宝天曼香菇粗多糖的提取及体外抗氧化活性

范培培，闫静宇，古爱菊，刘冰冰，卢扬扬，付丽娜

(黄河科技学院 医学院，河南 郑州 450063)

香菇又名花菇，是药食两用的真菌。香菇多糖是香菇中主要活性成分，具有调节免疫力、降血糖、抗肿瘤、抗氧化等功能，广泛应用于食品和生物医药方面[1-2]。随着研究的深入，香菇多糖的提取技术也日益成熟。超声波辅助提取多糖的方法被广泛使用，其产生的振动可加速细胞内多糖的释放、溶解，使多糖更快的进入溶剂，显著缩短提取时间。宝天曼香菇来自伏牛山大自然的馈赠，独特的地理气候孕育了独特的香菇，研究以宝天曼香菇为原料，使用超声波辅助方法提取香菇多糖，固定料液比、超声功率、温度，考察超声时间对多糖提取率的影响，并探索其体外抗氧化活性，为香菇多糖的深度开发利用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

香菇：采购于南阳内乡宝天曼。葡萄糖(GR)：上海阿拉丁试剂网；苯酚：洛阳昊华化学试剂有限公司；浓H2SO4、冰醋酸：洛阳市化学试剂厂；无水乙醇：天津市科密欧化学试剂有限公司；以上试剂均为分析纯；三吡啶三吖嗪：购于阿拉丁试剂网；FeSO4、无水乙醇：天津市科密欧化学试剂有限公司；以上试剂均为分析纯；5%苯酚溶液：自制。

1.2 仪器

TU-1810紫外-可见分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；KQ-500DE型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；FA1004型电子天平：上海良平仪器仪表有限公司；XFB-200型粉碎机：吉首市中诚制药机械厂；3号药典筛、5号药典筛：浙江上虞市五四仪器筛具厂；SHZ-D(Ш)循环水式多用真空泵：邦西仪器科技(上海)有限公司；远红外鼓风干燥箱：天津市华北实验仪器有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 香菇的预处理

将南阳宝天曼干香菇洗净、晾干，于50℃烘箱中干燥6 h，经粉碎机粉碎得粉末，之后过3号和5号药典筛、装瓶密封保存。

1.3.2 葡萄糖标准曲线的绘制[3]

图1 葡萄糖标准曲线Fig.1 Standard curve of glucose

准确称量1.0000 g干燥至恒重的葡萄糖标准品于100 mL容量瓶，定容，得10 mg/mL葡萄糖溶液。精密移取1.0 mL葡萄糖溶液于100 mL容量瓶中，定容，摇匀，得0.1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。分别精密移取葡萄糖标准溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL于50 mL容量瓶中，加1.0 mL5%苯酚溶液、5.0 mL浓硫酸，摇匀，静置，于紫外分光光度计490 nm处测定吸光度A。以葡萄糖标准溶液浓度C(mg/mL)为横坐标x，吸光度A为纵坐标y绘制标准曲线(图1)。线性回归方程为：y=0.9107x-0.1847，R2=0.9989，由图可看出在标准溶液浓度0.2 ～1.2 mg/mL范围内，呈线性相关。

1.3.3 超声时间对香菇多糖提取率影响的测定

固定料液比为1：40、超声温度50℃、超声功率为200 W。各称取1.00 g香菇粉末于5个锥形瓶中，加40 mL蒸馏水，置数控超声波清洗器中，分别将超声时间定为10，20，30，40，50 min。超声后冷却至室温，抽滤，置于蒸发皿中浓缩，将浓缩液转移至100 mL容量瓶，定容。用移液管各移取2.0 mL于5个100 mL容量瓶中定容。之后各移取4.0 mL溶液于50 mL容量瓶中，分别加入5%苯酚溶液2.0 mL和浓硫酸10.0 mL，摇匀，静置，冷却至室温[4]。于紫外分光光度计490 nm处测定吸光度值A，代入葡萄糖标准曲线公式进而计算香菇多糖提取率。

1.3.4 香菇多糖提取率的测定

香菇多糖提取率的计算公式为：香菇多糖提取率/%=(C×V×N /m)×100%；C为由标准曲线求得的多糖质量浓度，mg/mL；N为稀释倍数；V为稀释后总体积，mL；m为香菇粉末质量，g。

1.3.5 体外抗氧化能力测定

抗氧化活性测定主要是基于“Fe3+-三吡啶三吖嗪(TPTZ)螯合物在酸性条件被还原为蓝色的螯合物Fe2+-TPTZ(593 nm处有最大吸收)”，通过检测蓝色产物的生成量而测定香菇多糖的抗氧化能力[5]。

2 结果与分析

2.1 超声时间对香菇多糖提取率的影响

固定料液比为1∶40、超声温度50℃、超声功率为200 W，测定不同超声时间对香菇多糖提取率的影响，该项目进行平行试验3次，求其平均值。

图2 超声时间对香菇中多糖得率的影响Fig.2 Effect of ultrasonic time on the extraction yield of polysaccharides from lentinan

由图2可知，随着超声时间增加，溶剂分子的扩散速度也加快，多糖的溶出增多，香菇多糖成分会逐渐扩散，在超声时间为40 min时香菇多糖的提取率最高，之后出现降低的趋势，同时也说明随着超声时间的延长，多糖结构可能会遭到破坏，杂质溶出也相应增加，导致香菇多糖的提取率下降[6]。因此，将宝天曼香菇多糖的最佳超声时间确定为40 min。

2.2 抗氧化活性试验

2.2.1 绘制FeSO4标准曲线

准确称取111.2 mg的FeSO4溶于水，加浓硫酸0.25 mL定容至50 mL，置入小铁钉。取5 mL上述溶液于50 mL容量瓶中，定容，制备0.8 mmol/LFeSO4标准溶液。预先加5 mL水于小试管，取5 mL FeSO4标准溶液加入试管，得0.4 mmol/L标准溶液，按此方法依次制备0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mmol/L的FeSO4标准溶液。依次取上述溶液0.2 mL，加1.8 mL FRAP工作液，在37℃条件下于紫外分光光度计中测定593 nm处吸光度，绘制FeSO4标准曲线。由图3显示，FeSO4的浓度与吸光度A呈线性相关，线性回归方程为：y=0.9731x+0.2314，R2=0.9993。

图3 FeSO4标准曲线Fig.3 The standard curve of FeSO4

2.2.2 抗氧化活性测定

移取香菇多糖粗提液稀释至不同浓度，加6 mLFRAP，加入600 μL超纯水，置于37℃水浴锅中放置10 min，于紫外分光光度计中测定593 nm处吸光度[7]。

图4 抗氧化活性测试曲线Fig.4 Antioxidant capacity measurement curve

将测得的吸光度A代入FeSO4标准曲线换算为FeSO4当量浓度，由图4可知，线性相关方程为y=0.1243x-0.2856，R2=0.9987，香菇多糖的抗氧化活性随质量浓度的增加呈线性增强，拟合度良好。

3 结论

研究以宝天曼香菇为原料，以香菇多糖提取率为指标，采用超声波辅助提取方法探索超声时间对多糖提取率的影响及

其体外抗氧化活性。结果显示，在固定料液比1∶50(g/mL)、超声功率300 W、提取温度50℃时，超声波辅助提取宝天曼香菇多糖的最佳超声时间为40 min，提取率高达11.92%，且香菇多糖的抗氧化能力与浓度呈线性相关，并逐渐增强。结果表明南阳宝天曼香菇味道鲜美、多糖含量高、体外抗氧化能力强，为香菇多糖的进一步开发利用提供参考。