]。应用热敏灸治疗后,MTL水平明显降低，且疗效优于非热敏灸组，说明降低MTL可能是热敏灸有效作用的环节之一。此外，有研究表明CAG是胃黏膜慢性炎症的过程，促炎细胞因子(IL-1β和IL-6)的分泌在CAG的发展中起重要作用[21]。本研究分析了CAG大鼠血清中IL-6的表达，发现艾灸(热敏灸、非热敏灸)和维酶素治疗均可降低CAG大鼠血清IL-6水平，减轻炎症程度，其中热敏灸组又优于非热敏灸组，与维酶素组疗效相当。

综上所述，热敏灸可上调CAG大鼠GAS及SS的水平，下调MTL及炎症因子IL-6的水平，且疗效明显优于非热敏灸组，其作用可能是通过调节胃肠激素的分泌，改善胃黏膜血流量，抑制炎症因子产生，减轻胃黏膜损伤来实现的。