胸腔积液细胞蜡块免疫组化检测对胸腔积液的价值分析

姜洪翠

[摘要] 目的 分析胸腔积液细胞蜡块免疫组化检测对胸腔积液的价值。 方法 方便选取2018年2月—2019年2月该院诊断的96例胸腔积液病患，进行随机分组，46例病患进行单纯细胞涂片HE染色作为参照组，50例病患进行细胞蜡块免疫组化检测作为探究组，观察并对比诊断结果。 结果 不同方式诊断后对比两组诊断准确率，探究组98.00%显著高于参照组86.96%（χ2=4.32，P<0.05）;对比两组检测结果的阳性率，探究组阳性率100.00%显著高于参照组78.26%（χ2=10.45，P<0.05）;96例胸腔积液病患中，48例诊断为查见腺癌细胞，48例为查见反应性增生间皮细胞。从抗体表达来看，发现腺癌细胞的特异性抗体有CK7、CEA和TTF-1，反应性增生间皮细胞的特异性抗体有 WT-1、Calretinin和CK5/6（P<0.05）。结论 细胞蜡块免疫组化检测对胸腔积液的诊断准确率高，值得临床推广。

[关键词] 胸腔积液;细胞蜡块免疫组化检测;胸腔积液

[中图分类号] R561          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2019）06（b）-0023-03

[Abstract] Objective To analyze the value of immunohistochemical detection of pleural effusion cells in pleural effusion. Methods A total of 96 patients with pleural effusion diagnosed in our hospital from February 20 to February 2019 were convenient enrolled in a randomized group. 46 patients underwent HE staining with a single cell smear as a reference group， and 50 patients underwent cell waxing block immunohistochemistry was used as an exploration group to observe and compare the diagnosis results. Results After diagnosis， the diagnostic accuracy of the two groups was compared. 98.00% of the exploration group was significantly higher than the reference group by 86.96% （χ2=4.32， P<0.05）. The positive rate of the two groups was 100.00%， higher than the reference group of 78.26% （χ2=10.45， P<0.05）; of the 96 patients with pleural effusion， 48 were diagnosed as adenocarcinoma cells， and 48 were found to be reactive hyperplastic mesothelial cells. From the expression of antibodies， specific antibodies against adenocarcinoma cells were found to be CK7， CEA and TTF-1， and specific antibodies to reactive proliferative mesothelial cells were WT-1， Calretinin and CK5/6 （P<0.05）. Conclusion The immunohistochemical detection of cell wax block has a high diagnostic accuracy for pleural effusion， which is worthy of clinical promotion.

[Key words] Pleural effusion; Immunohistochemistry detection of cell wax block; Pleural effusion

胸腔积液是临床常见的一种症候，主要特征为胸膜腔内病理性液体积聚，临床表现为胸闷、呼吸困难、气短、心悸等[1]。任何原因导致的胸膜腔内液体超出正常值，都属于胸腔积液，该研究方便选取2018年2月—2019年2月该院诊断的96例胸腔积液病患作为研究对象，分析细胞蜡块免疫组化检测的诊断价值，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

方便选取该院诊断的96例胸腔积液待查病患，纳入标准[2]：①所有病患均符合胸腔积液的诊断标准;②年龄超过25岁;③该研究已经伦理学委员会批准，患者均知情同意。排除心肝肾障碍及认知障碍病患。随机分为50例探究组和46例参照组。两组病患的年龄、性别等基本资料，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

1.2  方法

所有病患先进行标本采集，选择清晨取50 mL新鮮的胸腔积液，将取好的新鲜血液放入4个试管中，进行离心处理，控制在2 500 r/min转速，离心15 min，吸出上层清液，保留沉渣[3]。

1.2.1  参照组  参照组46例病患进行单纯细胞涂片HE染色，直接用棉签对沉渣中的水分进行吸取，然后进行细胞涂片。将剩下的沉渣加入浓度为90%的乙醇中，进行固定处理，将固定好的湿片放在通风柜中晾干，然后进行常规HE染色[4]。

1.2.2  探究组  探究组50例病患进行细胞蜡块免疫组化检测：①细胞蜡块制取：第1次离心后的沉渣，再加入浓度为1%的融化琼脂，进行第2次离心处理;然后吸走上层清液，用滤纸包好沉渣进行脱水;最后用石蜡进行包埋制成细胞蜡块，然后连续切片，切片的厚度控制在3 μm[5]。②免疫组化检测：按照染色流程，选择SP法（Maxvision快捷免疫组织化学），选择Maxvision试剂盒和二氨基联苯胺显色试剂，严格按照说明书进行检测操作[6]。观察特异性抗体CK7、CEA、WT-1、Calretinin、CK5/6和TTF-1的表达，对比分析腺癌细胞和反应性增生间皮细胞的诊断准确率。

1.3  观察指标

①同方式诊断后对比两组诊断准确率（良性率、恶性率和不确定率）;②对比两组检测结果的阳性例数、阳性率、阴性例数、阴性率;③腺癌细胞和反应性增生间皮细胞对特异性抗体CK7、CEA、WT-1、Calretinin、CK5/6和TTF-1的表达。

1.4  评价标准

①诊断结果评价[7]：细胞有弥散且形态温和，无不典型性为良性（即反应性增生间皮细胞）;细胞出现成团且形态与核有不典型性为恶性（即腺癌）：细胞有弥散且成团，但细胞核出现轻中度不典型性为不确定。②阳性诊断标准：CK7、CEA、CK5/6出现黄色细胞质染色，WT-1和TTF-1的细胞核出现棕黄色染色，Calretinin的细胞质和核都出现着色。

1.5  统计方法

该文所得实验数据均采用SPSS 23.0统计学软件进行检验，组间计量资料用（x±s）表示，采用t检验;计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  诊断结果对比分析

不同方式诊断后对比两组诊断准确率，探究组98.00%（49/50）显著高于參照组86.96%（40/46），差异有统计学意义（χ2=4.32，P<0.05），见表2。

2.2  检测结果阳性率对比分析

对比两组检测结果的阳性率，探究组阳性率100.00%显著高于参照组78.26%，差异有统计学意义（χ2=10.45，P<0.05），见表3。

2.3  不同癌细胞的抗体表达对比分析

96例胸腔积液病患中，48例诊断为腺癌细胞，48例为反应性增生间皮细胞。从抗体表达来看，发现腺癌细胞的特异性抗体有CK7、CEA和TTF-1，反应性增生间皮细胞的特异性抗体有 WT-1、Calretinin和CK5/6，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。

3  讨论

胸部肿瘤的并发症之一是胸腔积液，引发胸腔积液的因素很多，主要由炎症和肺腺癌引起，有效的诊断方式是治疗胸腔积液的前提[8]。胸腔积液最为常见的是恶性肿瘤，包括转移性癌（以肺癌、肠癌和乳腺癌最为常见）、淋巴瘤、恶性间皮瘤等[9]。临床常规的诊断方式为细胞涂片检测，通过离心可以收集细胞少、假阴性的情况，但这种检测方式因容易出现细胞成团、成堆、角质化和内黏液不明显等情况[10]。另外，细胞成分复杂，腺癌细胞核增生间皮细胞的细胞形态较为相似，进行细胞涂片检测，不容易鉴别。此外，由于癌细胞分布较为分散，进行细胞涂片HE染色的阳性率很低，导致检测结果不准确[11]。随着医学的发展和诊断技术的进步，细胞蜡块技术成为了胸腔积液诊断的有效方式，该技术的主要原理是通过离心操作，将细胞进行浓缩，最后变为沉淀物，再进行固定、脱水、包埋、切片和染色处理，诊断的准确率高。细胞蜡块具有连续切片、保存时间长的点，可以通过反复观察，从而提高浆膜腔积液的诊断准确率。

该研究选取2018年2月—2019年2月该院诊断的96例胸腔积液病患，对比单纯细胞涂片HE染色与细胞蜡块免疫组化检测的诊断结果。通过研究发现，两组诊断准确率比较，探究组98.00%显著高于参照组86.96%，表明单纯细胞涂片HE染色的准确率偏低，细胞蜡块免疫组化检测的诊断效果显著。与李清苗[1]的研究结果基本一致，他的研究结果显示，确诊的39例恶性类型，经细胞块免疫组化验的诊断出38例，误诊1例，诊断符合率97.44%。细胞涂片在显微镜下，腺癌细胞呈现三维立体的团状图形，有乳头状的排列顺序，染色质有增粗，核质比有增大，有核分裂的情况。细胞蜡块免疫组化检测是经过一系列的探索，才发现的一种有效的检测方式，其通过两次离心胸腔积液，从而收集较多的癌细胞，并制成细胞蜡块，使得细胞的结构清晰可见，而且细胞的排列方式和结构都保存良好，更有利于提高诊断的准确性。细胞蜡块免疫组化检测呈现腺管样，细胞异性显著，核质比也大，染色质增粗，核膜清晰可见，增厚明显，有核分裂情况。

通过研究发现，对比两组检测结果的阳性率，探究组阳性率100.00%显著高于参照组78.26%，表明细胞蜡块免疫组化检测可以有效判断细胞性质，提高诊断准确率，降低误诊率。另外，细胞蜡块的制作过程简单，而且细胞蜡块还有方便保存和便于检测的特点，可以积极推广到基层医院。

通过研究发现，96例胸腔积液病患中，48例诊断为查见腺癌细胞，48例为查见反应性增生间皮细胞。从抗体表达来看，发现腺癌细胞的特异性抗体有CK7、CEA和TTF-1。表明腺癌细胞与反应性增生间皮细胞的表达存在差异性，而反应性增生间皮细胞的特异性抗体有 WT-1、Calretinin和CK5/6且特异性很强，将两种抗体进行联合应用，可以有效鉴别疾病。免疫组化运用的原理是免疫学抗原-抗体特异性结合，利用化学反应，促使标记抗体的显色剂进行显色，从而确定机体内抗原的分布，再对其进行细胞定位和定性，从而提高诊断的准确率。CK7、CEA和TTF-1都是腺癌细胞的特异性抗体，其中CK7属于相对分子质量细胞角蛋白，可以应用到上皮和尿路上皮细胞中进行标记;CEA属于胚胎性癌抗原，作为诊断上皮性肿瘤的标记，一般位置在胎儿消化道上皮组织、肝脏和胰腺等地方;TTF-1是作为诊断转移性腺癌细胞的标记，属于核转录蛋白NKx2，对肺腺癌的灵敏度和特异度都较高。WT-1、Calretinin和CK5/6是反应性增生间皮细胞的特异性抗体，其中，WT-1属于抑癌基因，是鉴别间皮瘤的有效手段;Calretinin属于钙结合蛋白，相对分子质量为2.9×104，神经系统是其主要存在位置，研究发现，在间皮细胞中，Calretinin的阳性率高达80%，是诊断反应性增生间皮细胞的有效标志物;CK5/6是以一种基底细胞角蛋白，在正常组织中，鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞、间皮细胞阳性、腺上皮细胞阴性，适合用于反应性增生间皮瘤的诊断。

综上所述，细胞蜡块免疫组化检测被广泛应用于临床的诊断中，对胸腔积液的诊断准确率高，检测效果好，可以有效鉴别出腺癌细胞与反应性增生间皮细胞，值得临床推广。

[参考文献]

[1]  李清苗.胸腔积液细胞蜡块免疫组化检测对胸腔积液的价值分析[J/OL].中国医学工程，2019（1）：107-110.

[2]  余燕琪.胸腔积液病理诊断中应用细胞蜡块切片免疫组化染色检测的价值[J].医疗装备，2017，30（24）：68-69.

[3]  唐忠庆，郑赓唐.分析胸腔积液细胞蜡块免疫组化检测的病理诊断价值[J].中国农村卫生，2016（12）：3.

[4]  桂红武.细胞蜡块免疫组化检测在胸腔积液细胞蜡块病理检测中的应用探讨[J].世界最新医学信息文摘，2017，17（28）：66，71.

[5]  谢刚，原庆会，柯琦，等.免疫组化在老年胸腔积液细胞蜡块病理诊断中的应用[J].四川医学，2015（7）：935-937.

[6]  李中祥.细胞蜡块切片免疫组化染色在胸腔积液病理诊断中的应用价值[J].河南医学研究，2015（4）：88-89.

[7]  林静，李美琼，农林琳.胸腔积液细胞蜡块联合免疫组化在肺腺癌与间皮细胞增生鉴别诊断中的应用[J].现代医药卫生，2016（3）：338-339.

[8]  黄其文，姜汉国.胸腔积液细胞蜡块切片免疫组化染色技术鉴别诊断肺腺癌的临床研究[J].臨床肺科杂志，2017，22（2）：227-229.

[9]  蒙秋萍，薛逢贵，罗志飞，等.胸腔积液细胞蜡块技术在分子病理检测上的应用价值[J].世界最新医学信息文摘， 2017（45）：228-229.

[10]  黄晓萍.肺腺癌恶性胸腔积液细胞蜡块的诊断价值及表皮生长因子受体表达的临床意义[J].中国基层医药，2018， 25（16）：2049.

[11]  钱红，钟鹏，赵娟霞，等.多种细胞学方法联合检查不明原因渗出性胸腔积液的诊断价值[J].中国实验诊断学，2018， 22（3）：11-12.

（收稿日期：2019-03-12）