流行性感冒病毒检测方法的研究进展

吕涵颖

摘要：流行性感冒近年来在全球范围内持续频繁爆发，2009年和2013年，都分别爆发了全球性的甲型流感和H7N9禽流感，对于动物、人类生存以及社会的发展，均造成了十分严重的影响。基于此，本文首先对流行性感冒病毒基因发展的趋势进行了探究，提出了各种不同类型流行性感冒病毒基因发展趋势；其次，提出了流行性感冒病毒的主要检测手段，通过此种方式，探究出流行性感冒病毒检测方法的发展历程和研究进展。

关键词：流行性感冒；病毒检测；检测方法；分子生物学

引言：随着国内科学技术水平的提升，医疗技术也得到了飞速发展。但是在此过程中，流行性感冒病毒也变得越发复杂。流行性感冒病毒简称流感病毒，是一种能够造成动物和人类患流行性感冒的病毒类型，主要分为甲型、乙型4和丙型三种不同的类型。在临床上对患者是否感染流行性感冒病毒进行及时地诊断和治疗，具有十分重要的意义。如何对流行性感冒病毒进行科学检测，也成为了相关工作人员的工作重点之一。

1 流行性感冒病毒基因发展趋势

1.1甲型H1N1流感病毒发展趋势

1918年，西班牙地区爆发了大规模流感，流行性感冒病毒从欧洲开始，迅速传播到了美洲、亚洲和澳洲等国家和地区。根据调查统计显示，总计超过两千万人死于此次大规模流感，死亡人数占了当时世界人口总数的30%。此后，实验证明，此次流行性感冒病毒的基因类型为H1N1，主要在鸟类、猪和人类之间传播。2009年6月，WHO和美国CDC宣布新一轮的流行性感冒病毒爆发大流行，共计造成全球范围内1万8千人死亡。截止到2010年6月，全世界范围内已经有超过300例H1N1毒株病例报告显示，该病毒对奥司他韦耐药。根据实验研究证明，此次病毒为甲型H1N1基因型病毒。此次流感病毒与上世纪出的流感病毒相比，进一步与欧亚猪流感病毒相互结合，形成了一种新型四联重配体流感病毒[1]。

1.2甲型H2N2流感病毒發展趋势

1956年中国贵州爆发流行性感冒，之后从我国开始传入到香港、新加坡和美国等地，造成了全球性的流行性感冒病毒大流行。虽然在此种流行性感冒病毒爆发一年之后，就已经研究出了针对性的疫苗，但是该疾病大规模流行，仍旧造成全球超过一百万的人员死亡。除了1956年亚洲流感大爆发之外，部分学者还提出，1889年的俄罗斯流感也是因为甲型H2N2流感病毒所引起的。

1.3甲型H3N2流感病毒发展趋势

1968年，香港最先爆发了甲型H3N2病毒所引起的流行性感冒，随后造成了全世界范围内的流感大流行。此次流行性感冒共造成了全球一百万人死亡，甲型H3N2病毒是由甲型H2N2病毒抗原性转变而来。根据相关领域的调查和统计显示，进入到21世纪之后，甲型H3N2所造成的季节性流感占据了大多数。

2 流行性感冒病毒主要检测手段

在对流行性感冒病毒进行检测的过程中，可以根据实际情况，合理地应用不同的方法，具体的方法种类如下：

2.1病毒分离培养检测方法

虽然流行性感冒病毒的检测方法与手段，都在持续不断地发展和创新，但是流行性感冒病毒培养方法，仍旧是一种有效性较高的检测手段。此种方法的应用，主要是通过对流行性感冒病毒的易感性神经氨酸酶抑制剂进行检测，借助病毒分离培养的手段，还可以进行抗病毒疫苗的生产。传统的病毒分离培养方法，操作方法较为复杂，并且花费的时间更长。经过了长时间的研究分析，快速病毒分离培养方法，已经逐步超过传统方法，以更加简便并且省时的优势，成为了业内发展的首选方法。根据研究显示，快速病毒培养方法的检测率可以达到98.6%。

2.2血清学检测方法

血清检验方法同样具有操作简单且耗时较短的优势和特点。此种方法目前已经成为了流行性感冒病毒检测工作中，最为常见的一种方法。血清学检测方法主要是根据抗原抗体反应原理，通过对核蛋白、血凝素、膜蛋白以及神经氨酸酶蛋白等进行检验，可以提高检测的有效性。比如，在病毒中和试验中，可以通过抑制病毒进入到细胞以及阻断病毒复制抗体的方法，进行检验。此种方法具有较高的特异度与敏感度。琼脂凝胶扩散试验，主要可以用于对甲型流感病毒的HA进行检验和鉴别，根据抗体在含有流感病毒结合的红细胞琼脂胶上扩散，可以形成抗原抗体的沉淀线，以此对流行性感冒病毒感染产生的血清抗体进行检验[2]。

2.3基因芯片技术检测方法

基因芯片技术检测方法，主要是在同一时间，将大量的探针固定到支持物上方，同时对大量的序列和样品进行检验与分析，进而解决传统核酸印迹杂交技术存在的自动化水平较低、操作复杂、序列数量较少一级检测效率较低等方面的问题。此种技术的合理化应用，可以对基因表达的突变检测、图谱鉴定、基因组文库、多态性分析和杂交测序等进行检测。该项技术的合理应用，可以为流行性感冒病毒的检验工作，提供更为科学和精准的检验结果和分析数据。但是，该项技术在实际的应用中，也会面临着成本过高、操作条件要求较高以及后期结果分析复杂等方面的问题，因此不适合一般实验室进行操作。

2.4金标快速检测方法

除了上述几种方法以外，还可以使用金标快速检测方法进行检验。与其他方法不同，此种方法可以通过直接检测的方式，采集到的样本进行检验，并对流感病毒的A型和B型进行区分。根据临床使用情况可以看出，此种方法在对流行性感冒病毒进行检验的过程中，全程耗时约为20min，并且具有较高的特异性。但是，此种方法的敏感度相对较低，仅适合对群体性的流行性感冒病毒爆发进行判断与排除。在这一方法的基础上，联合使用实时荧光定量PCR检测方法，可以对流感病毒中的病毒核酸进行检测。该方法具有重复性好、直观和特异性强的优势特征，能够通过动态检测的方式，获取动态检测结果，并且不需要经过后续的加工和处理，有效地防止了出现增产物污染问题。以PCR检测方法为基础发展的依赖核算序列扩增方法，也被广泛地应用与流感病毒检测工作中。该项技术能够通过核苷酸序列等温扩增，完成酶促反应，只需要4h至6h就可以完成基本的检测。

3 结论

综上所述，流行性感冒作为一种遍布全世界的传染性疾病，在近几年的发病率显著提升。作为一种易传播、易变异的疾病类型，流行性感冒需要被建立快速、准确且有效的流感病毒检测方法。通过本文的研究可以得出，病毒分子培养检测方法、血清学检测方法、基因芯片技术检测方法和金标快速检测方法，均具有不同的优势和特征，针对实际情况选取合理的方法，可以提高检测工作有效性。

参考文献：

[1]罗鹏，杨永耀，吕沁风.流行性感冒病毒监测及检测技术的研究进展[J].现代生物医学进展，2014，14（33）：6597- 6600.

[2]苏文哲，柯昌文.流行性感冒病毒的耐药性相关研究进展[J].中国病毒病杂志，2011，1（03）：171-176.