实时荧光定量RT-PcR在麻疹和风疹病毒检测中的应用

周唯

[摘要]目的：探究实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测当中的应用。方法：以我地区2018年1月-2019年1月的108例疑似麻疹、风疹患者作为研究对象，采集血清标本与咽拭子标本，分别用ELISA法（酶联免疫吸附试验）检测免疫球蛋白（IgM）抗体，RT-PCR法检测核酸。结果：108例疑似麻疹、风疹患者的血液标本、咽拭子标本当中，其中血清标本中IgM抗体呈阳性的有40例，阳性率是37.0%;在108份咽拭子标本中RT-PCR呈阳性的有64例，阳性率为59.3%。两种方法检验结果有显著性差异存在，RT-PCR检测阳性率要更高于IgM阳性率（x=10.681，P<0.05）。结论：实时荧光定量RT-PCR可快速诊断麻疹、风疹病毒的病原学，对初诊初期麻疹、风疹呈IgM阴性患者还能做进一步的确诊，应用可靠且有效。

[关键词]实时荧光定量PCR;麻疹病毒;风疹病毒;酶联免疫吸附试验

[中图分类号]R440 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2019）15-0223-01

麻疹、风疹是由麻疹病毒和风疹病毒感染引起的急性呼吸道传染疾病，在实验室诊断技术上，主要是使用ELISA法（酶联免疫吸附试验）检测血清当中麻疹、风疹的特异性IgM抗体，但该方法存在一定的漏检缺陷。所以，本次实验我们采用对比分析的方法，采用实时荧光定量PT-PCR技术检测麻醉、风疹病毒，汇报其应用价值。

1临床资料和方法

1.1临床资料：以我地区2018年1月～2019年1月的108例疑似麻疹、風疹患者作为研究对象，其中男性70例、女性38例，年龄均值是10.7±0.6岁。患者皆有发热、皮疹等感染症状表现。

1.2方法

1.2.1ELISA法检测血清IgM抗体：①血清标本的处理：采用无菌注射器抽取患者的静脉血，并在4℃的条件下以每分钟2000转的速度做离心处理，10分钟后，提取血清;②ELISA法检测：严格依据麻疹、风疹病毒IgM抗体检测试剂盒说明书进行操作，完成后以空白调零，经酶标仪读出450nm处吸光度值，依据于此判断最终的检测结果。

1.2.2RT-PCR检测核酸：①采集咽拭子：取无菌棉签，蘸取患者咽部的分泌物，过程当中避免碰触到口腔黏膜、舌头和唾液，将3～5ml的病毒标本保存液加入其中，并于接近顶端处将棉签折断，在试剂盒当中提取RNA，以用后续的扩增;②RT-PCR法检测：规范依据麻疹、风疹病毒RNA检测试剂盒的说明书进行各项操作，在完成反应体系配置后，在PCR仪做扩增。

1.3数据统计学处理：所有计数数据皆以例（n）、率（%）的模式阐述，并采用卡方（x）检验方法。统计学软件使用SPSS19.0，P<0.05认定为差异存在显著性。

2结果

在本次实验研究当中共收集的108例疑似麻疹、风疹患者的血液标本、咽拭子标本当中，其中血清标本中IgM抗体呈阳性的有40例，阳性率是37.0%;在108份咽拭子标本中RT-PCR呈阳性的有64例，阳性率为59.3%。两种方法检验结果有显著性差异存在，RT-PCR检测阳性率要更高于IgM阳性率（x=10.681，P<0.05）。

3讨论

临床对麻疹、风疹病毒样本通常是通过血液或者是鼻咽分泌物进行采集的，以往已有临床实验结果提示，在麻疹、风疹前驱期或者是患者机体已经有皮疹表现的第一天，患者血液或者是呼吸道分泌物当中便能够分理出麻疹、风疹病毒了。此次实验研究当中，我们对108例疑似麻疹、风疹患者，对其采集静脉血或者是咽拭子，分别经ELISA法检测其血清样本当中的IgM抗体，经实时荧光RT-PCR法检测咽拭子样本当中麻疹、风疹病毒核酸，所得实验数据结果提示：108例疑似麻疹、风疹患者的血液标本、咽拭子标本当中，其中血清标本中IgM抗体呈阳性的有40例，阳性率是37.0%;在108份咽拭子标本中RT-PCR呈阳性的有64例，阳性率为59.3%。两种方法检验结果有显著性差异存在，RT-PCR检测阳性率要更高于Ie3V～阳性率（x=10.681，P<0.05）。经RT-PCR检测为阳性结果的64例患者当中，有26例患者麻疹、风疹病毒IgM抗体检测结果提示为阴性，对其原因分析来看，麻疹、风疹IgM抗体在病发的早期仅有较少的产生甚至是不产生，同时抗体产生伴随有个体的差异性。可见若是患者正处于发病的早期，借助血清样本检测风疹、麻疹IgM抗体予以确诊的方法并不确切可靠，会有漏检的可能性。如果临床还是通过麻疹、风疹IgM抗体来做最终的确诊的话，就需要在患者初诊之后4～28天再做麻疹、风疹IgM抗体检测，而这也就决定了抗体检测需要跨越一段较长的时间，由此提示ELISA法对麻疹、风疹的确诊有一定局限性存在，具体表现在早期检测结果并不理想上，同时又具有耗时长的缺点，因抽血是创伤性操作，所以不排除患者对此很是排斥。

而采用RT-PCR的方法检测麻疹、风疹病毒核酸简便且易行，检测的特异性、灵敏度均要比ELISA检测方法佳。RT-PCR法将其用于麻疹、风疹病毒核酸的早期快速诊断，若患者为阳性，那么就无需再检测IgM抗体便能够予以确诊，而且对于那些患者血清IgM抗体呈阴性的，则还可以经RT-PCR检测予以漏检的弥补。

总结全文来看，实时荧光定量RT-PCR可快速诊断麻疹、风疹病毒的病原学，对初诊初期麻疹、风疹呈IgM阴性患者还能做进一步的确诊，应用可靠且有效。