miR-21与子宫内膜癌的相关性研究

河南科技大学第一附属医院（471003）韩振坤 王晓宏

探寻子宫内膜癌的发病机制，明确其治疗靶标，是提高子宫内膜癌治疗效果的根本途径。miRNAs的表达或功能异常可能是恶性肿瘤发生的主要诱因。miR-21是一种新发现的miRNA。既往研究表明，miR-21在胃癌、肾癌、肺癌等多种恶性肿瘤组织中呈现高表达态势，并发挥类似促癌基因的作用。但miR-21在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义尚未完全明确。本研究旨在探讨子宫内膜癌组织中miR-21表达水平变化，并分析其与子宫内膜癌临床病理特征的关系，以期为子宫内膜癌的临床诊疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 组织样本 50例子宫内膜癌组织样本由河南科技大学第一附属医院提供（2014年10月～2017年10月所收治子宫内膜癌病例）。患者年龄25～68岁，平均年龄（53.8±10.4）岁；所有样本均经病理证实为原发性子宫内膜癌，术前均未接受放化疗，且病理资料完整。同时取对应癌旁组织（距癌组织边缘≥1cm），并经病理证实为正常子宫内膜组织。

1.2 试剂与设备 RT-PCR仪（美国Bio-Rad）；逆转录试剂盒、RT-PCR试剂盒（美国Promega公司）；TRIzol试剂（美国Invitrogen公司）；miR-21、U6引物由上海生工生物工程有限公合成。

1.3 总RNA提取 取2mm3组织样本制备组织匀浆，按TRIzol试剂盒说明书提取组织中总RNA，DEPC水溶解，取1μLRNA经1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，采用Bio-Rad检测RNA纯度及浓度。

1.4 逆转录反应 严格按照说明书操作。

1.5 PCR扩增 严格按照说明书操作。

1.6 统计学方法 SPSS20.0进行数据分析，计量资料用均值±标准差（Mean±SD）表示，组间比较用t检验，P＜0.05为差异显著。

2 结果

2.1 子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织miR-21表达水平比较 RT-PCR检测结果显示，子宫内膜癌组织中miR-21表达水平显著高于正常子宫内膜组织（2.38±0.31 vs 0.65±0.11）（t=5.823，P＜0.05），见附图。

2.2 子宫内膜癌组织miR-21表达水平与临床病理特征的关系 miR-21表达水平与FIGO分期及淋巴转移有关（P＜0.05），miR-21表达水平与年龄、绝经、病理类型及分化程度无关（P＞0.05）（见附表）。

3 讨论

既往认为，子宫内膜癌的发生与长期雌激素刺激有关。但之后人们发现，并非所有类型的子宫内膜癌都是激素依赖型的。进一步明确子宫内膜癌的发病机制，对于子宫内膜临床诊疗具有积极的指导意义[1]。miRNA属于高度保守的非编码小分子单链RNA，并广泛存在于真核生物中，调控着约30%的人类基因。正常生理状态下，机体内miRNA表达遵守严格的组织、时序特异性；但在肿瘤环境下，甲基化、基因组丢失或扩增等均可导致miRNA表达异常[2]。Zhai等[3]研究显示，子宫内膜癌组织中miR-205表达显著高于正常子宫内膜组织（P＜0.05）；且miR-205表达与临床预后密切相关，miR-205表达越高者生存期越短。周飞梅等[4]研究发现，相较于正常子宫内膜组织，子宫内膜癌组织中miR-101表达显著降低，且miR-101表达水平与子宫内膜癌临床分期、分化程度及肌层浸润深度有关（P＜0.05）。上述研究提示，miRNAs参与子宫内膜癌的发生与发展。因此，深入研究miRNAs与子宫内膜癌的相关性有利于进一步明确子宫内膜癌的发病机制。

附图 子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中miR-21表达水平比较。注：与正常子宫内膜组织比较，**P＜0.05。

附表 子宫内膜癌组织miR-21表达水平与临床病理特征的关系分析（±s）

附表 子宫内膜癌组织miR-21表达水平与临床病理特征的关系分析（±s）

病理特征 例数 miR-21相对表达量 t P绝经 是 18 2.41±0.35 0.042 0.985否 32 2.36±0.47年龄 ≥40 26 2.48±0.58 0.194 0.846＜40 24 2.34±0.29病理类型子宫内膜样腺癌 35 2.55±0.63 1.782 0.092非子宫内膜样腺癌 15 2.32±0.76 FIGO分期中分化 20 2.36±0.33低分化 13 2.39±0.54淋巴结转移I～II 21 2.08±0.55 3.251 0.034 III～IV 29 2.89±0.43分化程度高分化 17 2.47±0.27 0.391 0.071是 12 2.78±0.25 3.178 0.041否 38 2.21±0.30

miR-21是公认的促癌基因，其定位于人类17q23.2染色体FRA17B脆性区域上，而17q染色体区域的扩增可诱发多种恶性肿瘤。故认为，以17q染色体区域扩增为主的表观遗传调控是导致miR-21表达上调的主要因素。转染干扰质粒simiR-21至结肠癌细胞HT-29，可沉默细胞中miR-21表达，同时抑制细胞增殖、迁移及浸润能力，并促进细胞凋亡，其机制可能与靶向程序性细胞死亡因子4（programmed cell death factor 4，PDCD4）有关。

食管癌组织中miR-21表达显著高于癌旁上皮组织（P＜0.05），利用siRNA技术抑制食管癌EC109细胞中miR-21表达可显著降低细胞侵袭和转移能力，同时显著提高细胞肌球家族蛋白1（tropomyosin 1，TPM1）表达，提示miR-21可能通过靶向TPM1表达介导食管癌细胞侵袭和转移。沉默卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞中miR-21表达，可抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路激活，减轻卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞的抗凋亡能力，并提高卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞对顺铂化疗的敏感性，提示miR-21过表达可能是导致卵巢癌顺铂耐药的主要分子机制。上述研究提示，miR-21在多种恶性肿瘤的进展过程中发挥着与促癌基因相似的作用。但其在子宫内膜癌进展中的作用尚不明确。

本研究结果显示，子宫内膜癌组织中miR-21表达水平显著高于正常子宫内膜组织（P＜0.05），该结果与相关报道一致，提示miR-21过表达可能在某种程度上促进子宫内膜癌的发生与发展。进一步分析子宫内膜癌组织中miR-21过表达与子宫内膜癌临床病理特性相关性发现，FIGO分期越高则miR-21表达越高（P＜0.05），提示miR-21过表达可能是促进子宫内膜癌进展的主要因素；盆腔淋巴转移者miR-21表达与高于无淋巴转移者（P＜0.05），提示miR-21过表达可能参与了子宫内膜癌细胞侵袭及迁移。此外，miR-21表达水平与年龄、绝经、病理类型及分化程度无关（P＞0.05），提示miR-21表达不易受个体因素或其他因素影响，其可能是子宫内膜癌早期诊断、疗效判定和预后评估的潜在指标。

综上所述，miR-21在子宫内膜癌组织中过表达，且其过表达与子宫内膜癌FIGO分期及盆腔淋巴转移密切相关。miR-21可能是子宫内膜癌的诊断标志物和治疗靶点。