王老吉、香薷散对热应激大鼠HSP70、皮质醇和抗氧化功能的影响

李桦 屈倩 刘翠 郭世宁 石达友

摘要：Wistar雄性大鼠80只，随机分成4组，每组20只，分为王老吉组、香薷散组、热应激阳性对照组（简称热应激组）和适温组，分别给2中药试验组大鼠按7 mg/kg·BW灌服中药复方煎液，试验期7d。在热应激后3h、1d、3d、7d时检测血清热休克蛋白（ HSP70）及皮质醇（Cor）水平和抗氧化功能。结果显示，王老吉和香薷散煎液均能抑制大鼠热应激下血清HSP70和Cor水平升高，并提高机体抗氧化功能，降低丙二醛（MDA）的生成。

关键词：王老吉;香薷散;试验动物;热应激

中图分类号：R285

文献标识码：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.17.001

0引言

在熱应激影响下动物机体会产生一系列的损伤，王老吉能改善应激下小鼠免疫机能，提高抗氧化能力;研究还证实香薷中的挥发油类、黄酮类、香豆素类等多种活性成分具有抗病原微生物、消炎、增强免疫等药理作用。试验主要观察王老吉和香薷散分别用于急性热应激的试验动物大鼠，并通过测定血清皮质醇及HSP70浓度、抗氧化指标和小肠段病理切片，观察王老吉和香薷散对热应激大鼠相关功能的影响，为中药防治热应激应用研究工作提供理论基础。

1 材料与方法

1.1试验动物

7周龄的雄性无特异性病原体级（ SPF） Wistar大鼠（ 180±10）g，购自南医科大学试验动物中心，质量合格证号：440021000005777），按照SPF级试验动物常规饲养。

1.2药品与制备

王老吉由仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草、甘草7味组成，先将中药泡20 min，头煎15 min，二煎10 min，将2次煎煮中药混合，最终减压浓缩为1.08 g/mL生药。香薷散由香薷、黄芩、黄连、甘草等组成，其中香薷加8倍量水泡0.5 h，提取挥发油5h，收集挥发油备用，蒸馏后的水溶液另器收集。药渣与其余9味药材加10倍量水煎煮3次，每次2h，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至含量为1.12 g/mL生药，冷却后，搅拌下加入吐温-80与香薷挥发油的混合液（挥发油：吐温-80=1：2），加入0.3%山梨酸钾，滤过，即得。

1.3试验分组与处理

80只成年Wistar雄性大鼠，随机分成4组，每组20只，试验1、2和3组是热应激组，用室内加热器将温度保持在35 ～38℃，湿度为50% ～ 70%，试验4组是适温组，温度20 ～26 ℃环境下饲养。试验1组在热应激下，每天按7mg/kg·BW灌服王老吉，试验2组灌服与试验1组等浓度的香薷散，试验3组和4组分别热应激下和适温下灌胃等量生理盐水，自由饮水、采食，试验期7d。

1.4样品采集与保存

在热应激第3h、1d、3d和7d时，每组随机取5只大鼠，1%戊巴比妥钠按50 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血4 mL，于- 20℃冰箱保存用于血清皮质醇及HSP70浓度和抗氧化指标的测定。

1.5数据处理

试验结果采用“平均数±标准误”（

±S.E）表示，用SPSS 17.0统计软件one-way ANOVA分析各组间的差异显著性，通过Duncan's新复极差检验法进行各组间的多重比较。

2结果与分析

2.1 大鼠血清皮质醇Cor浓度影响

试验3 h，香薷散组血清Cor浓度显著高于适温组（P<0.05）;在热应激1d，王老吉组血清Cor浓度分别显著和极显著低于香薷散组（P<0.05）和热应激组（P<0.01），香薷散组血清Cor浓度与热应激组相比极显著降低（P<0.01），且极显著高于适温组（P<0.01）;试验在热应激3d，各试验组间血清Cor浓度无显著差异（P>0.05）;热应激试验7d，王老吉组血清Cor浓度极显著低于热应激组（P<0.01）和香薷散组（P<0.01），香薷散组和热应激组血清Cor浓度与适温组相比均极显著升高（P<0.01）。表明热应激导致大鼠血清Cor增加，在饮水中添加王老吉和香薷散中药复方煎液均能抑制血清Cor的增加，且中药复方中王老吉效果优于香薷散。见表1。

2.2大鼠血清HSP70浓度影响

试验在热应激3h，香薷散组血清HSP70含量显著低于热应激组（P< 0.05），热应激组血清HSP70含量显著高于适温组（P< 0.05）;热应激ld和3d，各试验组血清HSP70含量无显著差异（P>0.05），但均比热应激3 h各试验组血清HSP70含量升高;试验到热应激7d，王老吉组血清HSP70含量显著低于香薷散组（P<0.05），且香薷散组血清HSP70含量与适温组相比极显著升高（P<0.01）。见表2。

2.3 大鼠血清抗氧化指标影响

王老吉组T-AOC含量极显著高于热应激组（P<0.01），适温组、香薷散组与热应激组比较差异不显著（P>0.05）;适温组和王老吉组SOD显著高于热应激组（P<0.05），香薷散组SOD活性显著高于热应激组（P<0.01）;MDA含量在各组间差异均不显著（P>0.05），热应激组MDA含量均比其余3个试验组MDA含量高。表明在热应激下，大鼠血清抗氧化功能减弱，口服中药复方王老吉和香薷散煎液对热应激下机体的抗氧化能力有恢复作用。见表3。

3讨论

3.1 大鼠血清皮质醇Cor浓度影响

高温季节会导致肾上腺皮质和髓质机能亢进，血浆中糖皮质激素水平极大提高而使动物机体分解代谢加强，以抵御外界高温对机体造成的压力。试验中热应激组血清皮质醇浓度普遍高于适温组与2中药组，中药煎液王老吉和香薷散的添加应用均可以降低热应激大鼠血清皮质醇浓度，进而增强机体抗热应激能力。王老吉凉茶依据传统配方，采用菊花、甘草、仙草、金银花、夏枯草等7种上等草本材料配制而成，现代科学研究表明，王老吉凉茶内含植物黄酮类等天然成分，具有清热解毒，预防上火，提高人体免疫力之功效。运用清热祛湿化瘀的方法能减轻糖皮质激素不良反应，中药复方煎液中的某些活性物质通过降低热应激条件下升高的血浆皮质醇含量至正常水平，进而增强机体免疫功能和抗应激能力，这与牛国庆等人的结果报道一致。

3.2大鼠血清HSP70浓度影响

在热耐受能力形成方面，热休克蛋白家族群（ HSPs）是可使细胞非特异性抗损伤能力增强的保护性蛋白状况下HSPs的合成量增加，其中以HSP-70研究最为丰富。具有发表祛暑、利湿行水的香薷为常用中药，多用于暑湿感冒、恶寒发热、腹痛、无汗、吐泻等症。研究表明香薷散对啤酒酵母菌致热大鼠的退热作用，连续3次给药，能延长其退热时间，对发热过程的体温反应指数有明显的影响。在治疗小儿暑热外感时，在点滴中加入香薷饮，与对照组相比，香薷饮对小儿外感暑热有显著治疗效果，并且可减少退烧时间。从增加体内HSP-70的合成，抵御热应激的损伤。

3.3大鼠血清抗氧化指标影响

T-AOC是机体抗氧化能力的整体表现。SOD能清除动物机体在新陈代谢中产生的有害物质，反映动物机体清除自由基的能力。MDA是动物体内，自由基作用于脂质发生过氧化反应的氧化最终产物，它的高低反映动物机体受自由基攻击的损伤程度。在热应激下，大鼠血清抗氧化功能减弱，口服中藥复方王老吉和香薷散煎液对热应激下机体的抗氧化能力有恢复作用。香薷散中香薷能够发汗解暑，化湿、利水，黄芩能够清热泻火，燥湿解毒，二者含有的黄酮类具有清除能够清除自由基，抑制脂质被过氧化，黄连含有黄连苷，具有能抑制细胞内抗氧化酶活性抑制自由基，降低活性氧，阻断自由基损伤，进而发挥抗氧化损伤作用。王老吉中仙草提取物中含有大量的酚类化合物，具有较强的抗氧化、清除活性氧、保护细胞氧化损伤。鸡蛋花、金银花、布渣叶具有明显的解热效果。

4结论

热应激大鼠饮水中添加王老吉和香薷散中药复方煎液均能抑制Cor的增加，且中药复方中王老吉效果优于香薷散。热应激导致大鼠血清HSP70含量升高，抗氧化功能减弱，王老吉煎液能降低血清HSP70含量。试验以试验动物为对象，对王老吉和香薷散抗热应激的药效学进行研究，为王老吉和香薷散在畜禽养殖生产上抗热应激方面提供理论依据。

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作者简介：李桦（1990-），女，广东省佛山人，硕士，兽医师，

专业：临床兽医学。

通信作者：石达友（1977-），华南农业大学，邮箱：shidayou@scau.edu.cn。