Survivin、AQP9和HLA-G在子痫前期患者中的表达水平及相关性

曾玲娟 汤艳 喻玲 丁依玲 赖微斯 胡芸

1中南大学湘雅二医院妇产科（长沙410000）；2湖南省妇幼保健院B 超室（长沙410008）

子痫前期是一种妊娠并发症，严重危害产妇和婴儿的健康，其发病机制目前尚未明确。临床研究指出，胚胎滋养细胞凋亡以及其侵袭力异常是造成子痫前期发病重要原因［1］。Survivin 是近几年新发现的凋亡抑制蛋白，Smac 与Survivin 之间具有紧密的联系［2］，目前关于Survivin 是否参与子痫前期发病，相关研究较少。水通道蛋白9（aquaporin9，AQP9）在细胞的分化和迁移过程中发挥着重要作用，AQP9 显示高表达，会导致滋养细胞加速凋亡，其迁移能力降低，抑制细胞分化和融合，造成胎盘组织发生缺血缺氧［3］。有研究指出，子痫前期的发生发展主要和绒毛膜外滋养细胞的侵袭能力下降有关，人类白细胞抗原G（human leukocyte antigen G，HLA-G）属于HLA-Ⅰ类分子，对母体与胎儿的免疫耐能力起到诱导作用［4-5］。本文旨在研究Survivin、AQP9 和HLA-G 在子痫前期患者中的表达水平及相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料本文选取2016年6月至2018年6月在我院就诊的子痫前期患者50例，分为子痫前期组，年龄23～40 岁，平均（31.5 ± 5.1）岁，孕周30～40 周，平均（35.1±3.0）周；另外选取在我院进行产检的健康妊娠期产妇50例作为正常组，年龄22～38 岁，平均（30.5 ± 5.3）岁，孕周28～40 周，平均（34.8 ± 3.6）周。两组研究对象在平均年龄、平均孕周上比较，无统计学差异（P＞0.05），具有可比性。纳入标准：均符合子痫前期的诊断标准；有完整的产检记录患者；正常孕妇无任何妊娠期合并症。排除标准：排除有严重心肺功能不全的患者；排除患有精神疾病的患者；排除病例资料不全的患者，畸形胎儿患者；患者孕前患有心血管疾病并且服用治疗心血管的药物患者。本次研究均得到所有研究对象及其家属均知情，并签署了家属知情同意书，且经过我院伦理委员会批准，伦理批准文号（2014）伦审批第（27）号。

1.2 方法

1.2.1 标本采集搜集孕妇分娩5 min 内留取脐带根部的胎盘组织1 cm × 1 cm × 1 cm，使用生理盐水将残留的血液清洗干净，之后使用滤纸将组织上的水分吸干，在冻存管中保存。

1.2.2 免疫透射比浊法检测Survivin 表达水平取3 个试管，分别标记为空白管、标准管以及测定管。空白管中加入15 μL 生理盐水和350 μL Tris缓冲液，标准管中加入15 μL CRP 定标液和350 μL Tris 缓冲液，测定管中加入15 μL 待测标本和350 μL Tris 缓冲液，对3 个试管分别摇晃混匀后，在37 ℃的环境中保存5 min，在波长340～700 nm处读各管吸光度。之后在3 个试管中分别加入羊抗人CRP 抗血清，分别摇晃混匀后在37 ℃的环境中保存5 min，在波长340～700 nm 处读各管吸光度，并对Survivin 水平进行计算。

1.2.3 酶联免疫吸附测定AQP9 和HLA-G 表达水平采用酶联免疫吸附测定检测：50 mmol/L碳酸盐包被缓冲液将抗原进行溶解，浓度为10-20 μg/mL，在96孔酶标板中加入100 μL/孔，4 ℃过夜保存。第二天舍弃包被液，采用PBST 洗涤3 次，没孔中加入1%的150 μL BSA，在37 ℃环境中封闭1 h。之后采用PBST洗涤3次，在每孔中加入100 μL不同倍比稀释度的血清，加入对照样品，37 ℃孵育2 h。采用PBST 洗涤5 次，加入100 μL，稀释后的HRP 标记的二抗，37 ℃孵育1 h。PBST 洗涤5 次，之后，使用显色剂显色20 min 后，在酶标仪上读取A405 吸收值，从而测定AQP9和HLA-G的表达情况。

1.3 统计学方法采用SPSS 20.0 统计软件进行分析，计量资料采用（）进行描述，两组间比较采用实施独立样本t检验，P＜0.05 则说明差异具有统计学意义。相关性采用Pearson 相关性分析。

2 结果

2.1 正常组、子痫前期组两组Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平比较如表1 所示，子痫前期组患者Survivin、HLA-G 表达水平低于正常组，AQP9表达水平高于正常组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。说明Survivin、HLA-G 可能参与子痫前期疾病发生发展。

表1 两组Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平比较Tab.1 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels in two groups ±s

表1 两组Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平比较Tab.1 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels in two groups ±s

组别正常组子痫前期组t 值P 值例数50 50 Survivin 31.42±1.04 10.13±0.49 130.361 0.001 AQP9 0.19±0.01 0.65±0.03 103.186 0.001 HLA-G 50.69±3.05 27.35±1.23 50.137 0.001

2.2 Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平与子痫前期患者临床相关性比较如表2 所示，Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平与子痫前期患者年龄、孕周无相关性（P＞0.05）。Survivin、AQP9 和HLA-G表达水平与子痫前期患者流产次数、病情严重程度有关（P＜0.05）。流产次数≥3 次、重度子痫患者Survivin、HLA-G 表达水平较低，AQP9 表达水平较高，具有统计学差异（P＜0.05）。说明Survivin、HLA-G、AQP9 表达水平与子痫前期患者流产、子痫程度有关。

2.3 Survivin、AQP9 和HLA-G 之间的相关性分析如表3 所示，Survivin、AQP9 和HLA-G 之间进行相关性分析，Survivin 和AQP9 之间呈负相关，AQP9 和HLA-G 之间之间呈负相关，Survivin 和HLA-G 之间之间呈正相关，具有统计学差异（P＜0.05）。说明Survivin、AQP9 和HLA-G 之间具有相关性，参与了子痫前期的发病过程。

表2 Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平与子痫前期患者临床相关性比较Tab.2 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels with clinical correlation in patients with preeclampsia±s

表2 Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平与子痫前期患者临床相关性比较Tab.2 Comparison of Survivin，AQP9 and HLA-G expression levels with clinical correlation in patients with preeclampsia±s

临床资料年龄（岁）流产次数（次）病情严重程度孕周（周）＜30≥30＜3≥3轻度子痫前期重度子痫前期＜35≥35例数26 24 15 35 28 22 25 25 Survivin 10.02±0.55 10.16±0.57 15.23±1.44 10.23±0.53 15.27±0.49 5.438±0.17 10.20±0.48 10.21±0.49 t 值0.902 18.062 90.093 0.092 P 值0.372 0.001 0.001 0.927 AQP9 0.61±0.03 0.63±0.04 1.02±0.06 0.67±0.02 1.09±0.20 0.22±0.02 0.71±0.04 0.69±0.04 t 值2.293 31.805 20.125 1.768 P 值0.026 0.001 0.001 0.083 HLA-G 27.34±1.47 27.56±1.32 35.78±2.12 28.72±0.76 38.46±1.34 20.06±0.94 28.38±0.51 28.11±0.98 t 值0.551 17.430 54.553 1.248 P 值0.584 0.001 0.001 0.218

表3 Survivin、AQP9 和HLA-G 之间的相关性分析Tab.3 Correlation analysis among Survivin，AQP9 and HLA-G

3 讨论

在正常妊娠过程中，绒毛内细胞会分化为合体滋养细胞以及绒毛外滋养细胞。在妊娠早期，绒毛外滋养细胞会脱离绒毛基底部，侵入蜕膜层及蜕膜组织，会取代血管内皮细胞，对血管中层肌的弹力纤维产生破坏作用，导致螺旋动脉扩张，实现子宫螺旋动脉重铸［6-7］。研究数据显示，滋养细胞侵袭能力降低会导致子宫内膜浸润缺乏，导致子宫螺旋动脉重铸出现障碍，全身血管内皮受到损伤，造成子痫前期的病理以及生理表现［8］。

Survivin 属于一种最强的凋亡抑制因子。研究［9-10］指出，Survivin 对滋养细胞的存活和增殖有一定的促进作用，参与胚胎着床和胎盘发育，有助于维持产妇正常妊娠。Survivin 表达异常与滋养细胞凋亡及侵袭有关，造成胎盘绒毛发育不良，导致胎盘缺血以及缺氧，对新生儿的体重以及胎盘质量产生直接的影响，严重的会导致新生儿和产妇死亡［11-12］。本文研究结果显示，子痫前期患者的胎盘组织中，Survivin 表达水平降低，说明Survivin能够对妊娠期产妇的情况进行表达，可能参与了疾病的发病过程。周小娜［13］研究发现，子痫前期组患者的胎盘组织中Survivin 表达水平下降，与本文研究保持一致。因为Survivin 表达水平降低造成滋养细胞增殖能力与细胞侵袭性降低，滋养细胞大量凋亡，导致胎盘着床较浅，胎盘组织缺乏血液供应，表明Survivin 参与子痫前期的发病［14-15］。

重度子痫前期患者的AQP9 表达水平高于轻度子痫患者，AQP9 参与滋养细胞凋亡过程，对滋养细胞凋亡有促进作用，造成胎盘缺氧，导致患者发病［16］。研究发现，在羊膜上皮细胞中AQP9 水平与正常妊娠孕妇已经妊娠高血压患者相比，其表达水平较高［17］。本文研究数据显示，子痫前期患者的胎盘组织中，AQP9 表达水平升高，推测AQP9参与子痫前期的发生和发展，AQP9 表达异常在胎盘组织滋养细胞中作用更加重要。HLA-G 表达水平下降会造成滋养细胞受到母体免疫细胞攻击，导致子宫螺旋动脉重铸受到阻碍，胎盘缺氧，最终子痫前期发生［18-19］。本文结果显示，子痫前期患者的胎盘组织中，HLA-G 表达水平降低，说明HLA-G参与子痫前期发病过程。骆守玲［20］研究显示，子痫前期患者血清中HLA-G 水平与HLA-GmRNA 呈正相关，进一步表明，HLA-G 参与了胎盘组织相应血管的生理性变化。

本文研究数据显示，流产次数≥3 次、重度子痫患者Survivin、HLA-G 表达水平较低，AQP9 表达水平较高，说明Survivin、AQP9 和HLA-G 表达水平与子痫前期患者流产次数、病情严重程度有关，Survivin、HLA-G 表达随着子痫前期患者病情进展降低，AQP9 表达随着子痫前期患者病情进展升高。本文研究数据显示，AQP9 和Survivin、HLA-G之间具有负相关性，当AQP9 表达升高时，Survivin、HLA-G 受到抑制，Survivin、AQP9 和HLA-G参与了子痫前期的发展，在子痫前期中起到重要的调节作用。

综上所述，Survivin、AQP9 和HLA-G 表达与子痫前期具有相关性，Survivin、AQP9 和HLA-G 的异常表达，参与了子痫前期的发展，在子痫前期的临床诊断中具有重要意义。