Syndecan-1 在肺腺癌组织中的表达及临床意义

王少强，魏松洋，寇卫军，李青元，郑庆杰

肺癌是一种常见的原发性肺部恶性肿瘤，在世 界范围内发病率和死亡率均较高［1］。 其中非小细胞肺癌（non small cell lung cancer，NSCLC）约占肺癌总数的80%， 而腺癌是目前NSCLC 的主要组织学亚型［2］。 Syndecan-1 是跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族的成员，参与细胞的增殖、黏附、迁移及信号传导等生物学过程［3-7］。 关于Syndecan-1 在肺腺癌组织中的表达情况及临床意义，目前国内外的报道较少。 为此，该研究通过免疫组织化学法检测肺腺癌组织中Syndecan-1 的表达情况，并分析其与患者临床病理特征及预后的相关性，由此探讨Syndecan-1蛋白表达与肺腺癌患者预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料自2011 年6 月—2015 年6 月在笔者所在医院行手术治疗的原发性肺腺癌患者76例。男44 例，女32 例；平均年龄52.4 岁（31～78 岁）；所有患者术前均未接受放化疗及免疫治疗。 术后收集癌组织及癌旁正常肺组织（距肿瘤边缘＞5 cm），4%中性甲醛固定，石蜡包埋，行Syndecan-1 蛋白表达免疫组化检查，根据Syndecan-1 在肺腺癌组织中阳性表达程度，将患者分为两个亚组：低表达组（n＝43）和高表达组（n＝33）。 根据临床病理特征，收集患者的基本资料，包括性别、年龄、吸烟史、肿瘤分化程度（依据2004 版世界卫生组织《肺部肿瘤病理组织学分类》确认组织学分型）、肿瘤直径、胸膜浸润、卫星结节、区域淋巴结转移、pTNM 分期（依据国际抗癌联盟2009 年修订的肺癌分期标准）。 笔者所在课题组对患者进行为期3 年的随访观察，以了解其生存相关信息。 该研究申请并获得了医院伦理委员会的批准，通过与患者及其家属进行充分沟通并获得其同意及签字后开始研究。

1.2 方 法

1.2.1 主要试剂 鼠抗人syndecan-1（CD138）单克隆抗体购自Santa Cruz 公司。SP 免疫组化染色试剂盒、DAB 显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 TRIZOL 反应剂购自Invitrogen 公司。

1.2.2 实验方法 该实验采用SP 法进行免疫组织化学染色： 石蜡包埋组织按照4 μm 厚度进行连续切片，所得石蜡切片常规脱蜡、水化，于枸橼酸盐缓冲溶液中进行抗原修复。3%H2O2孵育15 min，消除内源性过氧化物酶活性。 室温下山羊血清孵育30 min， 消除非特异性抗体。 滴加小鼠抗人syndecan-1 单克隆抗体溶液，4 ℃过夜。 滴加生物素标记的IgG 抗体，室温孵育2 h。 0.05%DAB 显色剂显色8～12 min。 苏木素复染，氨水返蓝，常规封片。以非特异性小鼠IgG 代替一抗作为阴性对照。

1.2.3 结果判定 由笔者所在医院进行独立双盲评分，以细胞膜和（或）细胞质内出现棕色或棕褐色颗粒作为阳性结果。 根据染色强度和显色细胞的比例采用半定量积分法进行综合评分， 具体标准如下：（1） 每张切片随机选取五个400 倍光学显微镜下视野，最终结果取平均值；（2）染色强度计分：按照未染色、淡黄色、棕色、棕褐色分别记为0、1、2、3分；（3）染色范围计分：将染色阳性细胞数占总细胞数的比率按照＜5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%分别记为0、1、2、3、4 分；（4）将染色强度计分与染色范围计分相乘得出染色结果：0 分为阴性，1～4 分为弱阳性，5～8 分为阳性，9～12 分为强阳性。根据肺腺癌组织中Syndecan-1 的表达情况分为两组：0～4 分为低表达组，5～12 分为高表达组。

1.2.4 随访 随访开始时间为患者接受手术的时间，采用门诊随访和电话随访的方式，平均2～3 个月随访一次，进行3 年定期随访。 对于死亡患者其死亡时间即为终止时间。 中途失访4 例，其终止时间为最后一次随访时间，中途失访患者亦纳入生存分析。

1.3 统计学处理应用SPSS 16.0 统计软件进行统计学分析。 运用χ2检验分析肺腺癌组织中Syndecan-1 的表达情况与各项临床病理指标的关系； 运用Kaplan-Meier 法进行生存分析， 用logrank 检验进行曲线间比较；运用Cox 回归进行单因素及多因素生存分析。取P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 Syndecan-1 在肺腺癌及癌旁正常肺组织中的表达情况Syndecan-1 阳性染色主要位于细胞膜中，为棕色及棕黄色颗粒样，但细胞质中也有所表达。 在肺腺癌组织中Syndecan-1 的染色结果为：25例 （32.9%） 阴性，18 例 （23.7%） 弱阳性，19 例（25.0%）阳性，14 例（18.4%）强阳性；其中低表达者43 例（56.6%），高表达者33 例（43.4%）。 在癌旁正常 肺 组 织 中，Syndecan-1 染 色 结 果 为：29 例（38.2%）阳性，47 例（61.8%）强阳性；均为高表达。见图1。

图1 见封三。

图1 不同肺腺癌组织中Syndecan-1 染色结果

2.2 Syndecan-1 的表达情况与肺腺癌患者临床病理指标的关系肺腺癌组织中Syndecan-1 的低表达与肿瘤分化程度（χ2＝5.545，P＝0.032）、卫星结节（χ2＝6.061，P＝0.018）、区域淋巴结转移（χ2＝7.727，P＝0.01）、pTNM 分期（χ2＝14.434，P＜0.001）等因素存在显著相关性，而与肺腺癌患者的性别（χ2＝0.268，P＝0.645）、年龄（χ2＝0.915，P＝0.364）、吸烟史（χ2＝0.120，P＝0.809）、肿瘤直径（χ2＝2.605，P＝0.127）、胸膜浸润（χ2＝1.735，P＝0.231）等因素无关。 见表1。

表1 Syndecan-1 的表达与肺腺癌临床病理学特征的关系

2.3 Syndecan-1 的表达情况与肺腺癌患者预后的相关性运用Kaplan-Meier 生存曲线评估Syndecan-1 的表达情况与76 例肺腺癌患者的总生存率的相关性显示：Syndecan-1 低表达组患者三年生存率为14.0%，平均生存时间为18.8 个月，中位生存时间为17 个月；Syndecan-1 高表达组患者三年生存率为30.3%， 平均生存时间为28.1 个月，中位生存时间为31 个月。 Syndecan-1 低表达组患者生存时间较Syndecan-1 高表达组患者明显下降，差异具有统计学意义（χ2＝12.555，P＜0.001）。 见图2。

图2 见封三。

图2 Syndecan-1 不同表达组Kaplan-Meier 生存分析

76 例肺腺癌患者临床病理指标均纳入单因素COX 回归分析，结果显示：肿瘤分化程度（P＜0.001）、肿瘤直径（P＝0.007）、卫星结节（P＝0.004）、区域淋巴结转移（P＝0.002）、pTNM 分期（P＜0.001）、Syndecan-1 表达（P＝0.001）与总生存率显著相关。 将上述影响生存率的因素纳入多因素回归分析， 结果显示：肿瘤分化程度（P＝0.004）、肿瘤直径（P＝0.001）、pTNM分期（P＜0.001）、Syndecan-1 表达（P＝0.032），这些因素可以作为肺腺癌患者总生存率的独立预后预测因子。 见表2。

表2 总体生存期单因素及多因素Cox 回归分析

3 讨 论

Syndecan-1 是跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族的成员，表达于上皮细胞、浆细胞等多种类型细胞表面［3，4］。Syndecan-1 参与维持正常上皮形态结构的完整性和稳定性［4］；并通过其共价连接的硫酸肝素侧链结合一系列的细胞外配体， 如细胞因子、生长因子、细胞黏附分子、基质成分等，调节细胞与细胞外基质、细胞与细胞间的相互作用，影响细胞的增殖、黏附、迁移及信号传导，调控血管生成，参与肿瘤的发生发展过程［5-7］。

大量研究发现，Syndecan-1 的表达与肿瘤恶性程度、肿瘤表型及侵袭潜力有关，它在不同肿瘤中表达模式各异［8］。Xu 等［9］对116 例胶质瘤组织和15例正常脑组织进行研究后发现， 胶质瘤组织中的Syndecan-1 基因和蛋白表达水平均高于正常脑组织，并且随着胶质瘤病理级别增高，其蛋白水平及信使RNA 水平也升高。Bologna-Molina 等［10］研究显示， 在出现包膜外浸润的甲状腺乳头状癌中Syndecan-1 表现出高表达， 可能与肿瘤进展有关。Kim 等［11］研究表明，在原发性非肌层浸润性膀胱癌中，Syndecan-1 高表达提示较低的肿瘤分期。 但Wei 等［12］通过研究发现，syndecan-1 表达缺失与结直肠癌发生、组织学分化和临床分期密切相关。 该文研究结果显示，Syndecan-1 阳性染色主要位于细胞膜中，为棕色及棕黄色颗粒样，但细胞质中也有所表达。 癌旁正常肺组织中Syndecan-1 均为高表达， 肺腺癌组织中Syndecan-1 高表达者33 例（43.4%），表达明显降低。 笔者统计76 例肺腺癌患者相关临床病理指标，并与Syndecan-1 的表达情况进行分析显示：肺腺癌组织中Syndecan-1 的低表达与肿瘤分化程度（χ2＝5.545，P＝0.032）、卫星结节（χ2＝6.061，P＝0.018）、 区域淋巴结转移 （χ2＝7.727，P＝0.01）、pTNM 分期 （χ2＝14.434，P＜0.001） 存在相关性。结果表明Syndecan-1 低表达与肺腺癌较差的组织分化、较强的侵袭活性、较高的肿瘤分期有关，提示Syndecan-1 表达缺失或部分缺失促进了肺腺癌的发生及发展过程。

大量研究表明，部分肿瘤组织中Syndecan-1 的表达模式可与该肿瘤的恶性程度及患者的临床预后直接相关，可以成为评估该肿瘤患者预后的生物学标志物［8］。 Nguyen 等［13］研究发现，在远处转移的乳腺癌组织中，Syndecan-1 的表达情况与组织学分级、激素受体状态显著相关，且Syndecan-1 高表达表现出较差的总生存率和无病生存率。 Anttonen等［14］研 究 证 实，Syndecan-1 高 表 达 在 肺 鳞 癌 中 与较好的预后及较高的总体生存率存在相关性。 Guo等［15］研究表明：在卵巢癌中，Syndecan-1 低表达患者临床预后较差，可作为判断肿瘤预后的指标。 笔者运用Kaplan-Meier 生存曲线来评估Syndecan-1的表达情况与76 例肺腺癌患者的总生存率的相关性显示：Syndecan-1 低表达组患者三年生存率为14.0%，Syndecan-1 高表达组患者三年生存率为30.3%，Syndecan-1 低表达组患者生存时间较Syndecan-1 高表达组患者明显下降，差异具有统计学意义（χ2＝12.555，P＜0.001）。 单因素COX 回归分析结果显示：Syndecan-1 低表达是影响肺腺癌患者总体生存率的危险因素之一 （P＝0.001）。 多因素COX 回归分析结果显示：Syndecan-1 低表达可与pTNM 分期一样， 可以作为肺腺癌患者总生存率的独立预后预测因子（P＝0.032）。据此推断，Syndecan-1 表达还可以作为评估肺腺癌患者预后的生物学标志物。

综上所述，该研究初步探讨了原发性肺腺癌组织中Syndecan-1 的表达情况及其与肺腺癌患者临床病理特征和预后的关系。该研究表明，Syndecan-1低表达与肺腺癌的组织分化、侵袭活性、肿瘤分期以及患者的不良预后显著相关。 故笔者认为，Syndecan-1 的表达可作为判断肺腺癌患者预后的重要参考指标。