液相色谱法同时检测肉制品中4种食品添加剂

厉建军，王迎迎，侯世松，朱希敏，曹福红

（烟台喜旺肉类食品有限公司，山东烟台 264000）

肉制品中主要含有蛋白质、脂肪和少量碳水化合物，同时还含有少量维生素和无机盐等，营养十分丰富，通常在适宜的情况下蛋白质会被微生物污染而发生变质[1]；脂肪也会因为被氧化而被微生物分解，从而导致腐败变质；人们在常年的经验和知识的积累中找到了很多防止变质的方法，如低温冷藏、隔绝空气[2]、降低水活度、调节pH值[3]等方法来杀菌或抑菌。在生产加工过程中，企业通常采用添加山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸等防腐剂，来达到保鲜和防腐的目的，通过添加苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸等防腐剂进行防腐保鲜。但是，有些不法商贩为牟取暴利，存在滥用食品添加剂或者超范围超标准使用添加剂等问题，其中最为普遍的是滥用防腐剂和甜味剂。长期食用过量防腐剂和甜味剂等食品添加剂会严重损害肝肾功能，影响身体健康。因此，建立一种快速、准确的检测肉制品中防腐剂和甜味剂等食品添加剂的方法尤为重要。

当前对防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸）和甜味剂（糖精钠）的测定方法主要采用GB 5009.28和GB 5009.121这2种。对1份样品同时检测防腐剂和甜味剂时，需要分开检测，这样就存在检测效率低下等突出问题。为提高检测效率，满足高效、快速、准确的检测需求，采用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，HPLC） 同时检测肉制品中常见甜味剂和防腐剂的方法进行了研究，可同时检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸等4种常见甜味剂和防腐剂[4]。该方法操作简便，可实现同时检测，是一种快速、高效、准确度高的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters 2695型高效液相色谱仪，配Waters 2998 PDA检测器；DS-8510型超声波发生器，上海生析超声仪器有限公司产品；离心机，上海安亭科学仪器厂产品。

甲醇（HPLC），Fisher公司提供；乙酸铵（HPLC），天津科密欧化学试剂有限公司提供；亚铁氰化钾（分析纯）、乙酸锌（分析纯），天津福晨有限公司提供；娃哈哈水，杭州娃哈哈公司提供；苯甲酸（1.00 mg/mL）、脱氢乙酸 （1.00 mg/mL）、山梨酸（1.00 mg/mL)、糖精钠（1.00 mg/mL），中国计量科学研究院提供。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：XDB-C18型（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温35℃，流动相：甲醇+乙酸铵溶液，流速1.0 mL/min，进样量20 μL，检测波长230 nm，流动相比例[5]：甲醇∶0.2 mmol/L乙酸铵溶液=3∶97，流速1.0 mL/min，等度洗脱。

1.2.2 标准储备液和工作溶液配制

苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠混合标准中间溶液（100 mg/L）：分别准确量取5 mL质量浓度为1 000 mg/L标准储备溶液，用娃哈哈水定容至50.0 mL。0～7℃储存，有效期6个月。

苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠混合标准系列工作溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠混合标准中间溶液0，0.1，0.5，1.0，2.0，5.0 mL，娃哈哈水定容至10 mL，配制成质量浓度分别为0，1.00，5.00， 10.0，20.0，50.0 mg/L的混合标准系列工作溶液。现用现配。

1.2.3 样品前处理[5]

称取1 g（精确到0.001 g） 样品于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋均匀，于50℃水浴超声处理20 min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液（106 g/L）、乙酸锌溶液（220 g/L） 各2 mL，混匀，以转速8 000 r/min离心5 min，将水相转移至50 mL容量瓶中，于残渣中加水20 mL，涡旋混匀后超声5 min，以转速8 000 r/min离心5 min，将水相转移至同一支100 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液，过0.22 μm滤膜后待上机测试。

2 结果与分析

2.1 色谱柱的条件优化

当色谱条件为XDB-C18型（4.6 mm×250 mm×5 μm），流动相：0.2 mmol/L乙酸铵 - 甲醇 （97∶3）等梯度，柱温35℃，流速1.0 mL/min，进样量20 μL，检测波长230 nm时，4种目标化合物均能有效分离，但总分析时间较长，研究发现，乙酸铵溶液pH值对目标物的分离时间影响显著，通过向乙酸铵溶液中加入乙酸降低pH值，能显著减少总分析时间[6]。当乙酸铵pH值为7.8～8.0时，4种目标化合物能在15 min内进行有效分离。

4种防腐剂和甜味剂的混合标准溶液谱图见图1。

图1 4种防腐剂和甜味剂的混合标准溶液谱图

2.2 标准曲线、线性范围、相关系数及检出限[7]

将1 000 mg/L的各种添加剂单标准溶液依次稀释配制成质量浓度为1.0，2.0，5.0，7.0，10.0 mg/L的系列混合标准溶液，根据各峰面积（Y）对质量浓度（X，mg/L）绘制标准曲线，得到线性回归方程。

4种添加剂的回归方程、线性相关系数、线性范围及检出限（信噪比S/N=3） 见表1。

结果表明，在0.01～10.00 mg/L质量浓度范围内，各添加剂的线性关系良好，相关系数（R）不小于0.999 5，检出限为0.000 8～0.001 8 g/kg。

表1 4种添加剂的回归方程、线性相关系数、线性范围及检出限

2.3 回收率及精密度试验

以阴性控制样品为测试样品，苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸及糖精钠用量水平分别为0.01，0.04，0.075 g/kg，每个水平在相同试验条件下做6个平行样，计算回收率、相对标准偏差。

4种添加剂样品加标回收率见表2。

2.4 重复性试验

表2 4种添加剂样品加标回收率 /%

取阴性控制样品6份，苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸及糖精钠用量水平均为0.04 g/kg，按1.2.3前处理方法处理，样品中所测4种化合物的峰面积的RSD为3.6%～5.3%。

3 结论

建立了液相色谱法同时测定肉制品中常见的3种防腐剂和1种甜味剂的检测方法，确定了色谱条件。该方法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸在线性范围1.0～10.0 mg/L，定量限分别为0.001 8，0.001 1，0.000 5，0.000 8 g/kg，回收率为 85.5%～101.0%。通过试验结果表明，该方法操作简单、分析速度快、重现性好、结果准确可靠，满足肉制品中多种添加剂快速分离检测要求，具有较高的实用价值和应用前景。