HPLC-RID法测定布洛芬口服溶液中甘油、山梨醇的含量

★ 黎艳刚 李丽云 沈加永 丁江生 罗小泉 杨武亮

(1.云南白药集团创新研发中心/云南省药物研究所/云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室 昆明 650111；2．江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室 南昌 330004)

布洛芬口服溶液是专为儿童设计的感冒退烧药，主要用于儿童减轻中度疼痛，减轻普通感冒或流行性感冒引起的发热。因抗炎、解热和镇痛效果确切、不良反应少、口服易吸收等优点被广泛应用。因其处方中含有多种辅料，过量摄入会增加临床不良反应，因此控制其含量至关重要。药用甘油为润滑性泻药，可用作助溶剂、保湿剂等，还是常用的透皮吸收促进剂[1]。研究表明：甘油的药用作用伴有腹泻等不良反应，因此需通过控制其含量，以便达到更好的临床疗效。文献报道甘油含量测定方法较多，有快速酶法[2]、紫外分光光度法[3]、高效液相色谱联合示差折光检测器法[4]等。山梨醇是一种重要的医药、化工、轻工、食品工业原料，在很多方面都有广泛的应用[5]。可作为甜味剂、保湿剂、赋形剂、防腐剂等使用。目前山梨醇的测定方法主要有荧光分光光度法[6]、碘量法、高效毛细管电泳法[7]等。

由于本品说明书中药用辅料非常多，检测时不易分离，干扰较大，专属性不强，结果准确度不高，色谱法相对更准确。目前，高效液相色谱联合示差折光检测器法(HPLC-RID)同时测定布洛芬口服溶液中甘油、山梨醇的含量的方法未查询到。本文在大量文献及实验的基础上建立了HPLC-RID法同时测定布洛芬口服溶液中甘油、山梨醇含量的方法，该方法便捷、灵敏度高，可作为布洛芬口服溶液中检测甘油和山梨醇质量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(美国Agilent，1260型)；示差折光检测器(美国Agilent，G1362A型)；电子天平(梅特勒-托里多公司，AL104型)。

1.2 试药 布洛芬口服溶液(神威药业有限公司，批号：1111241，1109201，1109202)；甘油对照品(南昌白云制药有限公司，批号：20120904，纯度99.2%)；山梨醇对照品(北京风礼精求商贸有限责任公司，批号：F372F，纯度99.5%)；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：NH2色谱柱(Waters Spherisorb)(4.6mm×250mm，5.0μm)；流动相：乙腈-水(73∶27)，流速1mL/min；柱温：25℃；示差折光检测器温度：35℃；进样量：10μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液 将甘油、山梨醇对照品减压干燥至恒重，分别称取甘油和山梨醇对照品2.5g、1g，精密称定，至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液 精密量取神威药业生产的布洛芬口服溶液约5mL，置50mL容量瓶中，加水稀释并定溶至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 按布洛芬口服溶液说明书中组成成分，制备不含山梨醇、甘油的样品，按2.2.2项下供试品制备方法制备阴性对照溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 专属性试验 精密量取上述三种溶液各10μL，按2.1项下色谱条件进样，对上述3种溶液色谱图进行对比分析，结果见图1。从图谱中可知甘油和山梨醇能被较好的分离，分离度大于1.5，且无其他峰干扰，说明该方法专属性较好。

A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.甘油；2.山梨醇

2.3.2 线性范围考察 精密量取2.2.1制备的对照品储备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，分别置于10mL的容量瓶中，用水稀释至刻度线，摇匀，即得不同浓度的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10μL进样，按2.1项色谱条件测定，以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y甘油=74575X-1262.4(r=0.9999)、Y山梨醇=91463X-41541(r=0.9995)，对照品线性范围分别为25～150μg，10～60μg；结果表明：甘油和山梨醇分别在25～150μg，10～60μg范围内，线性关系良好。

2.3.3 精密度试验

2.3.3.1 日内精密度 精密吸取上述对照品溶液10μL，按2.1项下色谱条件，重复进样6次，记录色谱图，计算得山梨醇、甘油峰面积的RSD分别为0.97%，0.26%。结果表明该方法的日内精密度良好。

2.3.3.2 日间精密度 精密吸取上述对照品溶液10μL，按2.1项下色谱条件每天重复进样2次，连续进样3天，计算得甘油、山梨醇峰面积的RSD分别为0.35%，0.84%。结果表明该方法的日间精密度良好。

2.3.4 检测限与定量限 将对照品储备液进行稀释，按2.1项下色谱条件测定，当信噪比约为3时，测得甘油、山梨醇的检测限分别为0.25μg，1μg；当信噪比约为10时，测得甘油、山梨醇的定量限分别为2.5μg，20μg。

2.3.5 稳定性试验 取神威药业生产的布洛芬口服溶液约5mL，精密量取，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，于室温下放置，分别于0，2，4，6，12，24h，精密吸取各10μL，按2.1项下色谱条件进行测定，结果甘油和山梨醇峰面积的RSD分别为0.69%，1.01%，表明供试品溶液于室温下24h内稳定。

2.3.6 准确度 精密量取已知山梨醇和甘油含量的布洛芬口服溶液(批号为1111241)0.25mL的80%，100%，120%的体积，各3份，分别加入80%，100%，120%的甘油、山梨醇对照品。按2.2.2项下方法制备供试品溶液，进样，结果见表1。

2.4 样品测定 取神威药业生产的布洛芬口服溶液，按2.2.2项下方法配制供试品溶液，分别精密吸取10μL，按2.1项下的色谱条件进行测定，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果

表2 含量测定结果

3 讨论

本实验建立了同时测定布洛芬口服溶液中甘油、山梨醇含量的方法，按处方比例与工艺，制成不含甘油和山梨醇的阴性供试品进行测定，在与样品同样保留时间处未出现色谱峰，对甘油和山梨醇的测定无干扰。本法考察了几种流动相，其中以乙腈:水(73∶27)为流动相的分离效果和出峰时间最为理想，故选此为流动相。通过上述实验结果表明：本法具有回收率高、精密度高、重复性好、方法简单的优点，可用于布洛芬口服溶液中甘油和山梨醇的质量控制。