细毡毛忍冬对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用

何云　俸婷婷　刘畅　高月　周枝　张敏　周英

摘 要：本文旨在研究细毡毛忍冬水提物和醇提物对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用及差异。通过CCl4致大鼠急性肝损伤模型，检测大鼠肝组织丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活性;檢测大鼠血清γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）、谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、谷胱甘肽（GSH）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）活性以及肝脏指数和肝组织病理学检查（H.E.染色），研究细毡毛忍冬的保肝作用。结果显示，与模型组相比，细毡毛忍冬各剂量组均可明显降低血清ALT、AST、ALP、TBIL、LDH和γ-GT的活性和减少肝组织MDA含量（ P < 0.05， P < 0.01），并升高肝组织SOD，GSH-px的活性以及大鼠血清中ALB、GSH的活性（ P < 0.05， P < 0.01），该研究表明细毡毛忍冬对CCl4致大鼠急性肝损伤具有保护作用，且醇提物优于水提物。

关键词：细毡毛忍冬;保肝;急性肝损伤;四氯化碳

中图分类号：R965.1

文献标识码：A

文章编号：1008-0457（2019）04-0024-05 国际DOI编码：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2019.04.005

Protective Effects of   Lonicera similis  Hemsl. on CCl4 -induced Acute Liver Injury in Rats

HE Yun1，FENG Ting-ting2，4，5，LIU Chang2，GAO Yue3，ZHOU Zhi3，ZHANG Min4，5 ，ZHOU Ying2，4，5*

（1.College of Pharmaceutical Sciences，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China; 2.School of Pharmacy，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550025，China; 3.College of Brewing and Food Engineering，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025，China; 4.National & Local Joint Engineering Research Center for the Exploitation and Utilization Technology of Medicine and Food Dual-use Resources in the Southwest of China，Guiyang，Guizhou 550025，China; 5.Guizhou Engineering Research Center for the Exploitation and Utilization Technology of Medicine and Food Dual-use Resources，Guiyang，Guizhou 550025，China）

Abstract：To investigate the protective effects of aqueous extracts and ethanol extracts of  Lonicera similis  Hemsl. on carbon tetrachloride induced liver injury in rats. Acute liver injury was induced by CCl4 in rats. The activities of malondialdehyde （MDA），superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GSH-px） levels in liver tissue，the activities of gamma-glutamyl transpeptidase （γ-GT），alanine transaminase （ALT），lactate dehydrogenase （LDH），glutathione transaminase （AST），albumin （ALB），glutathione（GSH）alkaline phosphoric acid （ALP），total bilirubin （TBIL） in serum，liver index and liver histopathological examination （H.E. staining） were measured in acute liver injury rats by carbon tetrachloride. Compared with the model group，the  Lonicera similis  Hemsl. aqueous extracts and ethanol extracts administration groups could significantly reduce activities of ALT，AST，ALP，TBIL，LDH and γ-GT in serum，content of MDA，and increase SOD and GSH-px activity significantly in the liver tissue （ P < 0.05 or  P < 0.01），increase ALB activity and GSH activity in rat serum（ P < 0.05 or  P < 0.01）.  These results indicate that the ethanol extract and aqueous extracts of the  Lonicera similis  Hemsl. had protective effects on liver，and effects of the ethanol extract were better than aqueous extracts.

Key words： Lonicera similis  Hemsl.; hepatoprotective; liver acute injury; carbon tetrachloride

細毡毛忍冬（ Lonicera similis  Hemsl.）是忍冬科忍冬属灰毡毛忍冬[1]（ Lonicera macranthoides  Hand.-Mazz.）的亚属植物，记载于《中国植物志》[2]，为忍冬属植物细毡毛忍冬干燥初开的花或花蕾，有清热解毒和疏风散热的功效，在《贵州省中药质量标准》、《四川省中药材标准》和《湖南省中药材标准》均有收载[3-5]，灰毡毛忍冬的药理作用研究较为透彻[6-11]，但细毡毛忍冬保肝作用研究鲜见报道。本研究通过CCl4致大鼠急性肝损伤的模型，将细毡毛忍冬水提物及70%醇提物保肝作用进行了比较研究，探究细毡毛忍冬的保肝作用差异，旨在为合理开发利用细毡毛忍冬以及临床应用奠定数据基础。

1 材料与方法

1.1 药品及试剂

超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）、还原型谷胱甘肽（GSH）试剂盒（南京建成生物工程研究所），联苯双酯（万邦德制药集团股份有限公司），75%医用酒精（贵州鑫源卫生制品有限公司），四氯化碳（富宇精细化工有限公司），其它试剂均为国产分析纯。

1.2 药材

细毡毛忍冬（ L.similis  Hemsl.）干燥花蕾采自贵州省遵义市绥阳县，经贵州中医药大学魏升华教授鉴定为正品。

1.3 动物

SD大鼠，清洁级，雄性，体重180-220 g;购自重庆腾鑫生物技术有限公司，动物生产许可证号：SCXK（渝）2017-0007。

1.4 仪器

千分之一电子天平（FA1104，上海梁平仪器仪表有限公司），恒温数显水浴锅（DK-98-Ⅱ，天津市泰斯特仪器有限公司），医用离心机（TG16G，盐城市凯特实验仪器有限公司），多功能酶标仪（3020-601，Therom Fisher Scientific），组织匀浆机（FSH-2，金坛市迅生仪器），全自动生化仪（CS-1200，迪瑞医疗科技股份有限公司）。

1.5 保肝试验方法

1.5.1 细毡毛忍冬提取物的制备

水提物的制备：分别将细毡毛忍冬按照料液比为1∶20的蒸馏水加热回流提取3次，每次1.5 h，合并3次滤液，减压浓缩至浸膏，即得细毡毛忍冬水提物（XZS）。

醇提物的制备：分别将细毡毛忍冬按照料液比为1∶20的70%乙醇加热回流提取3次，每次1.5 h，合并3次滤液，减压浓缩至浸膏，挥去残醇，即得细毡毛忍冬醇提物（XZC）。

1.5.2 分组、给药及造模

待大鼠适应环境后，将72只雄性SD种大鼠，随机分为9组，每组8只。分别建立空白组、模型组、联苯双酯组及细毡毛忍冬水提物、细毡毛忍冬醇提物的低（a）、中（b）、高剂量组（c）各给药组连续14 d按体积10 mL/kg灌胃给药;灌胃2 h后，模型组和各药物剂量组动物按2.0 mL/kg一次腹腔注射给予25% CCl4溶液，CCl4染毒，空白组给予花生油，每周染毒一次;14 d后，将各组动物隔夜禁食24 h（禁食不禁水），腹腔主动脉采血，分离血清，解剖大鼠肝脏，测定肝脏体重。

1.5.3 保肝指标检测

测定血清中ALT、AST、ALP、LDH和γ-GT的活性以及ALB、TBIL的含量;称取肝脏相同部位的肝组织，进行肝组织匀浆，3500 r/min离心10 min，取上清，按试剂盒说明检测SOD的活力、GSH-px活性及MDA含量;H.E.染色观察大鼠肝组织病理学变化，计算肝脏指数：肝脏指数=肝脏质量（g）/大鼠体重（g）×100%。

1.5.4 统计学处理

数据结果以 x ±SD表示，使用SPSS 22.0 统计软件进行统计分析，组间采用ANOVA 检验，多重比较方差齐采用Tukey方法，方差不齐采用Dunnett方法， P < 0.05 表示有统计学意义。

2  结果与分析

2.1 对大鼠肝组织的SOD、GSH-px和MDA水平和肝指数的影响

与正常组相比，模型组肝脏指数和大鼠肝组织匀浆MDA含量明显高于正常组，GSH-px活性和SOD活力明显低于正常组（ P < 0.01）;与模型组比较，细毡毛忍冬各药物组和联苯双酯组肝指数均有所下降（ P < 0.01），在MDA含量指标中，与模型组比较，细毡毛忍冬水提物和醇提物高剂量组和醇提物低剂量组均能显著性抑制肝损伤（ P < 0.05， P < 0.01）;在SOD和GSH-px活性指标中，与模型组比较，细毡毛忍冬水提物和醇提物均能显著性降低GSH-px水平（ P < 0.05， P < 0.01），见表1。

2.2 对CCl4肝损伤大鼠血清ALT、AST、ALP、LDH、γ-GT、ALB、TBIL和GSH活性的影响

与空白对照组相比，病理模型组大鼠血清ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL和LDH活性较空白对照组明显升高，GSH和ALB水平明显低于正常组（ P < 0.01），说明本次实验造模成功;与模型组比较，各药物组均能降低ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL和LDH的活性和升高GSH和ALB水平。

与模型组比较，在ALT指标中，细毡毛忍冬醇提物和水提物均能降低ALT水平（ P < 0.01， P < 0.05）;在AST指标中，细毡毛忍冬醇提物组能极其显著的降低AST水平（ P < 0.01）;在γ-GT指标中，细毡毛忍冬水提物高剂量组有显著性差异（ P < 0.05）;在ALP指标中，细毡毛忍冬醇提物中、高剂量组均能显著性降低ALP水平（ P < 0.01），在GSH指标中，细毡毛忍冬醇提物高剂量组能显著性提高GSH的水平（ P < 0.05）;在ALB指标中，细毡毛忍冬水提物低剂量和醇提物中、高剂量组有显著性差异（ P < 0.05）;在TBIL指标中，细毡毛忍冬水提物和醇提物均能显著性降低TBIL的水平（ P < 0.01， P < 0.05）;在LDH指标中，与模型组比较，除细毡毛忍冬水提物低剂量组无统计学差异外，其余各组均有显著性差异（ P < 0.01， P < 0.05），其余药物组较模型组有降低，但无统计学意义，见表2、表3。

2.3 细毡毛忍冬对CCl4肝损伤大鼠肝脏组织结构的影响

正常组大鼠的肝组织形态结构正常，肝小叶结构完整，肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列，排列整齐，分界清楚，肝细胞未见肿胀，无坏死现象，见图1-A;而模型组细胞结构紊乱，细胞核消失，肝小叶边界不清楚，细胞排列混乱，肝细胞大量坏死以及炎症细胞浸润见图1-B。

与模型组比较，各给药组大鼠肝组织病理学形态均有不同程度的改变，病理损伤减轻，细胞排列较为整齐，肝脏坏死和炎症细胞浸润均有不同程度的减轻，随细毡毛忍冬提取物剂量的升高，大鼠肝细胞坏死、变性有所减轻，见图1-D～J。

3 结论与讨论

肝损伤实验动物模型的建立主要有化学性、免疫性、药物性、酒精性和生物性等多种方法，CCl4是诱导急性肝损伤有效的化学药物，在体内对肝脏亲和力很大，是一种化学复制的肝损伤[12-15]，MDA含量可以反映脂质过氧化反应的程度，SOD通过清除体内的超氧阴离子自由基抑制脂质过氧化反应来保护肝细胞，GSH-px清除超氧离子自由基，从而能阻止自由基激活的脂质过氧化过程，间接的了解机体抗氧化的状态和能力;血清ALT、AST、ALP、ALB、TBIL、LDH、GSH和γ-GT水平是评价肝功能的重要指标以及诊断中判断肝损伤的主要依据[16-20]。

本实验发现各药物组均能降低ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL和LDH的活性和升高GSH和ALB水平;能够降低肝组织匀浆中MDA含量，提高SOD活力，增加GSH-px活性，预防肝肿大，且作用表现出一定的剂量依赖性;肝组织病理切片结果较模型组有所减轻。因此，细毡毛忍冬对CCl4致大鼠急性肝损伤具有保护作用，且醇提物优于水提物，但细毡毛忍冬的具体分子调控机制有待深入研究。

参 考 文 献：

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