不同抗凝剂对大鼠血液生化指标测定结果的影响

刘颖, 王铁山, 刘珍清

(北京中医药大学 北京中医药研究院, 北京 100029)

在药物临床前药理实验、毒理试验中，血液生化指标的检测结果往往是评判肝脏功能、肾脏功能、糖代谢和脂代谢等是否正常的客观而又灵敏的指标。大鼠，作为临床前药理/毒理试验中的常规实验动物之一，在中长期实验需要不同时间点采血或药效指标多需要血液量大时，因其血液量有限而难以满足实验需求。采血液量越小对动物的损伤越小，符合动物福利原则。因此，如何采用最少量的血液来获取更多的可靠的检测结果就显得尤为重要。

在采血容器中预置抗凝剂等添加剂已成为血液标本处理的重要手段, 临床研究中常有报道[1-3]采用抗凝血浆进行血液生化指标的测定，节省了分析时间，改善了临床治疗的及时性。同样，抗凝血浆的使用将解决临床前检测指标多而血液量少的问题[4]。影响大鼠血液生化检测结果的因素有很多[5]，所用抗凝剂的种类将直接影响检验结果的可靠性和准确性。本研究针对正常SD大鼠的血清、EDTA-K2抗凝血浆、柠檬酸钠抗凝血浆和肝素钠抗凝血浆的12种生化指标进行了比较，为SD大鼠的血液生化指标检测中抗凝剂的选择提供了参考。

1材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雄性SD大鼠21只，体质量(200.8±5.2)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司[SCXK(京)-2016-0006]。同一环境下适应性饲养3 d，温度(24.0±1.0)℃，相对湿度55%～ 65%，动物自由进食，饮水，12 h/12 h明暗循环饲养[SYXK(京)2016-0038]。实验开始前动物禁食不禁水12 h。

1.2 仪器试剂

AU-480 全自动生化分析仪(COULTER)购自美国Beckman公司; DT5 -2B 低速台式离心机购自北京时代北利离心机有限公司。所有生化检测试剂均购自美国贝克曼库尔特有限公司。

1.3 检测指标

生化指标共计12 项, 包括: 血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、尿素氮(UREA)、肌酐(Cre)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酸激酶(CK)。

1.4 实验方法

21只SD大鼠标号称体质量后, 采用10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射进行麻醉后, 于腹主动脉取血液, 并采用市售的不含抗凝剂的采血管、涂有肝素钠、柠檬酸钠和EDTA-K2抗凝剂的2 mL的采血管(江苏宇力医疗器械有限公司)，充分混匀，以3 000 r/min离心15 min，取出上层血清、血浆并利用全自动生化分析仪分析每只大鼠四种样本的12个生化指标。

1.5 统计分析

采取SPSS 16.0 统计学软件对于各项数据资料进行分析，每项指标检测值使用表示，进行配对t检验，P＜0.05的差异有统计学意义。

2 结果

表1数据显示，与血清生化检测值比较，肝素钠抗凝血浆的Cre、AST、Alb均明显降低(P＜0.05)、LDH明显升高(P＜0.05); EDTA-K2抗凝血浆的AST、LDH、ALP均明显降低(P＜0.05)、Alb明显升高(P＜0.05); 柠檬酸钠抗凝血浆的CHO、UREA、Cre、AST、CK、LDH、ALP、TP、Alb均明显降低(P＜0.05)。

表 1 血清和抗凝血浆的生化检测值比较

与柠檬酸钠抗凝血浆生化检测值比较，肝素钠抗凝血浆的TG、CHO、UREA、AST、LDH、ALP、TP、Alb均明显升高(P＜0.05); EDTA-K2抗凝血浆的CHO、UREA、AST、ALT、CK、LDH、ALP、TP、Alb均明显升高(P＜0.05)。

与EDTA-K2抗凝血浆的生化检测值比较, 肝素钠抗凝血浆的LDH、ALP均明显升高(P＜0.05),Alb明显降低(P＜0.05)。

3 讨论

医学实验室检查是疾病诊治过程的一个重要环节，其目的是通过各种离体成分的检测提供全面、准确的机体状态信息。随着检验技术的不断进步，对血液标本的要求也越来越高。如何准确规范地使用抗凝剂是实验室全面质量管理的重要内容之一。2002 年WHO 文件[6]《实验室检查中抗凝剂的使用》中强调: 使用抗凝血浆可避免血液中待测成分的改变，与血清比较，其成分能更好反映机体状态，因此部分实验室检查推荐首选血浆。该文件中列举了血液标本317 项指标，将血液标本分为推荐、可用、限制性使用和不宜使用4 类。推荐使用血浆56 项，其中肝素抗凝血浆13 项，EDTA 抗凝血浆17 项，柠檬酸盐抗凝血浆26 项; 推荐使用全血液47 项，其中肝素抗凝全血液7 项，EDTA 抗凝全血液37 项，柠檬酸盐抗凝全血液3 项; 推荐使用血清的项目仅有8 项; 尚有204 项血清或血浆均可使用。本研究中涉及到的12项生化指标，肝素抗凝血浆中除Glu为限制性使用全血液外，其余指标均为推荐或可用；EDTA 抗凝血浆中，除Alb 和ALP为限制性使用或不宜使用，Glu 建议使用全血液外，其余指标均为可用。

抗凝剂因成分和抗凝机制的不同，对结果可产生不同的影响。ALP 是一种含锌的糖蛋白，柠檬酸盐和EDTA能够与锌产生络合物，从而抑制ALP 的活性，造成本研究中EDTA 抗凝血浆和柠檬酸钠抗凝血浆的ALP检测值偏低。

目前，临床前动物实验中仍普遍使用血清进行生化指标测定[7,8]。针对中药的多成分、多活性和多靶点的特点，临床前实验中，大鼠的药效指标设计较多而大鼠血液量相对较少，且大多药

效指标的检测需要抗凝血浆。因此，生化指标的检测若能用抗凝血浆代替血清，药效指标和生化检测指标采用同一份血浆，将解决实验指标多而血液量少的问题。当出现检测指标多而血液量不足时，依据《实验室检查中抗凝剂的使用》[6]和本研究的检测结果，部分检测项目可考虑采用肝素钠抗凝血浆和EDTA 抗凝血浆代替血清进行生化指标测定。