解肌宁嗽口服液质量标准提升研究

袁珍珍，战伟，孔祥攀，刘静

(上海医药集团青岛国风药业股份有限公司，山东 青岛 266510)

解肌宁嗽口服液是由紫苏叶、前胡、葛根、半夏(制)、桔梗、杏仁水等14味药组成的中药复方制剂，具有宣肺、化痰止咳的功效。临床上主要用于治疗小儿头痛身热、咳嗽痰盛、气促、咽喉疼痛[1]。在解肌宁嗽口服液药理研究中显示，解肌宁嗽口服液对由2,4-二硝基酚大鼠发热模型有显著的解热作用，对由蛋清所致的大鼠足肿胀有明显的抗炎作用，对氨水引起的小鼠咳嗽有显著的镇咳作用，能显著增加小鼠器官的酚红排出量，有祛痰作用，对由醋酸引起的小鼠扭体有抑制作用，长毒试验未见异常病理改变[2]。解肌宁嗽口服液组方中葛根中主要成分为异黄酮类,包括葛根素、大豆苷等[3-5]。现代药理学研究发现葛根素具有调控炎症因子表达[6]、抗骨质疏松[7]、降糖[8]、抗癌[9]等多种作用。葛根在此方中具有解肌退热、透诊、生津止渴、升阳止泻的重要作用[10-11]。

目前文献报道解肌宁嗽口服液成分复杂，对其质量标准研究的文章较少，现行质量标准中采用的方法操作步骤烦琐。本文创新性建立了解肌宁嗽口服液质量标准研究，采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中葛根的主要成分葛根素的含量，该方法操作简便，能更有效地控制制剂质量。

1 材料

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪，包括G7114A检测器、G7129A自动进样器、G7116A柱温箱。

1.2 试药 葛根素对照品(批号：110752-201615，纯度：95.4%，中国食品药品检定研究院)；解肌宁嗽口服液3批(上海医药集团青岛国风药业股份有限公司，批号：170501、170701、170702)；柠檬酸为分析纯，甲醇为色谱甲醇，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性[12]色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse plus C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动为甲醇-0.1%柠檬酸溶液(25∶75，V/V)，检测波长为250 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温为30 ℃。理论塔板数按葛根素峰计算不低于4 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取葛根素对照品适量，加溶剂甲醇-0.1%柠檬酸溶液(25∶75)制成每1 mL含葛根素0.921 mg的对照品贮备溶液。精密吸取上述对照品贮备溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇-0.1%柠檬酸溶液(25∶75)稀释至刻度，摇匀，即得浓度为18.42 μg·mL-1的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 精密量取样品2 mL至50 mL容量瓶中，加甲醇-0.1%柠檬酸溶液(25∶75)稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按处方制备不含葛根的阴性样品，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制得阴性溶液。

2.3 专属性试验[5,13]分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性样品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。结果显示供试品色谱图中葛根素与对照品色谱峰保留时间一致，其他成分对葛根素测定无干扰，详见图1。

A.对照品;B.样品;C.阴性对照品 1.葛根素图1 HPLC色谱图

2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液2、5、10、15、20 μL分别注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行分析，测定峰面积积分值，以葛根素的进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，得回归方程Y=4 469.7X+0.151 2，R2=1。结果表明，葛根素进样量在0.036 8～0.368 4 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 分别精密吸取“2.2.1”项下葛根素对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续进样5次，记录峰面积积分值，计算峰面积RSD为0.3%(n=5)，结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取按“2.2.2”项下制备的同一供试品溶液(批号：170501)，分别在0、2、4、8、12、24 h精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积积分值，计算峰面积RSD为0.2%(n=6)，结果表明供试品在24 h内稳定性良好，能够满足测定需要。

2.7 重现性试验 取稳定性考察样品(批号：170501)，按“2.2.2”项下平行制备5份供试品溶液，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积积分值，计算葛根素的平均含量为0.860 mg·mL-1，峰面积RSD为0.4%，结果表明该方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验 精密吸取1 mL已知含量为0.860 mg·mL-1的样品(批号：170501)平行样品6份，分别精密加入“2.2.1”项下对照品贮备液1 mL(每1 mL含葛根素0.921 mg)，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备成加样供试品溶液，精密吸取10 μL注入液相色谱仪，测定含量并计算回收率，结果葛根素平均回收率为 100.0%，RSD为0.8% ，表明本方法准确可靠，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.9 样品含量测定 取3批解肌宁嗽口服液稳定性考察样品(批号：170501、170701、170702)，分别按“2.2.2”项下制备供试品溶液，在上述条件下测定并计算葛根素含量，结果见表2。

研究结果表明，本方法简单、准确，适用于解肌宁嗽口服液中葛根素含量的检测。

表2 样品含量结果

3 讨论

3.1 方法建立的必要性 解肌宁嗽口服液中葛根素含量测定现执行标准为中华人民共和国原卫生部标准WS3-083-(Z-27)-95(Z)。根据现行标准，需要依次通过柱色谱法、薄层色谱法、紫外分光光度法3种试验方法的使用才能完成葛根素含量测定。样品处理过程复杂烦琐，影响结果准确性及重现性。建立对HPLC法测定葛根素含量是非常必要的。

3.2 流动相的选择 本试验过程中分别采用甲醇-水(25∶75)[14]，甲醇-0.1%磷酸(25∶75)[15]，甲醇-0.1%柠檬酸(25∶75)[16]作为流动相进行考察，结果使用前两种流动相均出现色谱峰前沿现象。最终采用甲醇-0.1%柠檬酸(25∶75)作为流动相。

3.3 溶剂的选择 何海雁等[16]研究HPLC 法同时测定小儿解表颗粒中葛根素的含量中，采用超声甲醇相关比例溶解，制备供试品。朱日然等[17]对HPLC法同时测定柴银口服液中葛根素含量的研究中，供试品的制备采用50%的甲醇溶解。有资料显示葛根素在甲醇中溶解，在乙醇中略溶，在水中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。根据溶解度程度选择甲醇、乙醇、水或混合溶剂作为备选溶剂，加不同溶剂稀释。本试验选择葛根素易溶溶剂甲醇、乙醇及相关不同比例溶剂稀释样品，结果显示30%甲醇、50%甲醇、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇外观澄清，将初步筛选的五种溶剂 量取样品2 mL 5份分别至50 mL容量瓶中，分别加入上述初步筛选的5种溶剂稀释，按照上述色谱条件，吸取10 μL进样分析，均出现色谱峰前沿现象。《中国药典》[12]显示在流动相中添加酸盐可以提高柱效，改善峰形。在流动相水相中加入0.1%磷酸[甲醇-0.1%磷酸(25∶75)]按照上述色谱条件进样分析，结果依然出现峰前沿现象。最终选择流动相甲醇-0.1%柠檬酸(25∶75)作为稀释溶剂符合要求。

4 结论

解肌宁嗽口服液是由解肌宁嗽丸改剂型而得，文献未查询到解肌宁嗽口服液质量标准研究。曲静等[18]研究解肌宁嗽丸中葛根素含量的测定，建立了解肌宁嗽口丸的质量检测标准。因剂型不同，解肌宁嗽丸检测标准不适合解肌宁嗽口服液。

本试验采用HPLC法对测定解肌宁嗽口服液中葛根素含量方法进行研究，选择甲醇∶0.1%柠檬酸(25∶75)作为流动相，选择甲醇-0.1%柠檬酸(25∶75)作为稀释溶剂，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为250 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL，重复性试验的RSD均≤2.0%；平均加样回收率为100.0%，RSD为0.8%(n=6)。此方法在测定解肌宁嗽口服液中方法简便、重复性高，高效准确，这对于解肌宁嗽口服液质量控制具有重要意义。