高效液相法与气质联用法测定白酒中对乙酰氨基酚的比较

景赞 刘超 黄志勇 杨永刚

摘 要：目的：建立白酒中非法添加物对乙酰氨基酚的液相和气质联用检测方法，并比较两种方法的差异性。方法：液相法样品直接过滤进样检测，气质联用法采用二氯甲烷提取，QuEChERS净化进样检测，从线性关系、定量限、回收率、精密度及实际样品测定等方面比较差异性。结果：两种方法线性关系良好，回收率81.4%～98.1%，

精密度0.9%～3.0%，气质法定量限0.15 mg·kg-1，液相法定量限0.60 mg·kg-1。结论：液相法和气质法均适合基层检验机构开展对乙酰氨基酚的检测，可以灵活选择。

关键词：白酒;高效液相;气质联用;对乙酰氨基酚;非法添加

Abstract：Object： To compare HPLC and GC-MS/MS for determination of acetaminophen in Chinese spirit. Methods： Samples were filtered before injected to the HPLC， the compound was carried out on ODS-3 C18 column using methanol and ammonium acetate （10+90， 50 mmol·L-1） as mobile phase. The other sample was extracted with dichloromethane and separated by VF-1701ms column. Compare the differences of two methods from recovery， precision， limit quantitation and actual samples respectively. Results： Good linearity was observed in the ranges of 0～10 mg·kg-1 and the limit of quantitation was 0.15 mg·kg-1 and 0.60 mg·kg-1. The method had a great recovery in the concentration range of 1～10 mg·kg-1，

the recovery was 81.4%～98.1%， the precision was 0.9%～3.0%. Conclusion： The simplicity， sensitivity and good precision of the methods made it is well suitable for determination of acetaminophen in Baijiu.

Key words：Chinese spirit; HPLC; GC-MS/MS; Acetaminophen; Illegally add

中图分类号：O657.63;TS262.3

我国是白酒的生产、消费大国，白酒也承载着文化与历史的双重底蕴，但近几年白酒行业的食品安全问题不容乐观，塑化剂、甜味剂、工业酒精勾兑假酒及虚标年份等问题时有发生，2016年相关报道称，个别经销商在白酒中非法添加对乙酰氨基酚，俗称“头痛粉”，并对外宣称饮用该酒不上头，醉酒后不头疼[1-2]。

对乙酰氨基酚是一种常用的解热镇痛药，别名扑热息痛，日常使用中要遵循医嘱，并注意各种禁忌，非法添加在白酒中有很大的安全隐患，长期饮用易造成肝肾功能损伤。目前检测对乙酰氨基酚的方法主要有液相色谱法、液质联用法、近红外漫反射、拉曼光谱法及气相色谱法，主要应用在药品含量测定以及临床研究、代谢组学等方面，应用液相法和气质联用法检测白酒中对乙酰氨基酚尚未有报道[3-8]。液相色谱仪在基层检测单位的普及率较高，气质联用仪也有一定的覆盖，本文可为灵活选用合适的检测方法，有效监管此类非法添加提供可靠及时的检测手段。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

对乙酰氨基酚标准品，购于中国药品生物制品检定所;甲醇，色谱纯;二氯甲烷，分析纯;C18、PSA粉，天津博纳艾杰尔科技。

1.2 仪器与设备

液相色譜仪1260，安捷伦科技有限公司;气质联用仪，TQ-8040，岛津中国有限公司。

1.3 标准溶液的测定

1.3.1 液相法

称取对乙酰氨基酚标准品适量，用甲醇配制成浓度为100 μg·mL-1的标准储备溶液，分别准确移取0、0.1、0.2、0.4、0.6 mL及1 mL上述溶液至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得到0、1、2、4、6 μg·mL-1及10 μg·mL-1的标准系列工作溶液。

1.3.2 气质法

称取对乙酰氨基酚标准品适量，用二氯甲烷稀释至10 μg·mL-1，准确移取0.02、0.04、0.10、0.20 mL及0.40 mL于容量瓶中，用空白提取液定容至2 mL，摇匀，得到浓度分别为0.1、0.2、0.5、1 μg·mL-1及

2 μg·mL-1的标准系列工作溶液。

测定标准溶液，以浓度为横坐标，响应值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.4 样品前处理

液相法。将样品混匀，经0.22 μm有机滤膜过滤后测定。

气质法：称取2 g样品，加入4 mL二氯甲烷和0.6 g氯化钠，振摇4 min，静置分层，将二氯甲烷层移至离心管中，重复提取1次，合并2次提取液。加入0.2 g无水硫酸钠，去除提取液中残余水分，氮吹至近干，用二氯甲烷定容至2 mL，0.22 μm有机滤膜过滤后测定。

1.5 仪器条件设置

1.5.1 液相法

色谱柱：Inertsil ODS-3（150 mm×4.6 mm，5 μm），

流动相：甲醇+0.05 mol·L-1乙酸铵溶液（10+90），流速：1 mL·min-1，检测波：245 nm，柱温：30 ℃，进样体积：5 μL。

1.5.2 气质法

进样口温度：220 ℃，分流比：20∶1;色谱柱：VF-1701 ms毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;柱温箱升温程序：初始温度50 ℃（保持1 min），以15 ℃·min-1升至230 ℃（保持时间10 min）;线速度：50 cm·sec-1;进样体积：1 μL;载气：高纯氦气。接口温度：240 ℃，离子源温度：200 ℃;电离方式：EI，电离能量 70 eV;溶剂延迟：5 min。

2 结果与分析

2.1 前处理方法及仪器条件的选择

白酒样品基质相对简单，直接过滤进样可有效减少处理过程对目标物质的影响。通过实际样品的液相图谱也可以看出，目标物与白酒中其他成分达到了完全分离，不会干扰定性和定量。在190～400 nm范围内扫描对乙酰氨基酚标准物质的吸收波长，结果如图1。245 nm处该物质有最大吸收，选择此波长作为检测波长。

对乙酰氨基酚可溶于多种有机溶剂，前期实验选择乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿、乙腈和甲醇作为提取溶剂，其中二氯甲烷提取液杂质最少，提取效率较高。

将对乙酰氨基酚标准溶液进行Q3扫描，得到总离子流色谱图，见图2，碎片离子见图3，其中109、151质荷比较大，强度远高于其它离子，选择这两个离子作为母离子，进行二级碎裂，优化碰撞电压后，确定两组离子对151>109（定量），109>80（定性），建立气质联用方法，具体MRM参数见表1。

2.2 方法的线性关系和定量限

以浓度为横坐标，响应值为纵坐标，绘制标准曲线，在所测定浓度范围内，线性关系良好。以10倍的信噪比计算定量限，结果见表2。

2.3 加标回收率和精密度

在空白酒样中加入标准溶液使其最终含量分别为0.5、1、2 mg·kg-1，每个水平设定3个平行，按照1.4样品前处理过程，提取后过0.22 μm有机滤膜上机测定，计算回收率和相对标准偏差，结果见表3。液相、气质法加标样品色谱图分别见图4、图5。

2 1.2 1.9

由表3结果可见，2种方法在各浓度水平下的回收率和精密度都较好，液相法因为前处理简单，回收率较高;气质法涉及液液萃取过程，回收率和精密度稍差，但2种方法均满足测定要求。

2.4 实际样品测定

将15组不同浓度的样品，按照上述前处理方法进行提取，分别采取液相法和气质法进行测定，结果见表4。

15个样品的含量测定范围为0.33～14.8 mg·kg-1，经配对t检验，P>0.05，两种方法的测定结果无显著差异。

3 讨论

液相法采用酒样直接过滤后上机分析的方法，节约了样品处理时间，同时液相色谱的应用较为广泛，适合基层检验机构开展工作;气质法仪器昂贵，前处理方法比较耗时，但是较液相法定性准确、定量限更低。对两种方法进行方法学验证得出，准确性、精密度良好，适用于白酒中对乙酰氨基酚的检测，各检测机构可根据实际条件进行选择。

参考文献：

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[8]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.

GB 29683-2013 食品安全国家标准 动物性食品中对乙酰氨基酚残留量的测定 高效液相色谱法[S].北京：中国标准出版社，2014.