上海地区厌氧菌检验室间质量评价

陈 蓉， 刘学杰， 徐 蓉， 葛 平， 王敬华

（上海市临床检验中心，上海 200126）

厌氧菌是一类只能在无氧条件下生长的细菌，其感染可发生于任何部位和脏器，以胸腔、腹腔和盆腔感染多见，占感染的70%～90%，其中1/3～2/3为混合感染[1]。在心内膜炎中厌氧菌的感染率为1.5%～10.0%，在血流感染中厌氧菌的感染率为10.0%～15.0%，在牙源性口面部感染性疾病中厌氧菌的感染率为90.0%～100.0%[2]，在吸入性肺炎中厌氧菌的感染率为90.0%，在腹膜炎、腹腔内脓肿中厌氧菌的感染率为95.0%，几乎所有非性传播造成的女性生殖道感染均与厌氧菌有关，由厌氧菌引起的尿路感染占1.0%～9.0%[2-4]。因此，厌氧菌检验在细菌性感染中占有十分重要的地位。广泛、深入地开展厌氧菌检测的实验室检查，为临床提供及时准确的诊断和治疗依据极为必要。

上海市临床检验中心（Shanghai Center for Clinical Laboratory，SCCL）是上海市临床检验质量控制组织评价机构。2012年9月，SCCL顺利通过了ISO 17043能力验证提供者的现场评审。SCCL每年按计划向各实验室发放未知样本，对检验人员的技术水平进行考核，并对检测结果作出总结[5]。SCCL自2014年开始开展厌氧菌检验室间质量评价（简称“室间质评”）活动，本研究旨在通过统计历年厌氧菌检验室间质评活动反馈结果，了解目前上海地区医疗机构厌氧菌检测的开展情况及检测质量。

1 材料和方法

1.1 室间质评样本制备

脱脂牛奶（光明牌）经110 ℃ 15 min高压蒸汽灭菌冷却后，分装0.3 mL到无菌冻存管中备用。选取美国标准菌种库菌株（American type culture collection，ATCC），将其保存到脱脂牛奶保存管内，置-80 ℃冰箱冷冻后，经冷冻干燥机制备成冻干品，低温保存。低温状态下细菌新陈代谢受到抑制，细菌不繁殖、不死亡。

1.2 方法

1.2.1 室间质评方案设计 对上海市开展厌氧菌检验项目的医疗机构发放室间质评样本。每年进行2次室间质评活动，每次发放5份样本。为了考察实验室对厌氧菌的检出能力和鉴定准确性，设计部分样本为阴性（不含厌氧菌），部分样本为阳性（含有厌氧菌），要求实验室运用日常检测系统进行样本检测，并在规定日期内（自样本接收后10日之内）将检测结果上报至SCCL数据库，超过规定时间系统将不再接收数据。

1.2.2 结果评价与分析 依据回报的检测结果与预期结果的符合性统计各实验室的得分。对含有厌氧菌的阳性样本正确鉴定到种水平得20分；正确鉴定到属水平，而种水平错误，得10分；未检测到厌氧菌不得分。每次活动总成绩≥80分为合格，对成绩进行汇总并对错误的检测结果进行统计分析。

2 结果

2.1 实验室回报情况

厌氧菌检验室间质评活动开展至今共发放样本40份（阴性15份，阳性25份），阳性样本中的厌氧菌涉及5个属15个种，发放的种类和次数见表1。最新的2017年上海地区医疗机构厌氧菌检验项目的开展情况见表2，检测系统见表3。

表1 厌氧菌发放种类及次数

2.2 实验室检测能力评价

2014—2017年共开展了8次厌氧菌检验室间质评活动，2014年第1次室间质评的合格率为96.2%（25/26）（有1家医院成绩不合格），之后3年室间质评的合格率均达到100.0%，尤其是2015年和2016年成绩优秀率（满分100分为优秀）达到了100.0%，见表4。上海地区开展厌氧菌检验项目的医疗机构由2014年的26家逐年增加到2017年的43家，增加了60.5%。

表3 2017年上海地区医疗机构的厌氧菌检测系统

在25株厌氧菌中有17株鉴定结果的符合率为100.0%，其中消化链球菌属100.0%（1/1）、丙酸杆菌属100.0%（1/1）、梭状芽孢杆菌属88.9%（8/9）、拟杆菌属46.2%（6/13）、普雷沃菌属100.0%（1/1），拟杆菌属的鉴定符合率偏低。鉴定结果不符的样本见表5。

表4 2014—2017年厌氧菌检验室间质评成绩 [实验室数（%）]

表5 鉴定结果不符的样本

3 讨论

临床厌氧菌感染非常普遍，需要通过细菌培养、鉴定明确诊断。由于厌氧菌生化反应项目阴性较多，故依据细菌传统表型特征来鉴定厌氧菌是一个难题，仅能满足临床部分厌氧菌的鉴定需要，新型的Bruker MS和Vitek MS全自动快速微生物质谱检测系统未在临床工作中普及[6-8]，因此厌氧菌检测过程的质量保证工作十分重要。室间质评活动能够有效地监测实验室检测能力，发现日常检测工作中存在的问题，是质量保证的重要手段。

本研究通过开展厌氧菌检验室间质评活动，对上海地区医疗机构厌氧菌的检测能力进行了评价，结果表明上海地区该项目整体检测能力较好，2017年2次室间质评未得满分的实验室分别占4.7%和2.3%，说明个别实验室的检测能力有待进一步提高。

实验室回报结果发生错误的原因可能为：（1）多数厌氧菌菌落较小、形态易发生变化、特征不典型等导致识别困难；（2）厌氧菌的革兰染色比需氧菌困难，一般培养24 h以上的厌氧菌容易染成革兰阴性，此种现象尤其容易出现在梭菌属、消化链球菌属和真杆菌属；（3）由于厌氧菌对氧气极为敏感，整个鉴定过程必须在有限的时间内完成；（4）使用厌氧菌鉴定试剂鉴定时要求厌氧菌浓度必须达到3个麦氏单位。我们认为可从上述几方面考虑，加强监管，提高检测质量。

目前我国仅少部分医院把厌氧菌检验作为常规项目并规范开展[9]，上海地区开展厌氧菌检验的医疗机构数虽然在逐年增加，但是到2017年底开展率也仅有31.4%，主要集中在三级综合性医院。未能广泛开展厌氧菌实验室检测的主要原因有：（1）成本偏高。厌氧手套箱、厌氧工作站仪器较昂贵，培养鉴定成本高。（2）操作复杂。大气中的氧对厌氧菌有毒性作用，需要尽量减少厌氧样本在空气中的暴露时间。因此，厌氧样本需要应用厌氧袋等特殊厌氧装置尽快运送，实验室接收临床样本后需要在30 min内处理完毕。（3）厌氧菌培养报告时间长。厌氧菌实验室检测一般需要数天，临床不能得到及时有效的反馈信息，故送检的积极性不高，进一步影响了厌氧菌实验室检测的常规开展。（4）某些临床医生误认为甲硝唑是治疗厌氧菌感染的唯一选择，无需进行厌氧菌检查。但近年已出现耐甲硝唑厌氧菌[10]，单一经验性治疗药物已无法取得满意的治疗效果，因此需要进行厌氧菌培养和药物敏感性试验，选用敏感抗菌药物。

我们建议根据医院规模，对厌氧菌检测进行分级要求和分级报告，1级鉴定可根据耐氧试验结果、革兰染色反应、菌落特点，提供厌氧菌初步推断报告。2级鉴定是在1级鉴定报告的基础上，运用鉴定系统鉴定[11]。这将有利于提高厌氧菌实验室检测的普及率。

随着医疗机构对厌氧菌检测重视度的提高，越来越多的临床实验室逐步会开展厌氧菌检测，相关质量保证工作对于保证结果的准确十分重要。我们希望通过室间质评项目的开展，帮助临床实验室及时发现检测中存在的问题，保证检测质量。

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