简易方法检测O型妇女IgG型抗A(B)抗体效价的临床应用价值研究

李小燕 ，王小中 ，曾选 ，姜玉环

(1南昌大学公共卫生学院，江西 南昌330006；2、江西省妇幼保健院输血科 江西 南昌330006)

新生儿溶血病 (haemolytic disease of the newborn and fetus，HDFN)是指母亲和胎儿血型不合导致的胎儿或新生儿的一种免疫性溶血性疾病。胎儿的红细胞抗原源自于父亲和母亲，如果从父亲遗传的那部分红细胞抗原是母亲所缺少的，那么胎儿的红细胞对于母亲来说就是一种异抗原，当它通过胎盘进入母体的血液循环时，可刺激母体产生免疫性抗体。此抗体经胎盘进入胎儿体内，与胎儿红细胞上相应的抗原结合，使红细胞溶解破坏进而出现新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大，甚至死胎、新生儿死亡等溶血病的症状和合并症[3-4]。我国大部分HDN是由ABO血型不合引起，轻者导致新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大，严重者导致核黄疸以及病死。O型孕妇血清中的IgG型抗-A(B)抗体分子量小，可以经过胎盘对含有相应抗原的胎儿血液进行攻击，导致溶血。O型孕妇血清中IgG型抗-A(B)抗体效价或滴度越高，胎儿发生新生儿 ABO 溶血症的概率越大[1，4，9]。 检测孕妇的 IgG抗A(B)抗体效价可以协助临床预测胎儿或新生儿HDFN的发生，以及O型妇女反复流产的原因分析。本研究采用一种简易的方法和传统经典抗人球蛋白法平行检测O型妇女血清中的IgG抗A(B)效价，分析两种检测结果的差异，探讨简易方法在O型孕妇或O型反复不良孕产史妇女产前检查IgG抗体效价的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2018年5月-2018年12月在本院门诊或住院做产前或孕前检查的O型妇女，其丈夫均为非O型，做孕前检查的包括有反复流产史的妇女流产原因检查。年龄在16～45岁。身体健康，无肝肾及血液系统疾病，不规则抗体阴性。送检抗A效价103例，送检抗B效价105例，送检抗A/B效价69例。用简易方法和传统经典抗人球蛋白法平行检测共346个抗A(B)效价，其中抗A共172例，抗B共174例。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 离心机 (日本久保田KA-2200)，水浴箱 (上海精宏医疗器械DK-BB)，0.2mol/L2-Me、2%～5%标准A、B型红细胞悬液、抗人球蛋白试剂(上海血液生物医药有限公司)

1.2.2 标本预处理 取200ul妇女血清标本和200ul0.2mol/L2-Me应用液充分混匀，试管加塞置37℃水浴箱温浴 15～30min[2-3]。

1.2.3 简易方法 取一支试管，标记，取100ul处理好的血清及50ul2%～5%标准A(B)细胞加入试管，混匀，置37℃水浴箱温浴60min后不离心轻摇试管肉眼观察红细胞凝集情况，依据凝集强度判断相应效价。具体强度及相应效价判断方法如下：

无凝集红细胞，即细胞呈细沙状无凝集颗粒：判断效价≤32

红细胞有+-强度凝集，即有肉眼可见的细小凝集颗粒，底液浑浊：判断效价64

红细胞有1+强度凝集，即有较粗凝集颗粒，底液浑浊：判断效价128

红细胞有2+强度凝集，即有较粗凝集颗粒，且底液清亮：判断效价256

红细胞有3+强度凝集，即凝集颗粒大块，带有少许小块，底液清亮：判断效价512

红细胞有4+强度凝集，即凝集颗粒为整块，底液清亮：判断效价≥1024

1.2.4 传统经典抗人球蛋白法 取十支试管标记，从第 2 管(1：4)至第 10 管(1：1024)每管加 200μl生理盐水，阴性对照管加100μl生理盐水。向倍比稀释管中加入200μl处理后的血清做倍比稀释。取每个稀释度的待检血清100μl，加入50μl2%～5%标准 A(B)细胞，900～1000g 离心 15s，观察 IgM 是否中和彻底，将盐水介质不出现凝集的管，重新轻摇混匀后做间接抗人球蛋白实验。具体细节参考文献[2-3]。

1.3 统计学分析 简易法与传统经典抗人球蛋白法检测结果取稀释倍数为数据，对数据用SPSS22.0软件分析。两种方法阳性检出率比较采用四格表配对资料χ2检验验证，P＜0.05为差异有统计学意义，同时做直线相关与直线回归分析并建立回归方程。

2 结果

2.1 两种方法平行检测IgG抗A(B)效价结果比较简易法和传统经典抗人球蛋白法平行检测172例IgG抗A效价，结果完全一致113例，概率为65.70%(113/172)，相差一个稀释度46例，概率为26.74%(46/172)，相差一个稀释度以内概率为92.44%，相差两个及以上稀释度13例，概率为7.56%(13/172)。平行检测抗B效价174例，结果完全一致115例，概率为66.09%(115/174)，相差一个稀释度44例，概率为25.29%(44/1742)，相差一个稀释度以内概率为91.38%，相差两个及以上稀释度15例，概率为8.62%(15/174)。见表1。

2.2 两种方法平行检测IgG抗A(B)效价 以IgG抗A(B)抗体效价≥64为阳性值判断，简易法和传统经典抗人球蛋白法检测IgG抗A抗体效价的阳性率分别为 62.79%(108/172)，66.86%(115/172).两种方法阳性率用卡方检验，(χ2=2.0,P＞0.05)无统计学意义,两种方法检测结果无统计学差异。抗B抗体效价的阳性率分别为47.12%(82/174)，62.07%(108/174).两种方法阳性率用卡方检验，(χ2=2.0,P＞0.05)，无统计学意义，两种方法检测结果无统计学差异。见表2。

表1 两种方法平行检测IgG抗A(B)效价结果比较

表2 以效价≥64为阳性，两种方法检测抗A(B)效价的阳性检出率

2.3 两种方法相关性分析 效价前后相差一管被认为可以接受值[2]，两种方法检测抗A相关性分析结果：两种方法检测结果具有相关性 (r=0.93，P＜0.01)，回归方程为Y=0.964X+0.05，检测抗 B相关性分析结果：两种方法检测结果具有相关性 (r=0.91，P＜0.01)，回归方程为 Y=0.918X-0.015。 见表3。

表3 两种方法平行检测IgG抗A(B)效价

3 讨论

新生儿溶血病(HDN)以AB0和Rh系统最为常见。新生儿溶血病是导致新生儿黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大的重要因素[8]，严重者可导致死胎、新生儿死亡。ABO不和的妊娠比例为20%～25%，其中发病的占10%。ABO HDN多见为0型母亲所生的A型或B型胎儿，第1胎即可发病[1]。自20世纪以来测定IgG抗-A(B)抗体效价的方法国内外推荐的方法为经典抗人球蛋白法[3-4]。经典抗人球蛋白法检测步骤比较繁琐，耗时。目前国内外均生产出微柱凝胶卡以及凝聚胺试剂盒，也在国内取得了检测认可。目前国内检测IgG抗-A(B)抗体效价的方法有经典抗人球蛋白法、微柱凝胶法、凝聚胺法。这些方法各有特点，经典抗人球蛋白法一直被视为标准方法，其特点是过多的洗涤步骤，较长的孵育时间，使得该方法较繁琐、费时，且难以自动化和标准化以及对检测人员的操作手法要求较高。微柱凝胶卡法具有操作简便、易于标准化、结果可保存等优点，且方便快捷利于临床推广。但近年来的研究表明微柱凝胶卡法在检测红细胞抗体效价方面与经典抗人球蛋白蛋白法相比具有更高的敏感性而需要重新界定参考值，且价格昂贵使得该方法难以得到广泛推广。凝聚胺法近年来在血型血清学中被逐渐采用，其基础也是抗球蛋白法，凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在低离子介质中可促进红细胞和血清之间的抗原抗体反应使试验灵敏度提高。但它在实验温度较低或患者含冷抗体时凝集会变得更强而会干扰实验结果[5，6]。以上方法均需要对处理后血清做系列倍比稀释，步骤繁琐，样本量大时操作难度较大。本研究的简易法操作简便，实验成本低廉。

另外，抗体效价检测方法仅为半定量技术。所用技术的不同，在很大程度上可影响反应结果。移液技术及移液量的大小都将影响抗体效价结果[2]。采用经典抗人球蛋白法重复检测同一实验标本结果一致率也仅为79%，相差一个滴度以内概率为92%[7]。本研究的简易方法更为简便，适用于产前批量筛检O型妇女IgG抗-A(B)抗体效价，该方法和传统经典抗人球蛋白法相比有较好的一致性及重叠性。在进行O型妇女产前IgG抗A(B)抗体效价检测时，可在使用经典抗人球蛋白法时或凝胶卡等其他方法时加做简易法，两种方法结果相互验证以提高检测结果的准确性。但本研究范围仅限于检测O型孕妇或因抗体效价高而引起反复流产的O型妇女的IgG型抗A(B)抗体效价，针对小于32的效价值需要用传统经典抗人球蛋白法或凝胶卡等方法来测定。