水富县基地猕猴桃中吡虫啉农药残留检测

王联广

摘 要：参照NY/T761-2008标准，对猕猴桃用乙腈溶剂提取，用氨基柱净化，最终得到的提取液通过波长（270nm）、流动相（甲醇：水=7：3（V：V））、流动相流速（1.0mL/min）和柱温（40℃）为色谱条件进行检测，结果显示，吡虫啉出峰对称，峰宽狭窄，对检测吡虫啉效果好;通过添加回收实验，在0.05～0.5mg/kg水平的回收率在90%左右，RSD在10%以内，吡虫啉检出限为0.05mg/kg，符合有关国家农药最高残留量标准。在本次实验中未检测到猕猴桃中吡虫啉。

关键词：猕猴桃;农药残留;吡虫啉;高效液相色谱;检测

猕猴桃含有猕猴桃碱、蛋白水解酶、单宁果胶和糖类等有机物，以及钙、钾等多种矿物成分，和人体所需17种游离氨基酸，含有丰富的维生素C，其维生素C是苹果的100倍，被誉为 “水果之王”[1]。其农药残留吡虫啉是一种含吡啶环的烟碱类超高效杀虫剂 ，能选择性地抑制害虫神经系统中乙酰胆碱受体，昆虫接触药剂后，中枢神经正常传导受阻，造成害虫麻痹而死亡[2] ，吡虫啉的检测方法主要有生物分析法，液相色谱法、气相-质谱联酶法、液相-质谱联酶法、酶联免疫检测法和免疫层析检测法等[2]，限于条件有限，本次试验采用液相色谱法建立猕猴桃中吡虫啉的检测。

1仪器与试剂

岛津LC-20A高效液相色谱仪，配备DAD检测器和C18色谱柱，UPT-20纯水/超纯水系统（四川优普超纯科技有限公司），QC10260超声波清洗器（天津市旗美科技有限公司），RE52旋转蒸发仪（上海雅荣生化设备仪器有限公司），XHF-D匀浆机（宁波新芝生物科技有限公司）;吡虫啉标准溶液100μg/mL（农业部环境质量监督检验测试中心（天津）），乙腈（色谱纯），氨基柱（500mg/3mL），甲醇（色谱纯），红心猕猴桃（水富基地采购），其他试剂均为分析纯，水为超纯水，使用前景0.45 m滤膜过滤。

2试验方法

2.1色谱条件

流动相甲醇：水 = 70：30（V/V ），波长为选择280nm，流速设置分别为1.0mL/min，试验选择的柱温40℃[3]。

2.2标准储备液的配置

将100μg/mL吡虫啉标准溶液逐步稀释，配制成质量浓度为10.0 、5.0 、2.0、0.5、0.25、0.1、0.05、0.01μg/mL的吡虫啉标准溶液，测定其HPLC色谱图，以检测的峰面积为纵坐标，标准品溶液浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线（标准方程）。

2.3 测定方法

定性分析：在相同色谱条件下，首先检测已知吡虫啉标准溶液的出峰时间，再检测猕猴桃中吡虫啉农药残留，通过对色谱峰保留时间的比较，就可以确定猕猴桃中吡虫啉出峰时间;定量分析：分别配制不同浓度的吡虫啉标准溶液，用HPLC测其吸光值，建立标准曲线：Y=A+BX，Y代表模板分子吸光值面积;X代表吡虫啉浓度，再测定猕猴桃样品经提取的溶液后检测得到的吸光值面积，进而就得到其浓度。

2.4样品的制备

（1）制样：将样品全部切碎，放入食品粉碎机中制成匀浆，制成匀浆后的样品，放入容器中保存备用。

（2）提取：用称量匙将样品搅匀，于感量为0.1g的天平上准确称取25g试样，放入150ml烧杯中，加入50ml乙腈，在约15000转/min条件下均质2min，经滤纸过滤到装有5g-7gNacL的100mL具塞量筒中。 收集到的滤液大约40ml-50ml，盖紧盖子，剧烈震荡1min，将震荡后的具塞量筒静置30min以上，使乙腈相和水相充分分离，用移液管从具塞量筒中准确吸取10ml上层有机相溶液，于100ml的契形瓶中，设置水域温度为38℃左右旋转速率约120r/min 冷却循环系统的温度在4℃以下，真空度保持在0.09-0.1Mpa之间，旋转蒸发至溶液还剩0.5ml左右时，停止旋转，打开放气阀，取下契形瓶，用氮气吹至近干备用。

（3）净化：向蒸发近干的契形瓶中，用量筒加入2ml的淋洗液（甲醇：二氯甲烷（V：V=95：5 ）），盖上铝箔或塞子，待净化。 氨基柱预淋洗：将500mg/6ml规格的氨基柱，用4ml淋洗液预淋洗，除去填料中的杂质并将柱子溶剂化，弃去淋洗液;试样的添加：当预淋洗溶剂的液面达到柱吸附层表面时，立即倒入契形瓶中待净化的溶液，用15ml刻度离心管收集洗脱液;分析物的洗脱：待溶液的液面快要达到柱吸附层表面时，用2ml淋洗液涮洗契形瓶后，倒入氨基柱中洗脱，待洗脱液的液面快要达到柱吸附层表面时，再用2ml淋洗液涮洗契形瓶后，洗脱一次，待淋洗液达到上层筛板时，用洗耳球挤压，使柱中残留液体全部流入试管中备用。

（4）过膜：将盛有洗脱液的刻度离心管置于氮吹仪上，在50℃水域温度下，氮吹蒸发至近干用甲醇定容至5ml，在渦旋混匀器上混匀，使用0.22um的微孔滤膜过滤后，移入2ml进样瓶中，待测。

2.5样品回收率的测定

准确称取25.0g猕猴桃试样，于150ml烧杯中，分别添加标准溶液制成0.2、0.5、1.0mg/kg试样三个水平，分别做重复3次回收率试验。加标准溶液的样品同样品的处理方法与测定方法相同。

3结果与分析

3.1色谱条件优化结果

（1）检测波长的选择：吡虫啉吸收波长为选择280nm。

（2）流动相的实验：流动相分别为甲醇：水=80：20 （V/V），甲醇：水=75：25（V/V），甲醇：水=70：30（V/V），甲醇：水=65：35（V/V），经色谱出图分析流动相选择甲醇：水=70：30（V/V）。

（3）流动相流速的实验：流速分别为 0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL/min，经色谱出图分析，当流速减慢时，峰出现增宽，为在分析样品时有较高的灵敏度，选择流动相流速1.0mL/min。

（4）色谱柱温度的实验：柱温分别为 30 ℃、35℃和40℃，随着柱温逐渐升高，出峰时间逐渐缩短，从色谱图看，柱温选择40℃较好。

综合上述（1）（2）（3）（4），最终色谱条件温：波长（270nm）、流动相（甲醇：水=7：3（V：V））、流动相流速（1.0mL/min）和柱温（40℃）。

3.2标准曲线的绘制

分别进吡虫啉标准溶液0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0mg/L，得到标准曲线为Y=1039.3X+62271.1（Y代表出峰面积，X代表浓度），R为0.9993。

3.3方法的准确性和精确度

分别添加标准溶液制成0.2、0.5、1.0mg/kg试样三个水平，分别做重复3次回收率试验，结果：回收率分别90.6%、91.7%、91.1%， RSD分别为6.5%、2.3%、2.4%。

4讨论

本次试样参照NY/T761-2008，猕猴桃试样经乙腈溶剂提取，氨基柱净化，最终提取液通过波长（270nm）、流动相（甲醇：水=7：3（V：V））、流动相流速（1.0mL/min）和柱温（40℃）为色谱条件进行检测，吡虫啉出峰对称，峰宽狭窄，对检测吡虫啉效果好，通过添加回收实验，在0.05～0.5mg/kg水平的回收率在90%左右，RSD在10%以内，吡虫啉检出限在0.05mg/kg，符合有关国家农药最高残留量标准。在本次实验中未检测到猕猴桃中吡虫啉。

参考文献：

[1]薛 梅，吕丽丹，蔡向西，张 林，罗兰艳，范厚明 .毕节山区红心猕猴桃生产条件及高产栽培技术.现代农业科技，2017，（7）： 89-90.

[2]谭桂玉，陈俊玉，刘伟华，何 佳，李 燕，胡志鑫.农药吡虫啉酶联免疫检测方法研究进展.安徽农业科学，2018，46（12）：17-19.

[3]王晓静，马文平.高效液相色谱法测定柚子中4种农药残留.宁夏农林科技 ，2014，55（03）：58-61.