野棉花醇提物镇痛、抗炎、止泻及安全性实验研究

赵春梅 黄加文 肖茹月 杨和金 王自梁 杨鸥

摘要：目的 观察野棉花醇提物的镇痛、抗炎、止泻作用及急性毒性研究。方法 采用小鼠醋酸扭体法、小鼠二甲苯耳廓肿胀、小鼠肠推进实验，以及急性毒性试验。结果 野棉花醇提物能减少醋酸所致的小鼠扭体反应次数，降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度，可显著抑制墨汁在小鼠小肠的推进运动。野棉花醇提物24h内小鼠灌胃给药最小致死量为16.00 g/kg.bw（相当于生药101.91 g/kg.bw），死亡率为10%;最大耐受量为13.60 g/kg.bw（相当于生药86.62 g/kg.bw），死亡率为0%。结论 提示野棉花醇提物具有明显的镇痛、抗炎、止泻作用，且具有一定毒性。

关键词：野棉花醇提物;止痛剂;抗炎;抗腹泻

中图分类号：R285.5   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2019）09-0063-03

【Abstract】Objective：To observe the analgesic，anti-inflammatory，antidiarrheal effects and acute toxicity of wild cotton alcohol extracts. Methods：Mouse acetic acid writhing method，mouse xylene auricle swelling，mouse intestinal propulsion experiment and acute toxicity test were conducted. Results：The wild cotton extract could reduce the number of writhing reactions induced by acetic acid in mice，reduce the degree of swelling of mouse ear caused by xylene and significantly inhibit the advancement of ink in the small intestine of mice. The minimum lethal dose of mice fed with wild cotton extract within 24h was 16.00 g/kg. bw（equivalent to 101.91 g/kg. bw of crude drug）and the mortality rate was 10%. The maximum tolerated dose was 13.60 g/kg. bw（equivalent to 86.62 g/kg. bw of crude drug）and the mortality rate is 0%. Conclusion：It is suggested that the wild cotton alcohol extract has obvious analgesic，anti-inflammatory and antidiarrheal effects and also has certain toxicity.

【Key words】wild cotton alcohol extract，analgesic，anti-inflammatory，anti-diarrhea

野棉花（學名：Anemone vitifolia Buch.-Ham.）是毛茛科植物野棉花的根，银莲花属多年生草本植物。分布于中国云南、四川西南部、西藏东南部和南部[1]。缅甸北部、不丹、尼泊尔、印度北部也有分布。生长于山地草坡、沟边或疏林中。野棉花具有清湿热，解毒杀虫，理气散瘀的功效。对野棉花的药理作用研究极少，因此，本文对野棉花的乙醇提取物进行了药理研究，探讨其在镇痛、抗炎、止泻方面的药理作用，为将来开发应用野棉花提供实验依据，现将实验结果报道如下。

1 实验材料

1.1 药物 野棉花醇提取物，由云南省药物研究所提供，70%乙醇提取3次，减压回收，干燥。提取率为15.7%。使用时用纯水配制。药效试验给药剂量以急性毒性试验结果为依据确定。阿司匹林肠溶片，100mg/片，Bayer Schering Pharma生产，批号：BJ10778;云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号：ZAA1323;冰醋酸，天津市天达净化材料精细化工厂，批号：020112;二甲苯，广东省化学试剂工程技术研究开发中心，批号：20090831。

1.2 动物 SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，由广东省医学实验动物中心提供。许可证号：SCXK（粤）2013-0002。小鼠分性别饲养于空调实验室内，室温（25±2）℃，相对湿度40%～70%，喂颗粒标准饲料，自由饮水和摄食。

1.3 统计方法 实验结果以（x±s）（n）表示，n是每组动物数目。试验数据采用SPSS 16.0统计软件进行“Independent-Samples T Test”检验。

2 方法

2.1 镇痛试验 选用KM小鼠48只，雌雄各半，随机分为4组，组别及剂量如表1，按照表1剂量ig给药，每日1次，连续8 d。末次给药后45 min，ip0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g/只，记录15 min内的扭体反应（小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张，臀部抬起反应为准）次数，并计算其抑制率。实验结果见表1。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg 2组均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，抑制率分别为：41.52%、63.50%，与空白对照组相比较具著性差异，显示出镇痛作用。

2.2 抗炎试验 选用KM小鼠48只，按体重随机分为4组，每组雌雄各6只，分组及给药情况见表2。各组均预先每日灌胃给药1次，连续9 d，对照组灌服等容量纯水，各组灌胃容积均为20 mL/kg体重。末次给药后30 min，各组小鼠于右耳两面均匀涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂为对照。致炎后1 h脱颈椎处死动物，用直径6 mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，取耳片称重，以两耳片重量之差作为肿胀度。实验结果见表2。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg两个剂量均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，2组抑制率分别为：32.37%、35.30%，尤以8.00 g/kg剂量组作用明显，与空白对照组相比较具有显著性差异。显示出抗炎作用。

2.3 肠推进作用研究 选用KM小鼠48只，小鼠按体重随机分为4组：正常对照组、复方地芬诺酯片组、野棉花醇提物低、高剂量组。禁食12 h后，按剂量灌胃给药1次，给药30 min后，以0.2 mL/只给药量灌服墨汁（5%的炭末溶于0.5%的羧甲基纤维素钠）20 min后脱颈椎处死小鼠，打开腹腔，分离肠系膜，剪取自幽门至回盲部的小肠，测量小肠长度、推进距离（幽门到墨汁推进前沿距离）。结果见表3。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg两个剂量均能显著抑制墨汁在小鼠小肠的推进运动，2组抑制率分别为：83.42%、94.03%，4.0 g/kg，8.0 g/kg剂量组与空白对照组相比较差异显著（P<0.001，P<0.001）。显示出肠推进抑制作用。

2.4 小鼠急性毒性实验

2.4.1 正式实验 根据预实验的结果，将KM小鼠60只随机分为3组，即溶媒对照组和野棉花16.00 g/kg、13.60 g/kg.bw 2个剂量组，每组20只，雌雄各10只。动物禁食不禁水约6 h 2 min～6 h 45 min后，按40 mL/kg体重一次灌胃给予相应供试品，观察其急性毒性反应和死亡情况，以后每天观察1次，连续14 d;于给药第4、7、14 d称量体重;观察结束处死动物，大体解剖观察各动物脏器、器官的体积、颜色、质地等有无明显异常。

2.4.2 结果与分析

2.4.2.1 毒性反应 小鼠灌胃给予供试品野棉花醇提物后，在4 h内出现毒性反应，主要表现为运动减少、俯卧等，死亡动物出现惊厥、抽搐、角弓反张等反应。至第2 d恢复。给药组动物的毒性反应见表4。

2.4.2.2 死亡情况 观察期内16.00 g/kg.bw雌性小鼠死亡1只，雄性小鼠死亡1只，死亡率为10%;13.60 g/kg.bw剂量组无小鼠死亡，死亡率为0%。

2.4.2.3 体重 试验期间，给药后第3、7、14 d，16.00 g/kg.bw剂量组雌、雄小鼠体重增长缓慢，与溶媒对照组比较具有显著性差异;给药后第3、7、14 d，13.60 g/kg.bw剂量组雄性小鼠体重增长缓慢，与溶媒对照组比较具有显著性差异;给药后第7、14 d，13.60 g/kg.bw剂量组雌性小鼠体重增长缓慢，与溶媒对照组比较具有显著性差异。结果見表5。

2.4.2.4 解剖观察 观察14 d结束后脱颈椎处死的动物进行大体解剖观察，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔，各组织和器官的体积、颜色、质地等，野棉花醇提物各剂量组、溶媒对照组各小鼠器官均无肉眼所见异常。

2.4.3 评价与结论 在本实验条件下，对野棉花醇提物不同剂量进行24h内小鼠单次灌胃给药急性毒性试验，可见动物于4 h内出现毒性反应，主要表现为运动减少、俯卧等，死亡动物出现俯卧等反应。至第2 d恢复。试验结束对存活动物进行大体解剖观察，各组动物脏器、器官的体积、颜色、质地等均未见明显异常。野棉花醇提物24 h内小鼠灌胃给药最小致死量为16.00 g/kg.bw（相当于生药101.91 g/kg.bw），死亡率为10%;最大耐受量为13.60 g/kg.bw（相当于生药86.62 g/kg.bw），死亡率为0%。

3 讨论

野棉花是云南民间常用药。文献记载野棉花具有清湿热，解毒杀虫，理气散瘀的功效。主治泄泻、痢疾、黄疸、疟疾、蛔虫病、蛲虫病、小儿疳积、脚气肿痛、风湿骨痛、跌打损伤、痈疽肿毒、蜈蚣咬伤，野棉花药理作用的活性成分及其作用机制研究较少。为了探讨和开发野棉花的药用价值，笔者对其进行了镇痛、抗炎、止泻药理作用的实验研究。急性毒性实验显示，野棉花醇提物24 h内小鼠灌胃给药最小致死量为16.00 g/kg.bw（相当于生药101.91 g/kg.bw），死亡率为10%;最大耐受量为13.60 g/kg.bw（相当于生药86.62 g/kg.bw），死亡率为0%。表明其具有一定毒性。野棉花能抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，可显著抑制墨汁在小鼠小肠的推进运动，说明野棉花具有肠推进抑制作用，具有镇痛作用和抗炎作用。实验结果为野棉花将来产品研发和临床应用提供了科学依据。

参考文献：

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999.

（收稿日期：2019-06-05）