miR-155在不同病理特征胃癌患者癌组织中的表达情况及其对预后的影响

赵芳宗 王 培 李丹丹 朱小娟

胃癌是常见消化系统恶性肿瘤，早期无明显症状，胃镜常规筛查普及率低，多数患者确诊已到晚期，失去最佳治疗时机。MiRNA作为生物学研究热点已有时日，人类miRNA具有充当肿瘤基因或抑制瘤基因作用，对其它靶基因表达和信号通路有调控作用，在肿瘤发生、进展及转归中有重要作用[1-2]。miR-155目前被发现与乳腺癌、直肠癌等多种恶性肿瘤发生有关，在多种血液系统肿瘤和实体瘤中有高表达[3]。目前关于miR-155与胃癌关系的研究甚少，本研究分析胃癌癌组织miR-155表达与预后和铂类化疗后效果的关系，为今后胃癌病情观察和疗效评估提供参考，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

纳入标准[4-5]：穿刺细胞学或胃镜组织病理学诊断的胃癌；未曾接受过放化疗；影像学检查发现可测量肿瘤靶病灶；ECOG≤2分；预计生存时间≥1个月；肌酐<1.5倍ULN，胆红素<1.5倍ULN，碱性磷酸酶≤2.5倍ULN，谷丙及谷草转氨酶≤2.5倍ULN，血小板计数≥100×109/L，血红蛋白≥80 g/L，中性粒细胞计数≥2.0×109/L，白细胞计数≥4.0×109/L。排除标准[6-7]：其它恶性肿瘤；为控制的高血压、糖尿病、感染；哺乳期及妊娠期女性。从病理科获取研究对象经福尔马林固定石蜡包埋组织标本和距癌组织至少2 cm的癌旁非癌组织标本。根据上述标准于2013年1月至2018年1月纳入胃癌患者87例，患者年龄、性别分布及分化情况等见表1。

1.2 方法

使用过美国LC Science公司提供的RNA提取式试剂盒，按说明书操作，用琼脂糖凝胶电泳法检测RNA完整性，miR-155茎环反转录反应引物为5'-CGC TGC TAC CTG AGA GTA GAC CAG ATG CAG CGA CCC CT-3'。伤害博仕生物技术公司提供的反转录试剂盒配置10 μl反转录体系，37 ℃下反应15 min，85 ℃下反应5 s，之后放在-20 ℃中保存。用Real-time PCR检测miR-155，涉及引物，用SYBR Green实时荧光定量PCR试剂盒配置25 μl PCR反应体系，94 ℃下反应3 min，预变性后在94 ℃下反应30 s，45 ℃下反应30 s，72 ℃下反应30 s，35个循环，所有反应均有2个复孔，记录每管中荧光信号达到的阈值时经历的循环数，取2次平均值，经内参基因归一化，计算癌组织和配对癌旁组织miR-155水平。

1.3 观察指标

①对比癌组织与癌旁组织中miR-155水平；②观察癌组织中miR-155水平与临床病理特征的关系；③将肺癌组织中miR-155表达高于本研究中平均水平的患者归为高表达组，低于平均水平的归为低水平组，对比两组进展生存时间；④癌组织miR-155水平不同疗效组中的表达。其中疗效参考RECIST1.1版本相关标准[8]：目标病灶：目标病灶完全消失，病理淋巴结短径减少至10 mm以下，且所有非目标病灶消失，肿瘤标记物水平正常，无新发灶，为完全缓解；所有目标灶消失，病理淋巴短径均将至10 mm以下，有1个或多个非目标灶持续存在或(和)肿瘤标记物水平持续高于正常值为部分缓解，或目标病灶最大径之和较基线缩小至少30%，无新发病灶或(和)非目标病灶进展也可判断为部分缓解；目标病灶最大径之和较基线缩小至少30%，同时无新病灶出现或(和)非目标病灶进展，为稳定；此外均视为进展。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 癌组织与癌旁肺癌组织中miR-155水平对比

癌组织miR-155平均值为(0.449±0.031)，癌旁非癌组织为(1.124±0.110)，t=55.090(P=0.0000)。

2.2 癌组织中miR-155水平与临床病理特征的关系

侵犯层次为T3/T4者miR-155表达较T1/T2低；TNM分期为Ⅲ/Ⅳ者较Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴结转移者miR-155水平较无淋巴结转移者低。以上比较差异无统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 胃癌癌组织中miR-155水平与其临床病理特征的关系

2.3 随访6个月癌组织miR-155高表达组与低表达组预后对比

低表达组共49例，随访6个月总生存率为79.59%(39/49),高表达组随访6个月总生存率为93.88%(46/49)，χ2=8.099(P=0.0044)。低表达组6个月无进展生存率为71.43%(35/49)，高表达组为85.71%(42/49)，χ2=6.632(P=0.0100)。miR-155与PTEN表达呈正相关(γ=0.813，P<0.01)。

2.4 癌组织miR-155水平不同疗效组中的表达

miR-155水平在癌组织中表达水平由高至低依次为完全缓解组、部分缓解组、病变稳定组、病变进展组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。相关性分析(Spearman)发现疗效与癌组织miR-155表达呈负相关(γ=-0.561，P<0.01)。

表2 胃癌癌组织中miR-155在不同疗效患者中的表达

3 讨论

MinRNA是非编码小分子RNA，转录后水平对目标基因表达实现负调控，引起靶mRNA分子降解，或出现翻译抑制。本研究中miR-155广泛分布在人类细胞及组织中，是发现较早的miRNAs之一，在多种恶性肿瘤中有异常表达，例如上皮型卵巢癌、膀胱癌、结直肠癌、黑色素瘤等[9]。目前许多研究发现其在组织中表达具有特异性，关于其在癌组中的表达意义研究逐渐增多。本研究中对比胃癌患者癌旁非癌组织和癌组中miR-155表达水平，癌组织miR-155平均值为(0.449±0.031)，癌旁非癌组织表达为(1.124±0.110)(P<0.05)。这与梁雪艺等[10]研究者报道的胃癌晚期患者癌组织中miR-155、miR-192水平较癌旁组织表达低，miR-30a较癌旁组织高的结果基本一致。

目前关于miR-155与癌症的大部分研究发现miR-155高表达患者预后相对较好；但也有个别研究发现miR-155在恶性肿瘤发生进展中具有促癌基因作用，其表达与预后为负相关[11-12]。miR-155表达在不同肿瘤患者中表示不同的预后，这可能与肿瘤组织特异性有关，或是miR-155样本提取不同所致，例如一些研究者是观察血浆miR-155水平或是细胞miR-155水平，一些研究者是观察血清miR-155水平，而本研究观察组织miR-155水平[13-14]。在本研究中癌组织miR-155水平高表达预示较好的预后。侵犯层次为T3/T4者miR-155表达较T1/T2低；TNM分期为Ⅲ/Ⅳ者较Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴结转移这miR-155水平较无淋巴结转移者低。而早期胃癌淋巴结转移患者病情更严重，其预后受诸多因素制约，淋巴结转移、高分期、侵犯层次深是胃癌预后不良因子。本研究通过对比高表达组和低表达组无进展生存时间，发现低表达组6个月总生存率为79.59%，无进展生存率为71.43%，均较高表达组(93.88%、85.71%)低(P<0.01)。以上研究结果均提示胃癌患者癌组织中miR-155水平高低与预后密切相关。

铂类药物是晚期胃癌一线用药，但是肿瘤细胞有铂类耐药现象，导致临床治疗面临巨大困难。miRNA异常表达与肿瘤对铂类化疗药物的敏感程度相关；一些研究者指出晚期胃癌患者miR-21及miR-181b表达与含奥沙利铂化疗后预后有关，其中低表达组预后较高表达组好[15]。现有研究均认为其表达与化疗效果有一定关系。本研究通过对比发现miR-155水平在癌组织中表达水平由高至低依次为完全缓解组、部分缓解组、病变稳定组、病变进展组，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步相关性分析证明癌组织miR-155表达与铂类化疗效果呈正相关关系(P<0.01)，提示miR-155有抑制胃癌基因作用。体外实验发现miR-155能抑制锌指 E-盒结合同源异型盒 1基因表达，从而抑制胃癌肿瘤细胞侵袭和转移。

综上所述，胃癌组织miR-155表达水平与胃癌患者预后及铂类化疗方案疗效相关，是观察胃癌进展和预后的重要指标。