双路普雷沃菌致阴囊脓肿及血流感染2例

李青，袁有华

(河南省人民医院检验科，河南 郑州450003)

双路普雷沃菌是普雷沃菌属中的重要菌群之一，属于人体的正常菌群，在机体缺氧，免疫力低下或长期服用免疫抑制剂类药物时可引起人体感染，其可在全身各个部位定值，在合适环境下大量繁殖造成组织器官损伤[1]。双路普雷沃菌是一种专性厌氧菌，由于厌氧菌培养条件特殊，在临床工作中检出率比较低。我科近日从一例阴囊脓肿患者的穿刺脓液标本及一例剖宫产产妇的血液培养中检出了双路普雷沃菌，现报告如下：

1 病例资料

患者1，男性，41岁，以“发现阴囊肿块30年余，阴囊肿胀、疼痛5d”为主诉入院，入院查体：体温36.6℃，脉搏80次/min，呼吸20次/min，神志清，精神可，双侧睾丸发育正常，阴囊发育正常，体积增大，5天前不明诱因致阴囊肿胀伴疼痛，阴茎根部可触及波动性包块，无尿频、尿急、肉眼血尿，无发热、咳嗽、咳痰、恶心、呕吐等不适症状。否认高血压、心脏病史，否认糖尿病史、脑血管病史，有结核病史，否认外伤、输血史。辅助检查：血常规WBC9.77×109/L，尿常规、凝血六项及传染病检查未见异常。彩超示阴囊皮下混合回声包块，在超声下进行阴囊脓肿穿刺抽液术，抽出血性粘稠脓液10ml。

患者2，女性，25岁，以“停经 8月余，下腹部坠胀3d”为主诉入院，入院查体：体温36.8℃，脉搏96 次/min，呼吸 20 次/min，血压 123/82mmHg，心肺听诊无异常，双下肢无浮肿，腹部膨隆如孕周，宫高34cm，腹围112cm，无压痛、反跳痛，胎心率138次/分，未触及宫缩，无阴道流液、无出血，彩超示晚孕单胎，胎盘前置(中央型)，脐带绕颈。入院诊断：宫内孕36+2周，孕3产1，凶险性前置胎盘，瘢痕子宫。入院第二天行子宫下段第二次剖宫产术，术后第二天体温升高，最高达39.2℃。于左上肢静脉、右上肢静脉、左下肢静脉各采集20ml血量，分别注入需氧和厌氧培养瓶。

2 细菌培养及鉴定

2.1 培养结果 患者1的脓液标本革兰染色后油镜下见大量成簇分布的革兰阴性球杆菌见图1，然后接种于血平板、麦康凯平板和巧克力平板，常规培养至48h后仍未见细菌生长。考虑有厌氧菌可能，将病人标本重新接种于血平板、麦康凯平板和巧克力平板，放入厌氧产气袋后温箱培养至48h，血平板上发现灰白色、圆形、湿润、光滑的中等菌落，边缘整齐见图2，涂片染色为革兰阴性球杆菌见图3，巧克力平板上发现灰白色、圆形、针尖样菌落见图4，麦康凯平板未见细菌生长。

图1 直接涂片下革兰染色镜检结果(×1000)

图2 厌氧培养48h血平板菌落形态

图3 纯培养革兰阴性球杆菌染色结果(×1000)

图4 厌氧培养48h巧克力平板菌落形态

将患者2的3套血培养瓶放入BACTEC FX全自动血培养仪中培养，3个厌氧瓶在33h内均报阳性，3个需氧瓶5d均未报阳性。阳性厌氧瓶革兰染色后均见大量革兰阴性球杆菌见图5，使用质谱快速鉴定为双路普雷沃菌。选取左上肢静脉的厌氧瓶转种于血平板、麦康凯平板和巧克力平板各2个，其中一套平板放温箱培养至48h后，未见细菌生长。另一套平板放入厌氧产气袋培养至48h后，血平板上发现灰白色、圆形、湿润、光滑的中等菌落，边缘整齐，涂片染色后镜检为革兰阴性球杆菌，巧克力平板上发现灰白色、圆形、针尖样菌落，形态同患者1，麦康凯平板未见细菌生长。

图5 阳性血培养瓶涂片革兰染色镜检结果(×1000)

2.2 鉴定结果 挑取血平板上单个菌落使用MALDI-TOF(德国布鲁克公司全自动质谱仪)快速鉴定细菌，结果为双路普雷沃菌，患者1的分值是2.000见图6，患者2的分值是2.193。使用16Sr-RNA测序通用引物16S-F(5’-AGGAGGTGATCCAACCGCA－3’)和 16S-R(5’-AACTGGAGGAAGGTGGGGAT－3’)对两患者待测菌株的DNA进行PCR扩增[2]，扩增产物送苏州金唯智生工生物工程有限公司进行测序，测序结果在GenBank网站进行比对分析，为双路普雷沃菌，符合率99%，部分测序见图7。

2.3 临床治疗疗效 患者1阴囊脓肿穿刺抽液术中抽取出10ml血性脓液，术后使用左氧氟沙星静脉滴注，疼痛症状迅速缓解。患者2剖宫产术后头孢呋辛静脉点滴预防感染，术后第二天高热，给予哌拉西林钠他唑巴坦钠联合左氧氟沙星氯化钠注射液进行治疗，连续使用3天，产妇体温36.5℃，恢复正常。

3 讨论

本文患者1的阴囊脓肿常见病原菌有金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等需氧菌[3，4]。患者1涂片中发现革兰阴性球杆菌，但常规培养未见细菌生长，结合标本异常性状考虑可能是厌氧菌感染，所以重新接种放厌氧袋中培养，48h后培养鉴定出双路普雷沃菌。

本文患者2术后出现高热后及时采集3套血培养，3套血培养的厌氧瓶均检出双路普雷沃菌，故可以排除污染菌，使用MALDI-TOF质谱仪快速鉴定细菌，将血培养阳性的Ⅱ级报告时间提前了48h，弥补了血培养鉴定时间长的缺陷，为临床快速诊断提供了帮助。

纵观近年来检出的厌氧菌，我们不难发现多数厌氧菌感染为无芽孢的革兰阴性杆菌，种类较多，其中以类杆菌属中的脆弱类杆菌多见[5，6]，像本文中的双路普雷沃菌也有报道，但以本文中患者2的血流感染为多见[7]。在实验室检查中应注重细菌涂片结果，如果涂片中发现细菌，培养未见细菌生长应考虑有厌氧菌可能，需重新接种标本做厌氧培养。如果遇到脓液标本的颜色性状明显异常，则可以常规培养的同时加做厌氧培养，提高厌氧菌的检出率，早日发现病原菌。

双路普雷沃菌属于普雷沃菌属，普雷沃菌属是一种从类杆菌属中分出的新菌属，专性厌氧，目前有50多个种，多为条件致病菌，主要存在于口腔、肠道、女性生殖道等处，在合适的环境中大量繁殖引起组织器官的损伤，如牙周炎、阴唇疖肿、盆腔脓肿等[8-11]。

图6 MALDI-TOF鉴定质谱蛋白图谱

图7 16SrRNA基因序列测序图

随着最近几年对厌氧菌的关注，现在已经了解的是大部分的脑脓肿、牙周脓肿、盆腔脓肿等是由厌氧菌感染引起的[12-13]，但临床实验室中厌氧菌的阳性检出率明显低，与各实验室条件、标本送检过程不规范、临床早期使用抗生素等均有关系。在临床工作中应加强与临床的沟通，严格按照操作规程，规范标本的采集及运送过程。实验室检查人员应综合标本特点、感染部位、临床症状以及抗生素治疗效果等推测是否有厌氧菌感染特征，若存在厌氧菌感染可能应及时加做厌氧培养，提高病原菌的检出率，为临床治疗提供依据。