丹参总酚酸滴丸的制备及质量评价

何银舟，胡正明，潘 旻，嵇 晶，程建明∗

（1.淮安市淮安医院，江苏 淮安 223001；2.南京中医药大学，江苏 南京 210023）

丹参为唇形科鼠尾草属多年生草本植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，是临床上较为常用的中药，在治疗心血管疾病、抗肿瘤、抗氧化等方面的应用日益广泛［1-3］。大量药理研究表明［4-6］，丹参水溶性成分丹酚酸可用于心脑血管疾病的治疗，已成功研发出了注射用丹参多酚酸、多酚酸盐等相关制剂，临床疗效良好，目前以注射剂为主，虽然起效迅速，生物利用度较高，但也存在给药不方便、患者顺应性差的问题，同时直接入血，对生产工艺要求高，一旦出现质量问题将引起严重的不良反应，而且该类成分吸收消除快，无法维持长时间较高血药浓度，也导致相关注射剂只适合临床急救。目前，丹参总酚酸常用剂型主要有颗粒剂、片剂、脂质体、滴丸、磷脂复合物等，但由于该类成分大多不耐热，给相关生产工艺带来了难度。

滴丸是指将固体或液体药物与适当基质加热熔化混匀后，滴入不相混溶的冷凝液中，收缩冷凝而成的小丸状制剂［7-8］，具有生产工艺简单、生物利用度高、起效迅速、稳定性好的特点，发展前景广阔。因此，本实验以丹酚酸中主要活性物质丹酚酸B、迷迭香酸为指标，对丹参总酚酸滴丸制备工艺和质量标准进行研究，以期为该类成分深入研究和相关制剂开发提供参考。

1 材料

1.1 仪器 滴丸机由南京中医药大学药学院中药药剂教研室提供；Waters E2695 高效液相色谱仪，配置Waters 2489 UV 检测器（美国Waters 公司）；BT125D 型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；DW-2 型调温电热器（南通市通州申通电热器厂）；FA2004 型电子分析天平（上海上平仪器有限公司）；YP6002 型电子天平（上海光正医疗仪器有限公司）；Unique-s15 型超纯水系统（北京佰亿新创科技有限公司）。

1.2 试药 丹参总酚酸中间体（自制，批号20170304）。液体石蜡、二甲基硅油（上海泰坦科技股份有限公司）；聚乙二醇4000、聚乙二醇6000（无锡市亚泰联合化工有限公司，批号20170301）。丹酚酸 B（含有量98%，批号Y26O7H23683）、迷迭香酸对照品（含有量98%，批号P26A7F13802）（上海源叶生物科技有限公司）。毛细管（华西医科大学仪器厂）；硅胶G 薄层板（青岛海洋化工有限公司）。甲醇（美国赛默飞世尔科技公司，批号LOT18055159）、乙腈（德国默克公司，AS1122-801），以及磷酸（批号D629033）、冰醋酸（批号E1702076）［阿拉丁试剂（上海）有限公司］均为色谱纯；乙酸乙酯（批号 14061411310 ）、三氯化铁（批号14071210994）、铁氰化钾（批号15100210410）、盐酸（批号160912100825）（南京化学试剂有限公司）；甲酸（批号10014128，国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 滴丸制备工艺

2.1.1 冷却剂种类 固定药物与基质配比1∶5，取丹参总酚酸冻干粉1.5 g，加入混合基质7.5 g（PEG4000∶PEG6000=4∶1），65 ℃水浴熔融并搅拌混匀，80 ℃下分别滴入二甲基硅油、液体石蜡中，以滴丸下降速度、成型情况为指标考察冷却剂。结果，二甲基硅油处理时滴丸下降速度合适，丸形规则圆整；液体石蜡处理时滴丸下降速度过快，部分带有小尾巴，可能与其密度较小有关，故选择前者作为冷却剂。

2.1.2 基质配比 PEG4000 具有良好的分散力及较大的内聚力，符合滴丸对基质的要求，再加入一定比例黏度较大的PEG6000 以调整基质成型。两者按1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1 比例混合熔融后滴入二甲基硅油中，制备空白滴丸，以易滴程度、空白滴丸成型情况为指标进行筛选，结果见表1。由表可知，随着PEG4000 比例增大滴速变快，不易控制；当 PEG4000、PEG6000 比例为3∶1 时，基质较易滴出，而且空白滴丸成型性较好，滴丸圆整，硬度适宜，故选择其作为基质。

表1 基质配比考察结果Tab.1 Results of matrix ratio investigation

2.1.3 药物与基质配比 滴丸中药物与基质的配比一般在1∶1～1∶10 范围内，但其过高时易导致滴丸成型困难，而过低时又会使载药量偏低，故在1∶1～1∶6 范围内进行考察，结果见表2。由表可知，1∶5 时效果最理想，故选择其作为药物与基质配比。

表2 药物与基质配比考察结果Tab.2 Results of drug-matrix ratio investigation

2.1.4 滴距、滴速 滴距过小时，液滴到达二甲基硅油中后来不及收缩，导致滴丸不圆整；滴距过大时，液滴容易呈扁形，或者因重力作用而被跌散生小丸［9］，本实验筛选空白滴丸时发现，滴距为6 cm时滴丸圆整度较好。滴速过快时，滴丸连续下沉到冷却剂中，容易相互粘连，圆整度不佳；滴速过慢时，虽然滴丸圆整度好，成型性符合要求，但混合基质易凝固，导致滴口堵塞，并且容易增加丸重差异，从而影响滴丸质量，本实验在不影响成型效果、圆整度的情况下适度提高滴速，控制在60 滴／min。

2.1.5 料温 料温过低时，滴丸易出现拖尾现象，圆整度差；料温过高时，滴丸圆整度降低，若滴制过快则易粘连。本实验发现，混合基质在58 ℃时开始熔融，65 ℃时全部熔融，由于丹酚酸类成分高温不稳定，故选择65 ℃作为料温。

2.1.6 其他滴制条件 根据滴丸成型性和圆整度，确定冷却剂温度为上常温下低温，滴口内、外径为3、4.5 mm。

2.1.7 工艺验证 根据上述优化工艺参数，制备3 批滴丸（批号20170410、20170411、20170412），发现其丸形圆整，色泽均一，硬度较好，无拖尾、粘连现象，表明工艺稳定可行。

2.2 滴丸质量评价

2.2.1 HPLC 法测定丹酚酸B、迷迭香酸含有量

2.2.1.1 色谱条件 Waters XBridge C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-1%醋酸（B），梯度洗脱，程序见表3；体积流量1.0 mL／min；检测波长280 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。

2.2.1.2 对照品溶液制备 精密称取丹酚酸B 对照品4.85 mg、迷迭香酸对照品3.80 mg，分别置于25、250 mL 棕色量瓶中，80%甲醇稀释，即得（190.12、14.90 μg／mL）。

表3 梯度洗脱程序Tab.3 Gradient elution programs

2.2.1.3 供试品溶液制备 取滴丸10 粒，置于100 mL 具塞锥形瓶中，精密称定质量，加入50 mL 80% 甲醇，超声（功率140 W、频率42 kHz）20 min，放冷，80% 甲醇补足减失的质量，滤过，即得。

2.2.1.4 专属性考察 取空白滴丸、含药滴丸适量，按“2.2.2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.2.2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图1。由表可知，PEG4000、PEG6000 对测定无干扰，方法专属性良好。

图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of various constituents

2.2.1.5 线性关系考察 精密量取190.12 μg／mL丹酚酸B 对照品溶液、14.90 μg／mL 迷迭香酸对照品溶液各1、2、4、6、8、10 mL，80% 甲醇定容至10 mL，在“2.2.2.1”项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，得到丹酚酸B、迷迭香酸方程分别为Y=6 216.4X-1 019.6（R2=0.999 66）、Y=10 996X-153.46（R2=0.999 8），分别在19.01～190.12、1.49～14.90 μg／mL 范围内线性关系良好。

2.2.1.6 精密度试验 取152.10 μg／mL 丹酚酸B对照品溶液、8.94 μg／mL 迷迭香酸对照品溶液适量，在“2.2.2.1”项色谱条件下各进样测定6次，测得丹酚酸B、迷迭香酸峰面积RSD 分别为0.88%、1.62%，表明仪器精密度良好。

2.2.1.7 重复性试验 取同一批滴丸，按“2.2.2.3”项下方法制备6 份供试品溶液，在“2.2.2.1”项色谱条件下进样测定，测得丹酚酸B、迷迭香酸含有量RSD 分别为1.72%、1.17%，表明该方法重复性良好。

2.2.1.8 稳定性试验 取同一批滴丸，按“2.2.2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.2.2.1”项色谱条件下于0、3、6、9、12、24 h进样测定，测得丹酚酸B、迷迭香酸含有量RSD 分别为1.72%、1.17%，表明溶液在48 h 内稳定性良好。

2.2.1.9 加样回收率实验 分别取同一批滴丸25、100 粒，置于100 mL 具塞锥形瓶中，加入相当于滴丸中成分含有量80%、100%、120%的对照品后进行提取，取续滤液，在“2.2.2.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，丹酚酸B、迷迭香酸平均加样回收率分别为 97.92%、96.58%，RSD 分别为2.45%、1.64%。

2.2.1.10 样品含有量测定 取3 批滴丸，按“2.2.2.3”项下方法制备供试品溶液，平行3 份，在“2.2.2.1”项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表4。以平均值的-20% 为下限，初步确定丹酚酸B、迷迭香酸含有量分别不得低于5.45%、0.46%。

表4 各成分含有量测定结果（n=3）Tab.4 Results of content determination of various constituents（n=3）

2.2.2 TLC 法定性鉴别

2.2.2.1 供试品溶液制备 取滴丸15 丸，加水1 mL、稀盐酸2 滴，充分振摇，再加乙酸乙酯3 mL振摇1 min，离心2 min，上清液蒸干至2 mL，即得。

2.2.2.2 对照药材溶液制备 取丹参对照药材，按“2.2.2.1”项下方法制备，即得。

2.2.2.3 展开条件 硅胶G 薄层板；展开剂乙酸乙酯-水-甲酸（14∶2∶3）上层溶液；显色剂1%三氯化铁-1% 铁氰化钾（1∶1）溶液，临用时配制。

2.2.2.4 鉴别方法 取3 批滴丸，按“2.2.2.1”项下方法制备供试品溶液，按照2015 年版《中国药典》薄层色谱法（通则0502）试验，结果见图2。

图2 各成分TLC 色谱图Fig.2 TLC chromatogram of various constituents

2.2.3 重量差异限度检查 精密称取滴丸20 粒，计算其总重和每粒丸重，根据2015 年版《中国药典》一部附录判断重量差异是否符合要求。结果，20 粒 滴 丸 丸 重 分 别 为25.56、25.51、25.43、25.57、25.48、25.48、25.43、25.49、25.51、25.54、25.39、25.55、25.62、25.58、25.53、25.53、25.61、25.47、25.45、25.51 mg，平 均25.51 mg＜0.03 g，RSD 为0.24%。药典规定，重量差异限度应±15%，每粒滴丸丸重应在21.68～29.33 mg 范围内，超出标准限度的不得多于2 丸，不得有1 丸超出标准限度的1 倍，由此可知，本实验所制滴丸符合相关要求。

2.2.4 溶散时限检查 取6 粒滴丸于溶出仪的吊篮中，温度设定为37 ℃，发现所有滴丸在5 min内均完全溶解，符合2015 年版《中国药典》一部滴丸剂项下溶散时限不得超过30 min 的规定。

3 讨论

目前，丹酚酸类成分的缓控释制剂仍处于实验室阶段，未见市售产品。张丽红等［10］以大豆卵磷脂制备丹参总酚酸长循环脂质体，发现它可减缓丹酚酸在体内的消除，延长体内滞留时间，提高生物利用度；咸银库等［11］以丹参总酚酸为原料制备速释的口腔崩解片，可提高生物利用度；Jin 等［12］通过制备丹参总酚酸磷脂复合物，改善了脂溶性差的问题；此外，也有关于丹参总酚酸滴丸、胃滞留缓释片的报道［13-15］，为相关制剂研究提供了参考。

本实验以滴丸成型性和圆整度为依据，考察了冷却剂、基质配比、药物与基质配比等影响滴丸成型工艺的因素，最终确定最优工艺为将丹参总酚酸冻干粉研细混匀备用，以PEG4000、PEG6000 为成型基质，按3∶1 比例混合，65 ℃水浴加热熔融，按药物与基质配比1∶5 分次加入冻干粉，搅拌均匀，在滴距6 cm，滴口内、外径3、4.5 mm，滴速60 滴／min 的条件下滴入二甲基硅油冷凝剂（上常温下低温）中，冷却，固化成丸，取出，滤纸吸干表面冷却剂，即得，所得滴丸外观圆整、硬度适宜，制备工艺合理可行。其中，丹酚酸B、迷迭香酸平均含有量分别为6.81%、0.58%，平均丸重为25.51 mg，重量差异限度、溶散时限均符合药典要求。由此可知，该工艺操作简单，生物利用度高，起效迅速，稳定性好，具有广阔的发展前景，可为丹参酚酸类成分研究和相关制剂开发提供参考。