血红蛋白电泳、MCV在地中海贫血筛查中的应用

张丽 孙两争 杨明玉

【摘要】 目的：探討分析血红蛋白电泳、MCV在地中海贫血筛查中的应用。方法：选取2017年1月-2018年9月在本妇幼保健院进行婚检、产检的疑似地中海贫血的319例患者为研究对象，所有患者均行血红蛋白（Hb）电泳、MCV检测、基因检测，其中以基因检测结果为地贫筛查诊断的金标准;对比分析Hb电泳、MCV检测、Hb电泳+MCV联合检测的结果、敏感度（Se）、特异度（Sp）、准确度（Ac）、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）。结果：319例患者，经基因检测阳性180例，阴性139例;经MCV检测阳性243例，阴性76例;经Hb电泳检测阳性136例，阴性183例;MCV+Hb电泳联合检测，阳性177例，阴性142例。MCV检测、Hb电泳检测、MCV+Hb电泳联合检测三种地贫检测结果（Se、Sp、Ac、PPV、NPV）比较，差异均有统计学意义（P<0.05），且MCV+Hb电泳联合检测的Se、Sp、Ac、PPV、NPV均显著高于MCV检测和Hb电泳检测，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：MCV检测、Hb电泳检测对婚检、产检人群地中海贫血筛查均具有一定的临床指导意义，MCV+Hb电泳联合检测地贫较单一检测敏感度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值更高，检测效果更佳，对临床诊断治疗更具指导性意义。

【关键词】 血红蛋白电泳; 地中海贫血; 基因检测; 阳性预测值

【Abstract】 Objective：To investigate and analyze the application of hemoglobin electrophoresis and mean corpuscular volume（MCV）in screening of thalassemia.Method：319 patients suspected to be thalassemia while accepting pre-marital medical check-up or antenatal care at this maternal and child care service centre from January 2017 to September 2018 were selected as this study objects，all patients underwent hemoglobin electrophoresis，mean corpuscular volume（MCV）and genetic testing separately，in which，the results of genetic testing was deemed as the gold standard for thalassemia screening;the testing results，the sensitivity（Se），specificity（Sp），accuracy（Ac），positive predictive value（PPV）and negative predictive value（NPV）for single MCV detection，Hb electrophoresis，MCV+Hb electrophoresis combined detection detection were compared.Result：Among 319 patients，180 patients was positive for thalassemia and 139 patients was negative upon genetic testing，243 positive and 76 negative patients upon MVC，136 positive and 183 negative upon hemoglobin electrophoresis，as well as 177 positive and 142 negative after combined detection.There were significant differences in the detection results（Se，Sp，Ac，PPV，NPV）of MCV，hemoglobin electrophoresis and combined detection（P<0.05），and the Se，Sp，Ac，PPV，NPV for MCV+Hb electrophoresis combined detection were higher than MCV and Hb electrophoresis，the differences were statistically significant（P<0.05）.Conclusion：MCV and Hb electrophoresis  plays a guidance role in screening of thalassemia for pre-marital medical check-up or antenatal care in clinical，the combined detect of MCV+Hb electrophoresis combined detection has higher sensitivity，specificity，accuracy，PPV and NPV compared to single detection，which has better detection effect and is instructive for diagnosis and treatment.

【Key words】 Hb electrophoresis; Thalassemia; Mean corpuscular volume; Positive predictive value

First-authors address：Maternal and Child Health Hospital of Pingshan District in Shenzhen，Shenzhen 518122，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.17.036

地中海贫血（Thalassemia）又称珠蛋白生成障碍性贫血，是常见的遗传病之一[1]，因基因缺陷导致血红蛋白中一种或多种珠蛋白链合成缺陷或减少产生的贫血或病理状态，然而基因缺陷复杂多样，致使缺乏的珠蛋白链类型、数量及临床症状变异性非常大[2]，该种以血红蛋白产生异常为特征的遗传性常染色体隐性血液病在世界范围内主要分布在地中海、中东、印度次大陆和东南亚地区，在我国南方地区较为普遍，主要见于广东、广西、福建、云南、贵州和四川等地[3-7]。随着社会不断地发展、环境的改变，血红蛋白病发病率呈升高趋势，该类疾病防治机制尚未健全[8]，为降低地中海贫血儿出生率，在正常体检、婚检、产检地中海贫血筛查显得尤为重要，临床上应用非常普遍的筛查方法有平均红细胞体积（MCV）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）电泳等[9-10]，且检测结果皆可以作为临床上筛查地贫的标准，但是因筛查过程受多种因素干扰导致诊断准确率欠佳，为充分发挥筛查结果的准确性和有效性，本研究将探讨MCV、血红蛋白电泳及两者联合检测的应用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月-2018年9月在本妇幼保健院院进行婚检、产检的疑似地中海贫血的319例患者为研究对象，其中男168例，女151例，年龄24～37岁，平均（26.85±4.36）岁。纳入标准：在本院接受婚前检查或产检发现红细胞脆性<60%或RDW≤16。排除标准：患有抑郁症、存在沟通障碍、其他恶性疾病（白血病、恶性肿瘤等）。本研究已获得本院伦理委员会许可，且所有患者均就参与本研究签署书面知情同意书，并愿意配合研究的完成。

1.2 研究方法 所有患者均行血红蛋白（Hb）电泳、MCV检测、基因检测，其中以基因检测结果为地贫筛查诊断的金标准[11];对比分析Hb电泳、MCV检测、MCV+Hb电泳联合检测结果、敏感度（Se）、特异度（Sp）、准确度（Ac）、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）;其中两种检测方法均出现阳性检测结果计为联合检测阳性。所有检测操作前采取患者空腹状态下静脉血2～4 mL，使用一次性真空采血管（EDTA-K2）收集所采血液并按规定编号，均匀摇晃后置标本于5 000 r/min，离心半径13.5 cm，抗凝离心5 min，去血浆以10倍0.9%氯化钠水溶液洗涤红细胞三次，尽量将红细胞上多余生理盐水去除，取10 μL红细胞置于装有130 μL溶血素的試管内摇匀，置室温下培育10 min备用。

1.2.1 MCV检测 去EDTA-K2抗凝静脉血2 mL，采用COULTER?LH750全自动血细胞分析仪，严格按照仪器操作说明检测血液平均红细胞体积（MCV），结果以成年人MCV≤80 fL为截断值，80 fL

1.2.2 Hb电泳检测 使用Helena血红蛋白电泳仪、扫描仪、分析系统以及电泳仪厂家配套血红蛋白测定试剂盒;打开电脑及电泳仪开关，检查试剂及做相应准备工作，按顺序每孔加入10 μL备用样本，将载样盘插入仪器相应位置，其他步骤（如胶片、海绵条放置时间、位置等严格按照操作说明执行）;在电脑上按照电泳分析软件操作步骤进行电泳分析并读取结果。参考值：成年人血红蛋白A（HbA）在97%～98%、血红蛋白A2（HbA2）在2.5%～3.5%为正常，若HbA2低于2.5%则提示可能α地中海贫血阳性，若HbA2高于3.5%则提示可能β地中海贫血阳性[13]。

1.2.3 基因检测 取患者外周血液2～4 mL，通过DNA提取试剂盒[天根生化科技（北京）有限公司]提取DNA，采用PCR技术进行基因突变位点检测，其他步骤严格按照说明书要求和操作规程操作。

1.3 统计学处理 采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MCV检测、Hb电泳检测、MCV+Hb电泳联合检测及基因检测结果 319例患者：经基因检测，阳性180例（男89例，女91例），阴性139例（男79例，女60例）;经MCV检测，阳性243例，阴性76例;经Hb电泳检测，阳性136例，阴性183例;MCV+Hb电泳联合检测，阳性177例，阴性142例。见表1。

2.2 MCV检测、Hb电泳检测、MCV+Hb电泳联合检测地贫结果 MCV检测、Hb电泳检测、MCV+Hb电泳联合检测三种地贫检测结果（Se、Sp、Ac、PPV、NPV）比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;MCV+Hb电泳联合检测的Se、Sp、Ac、PPV、NPV均显著高于MCV检测和Hb电泳检测，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

地中海贫血最早发现于地中海沿岸的希腊、意大利等沿岸城市，并因此而得名[14]，据资料显示地中海贫血已经威胁着229个国家约71%的人群（包括新生儿）[15]。随着旨在为全球受地中海贫血威胁的国家和人群提供有关该病预防及管理策略的国际地中海贫血联盟（Thalassemia International Federation）的成立以及科学技术的进步，我国为在多地区逐渐形成较为完善的地贫筛查机制仍在不断努力，但是受不同地域限制、不同级别医院诊断技术条件以及诸多外部因素（如经济条件）的影响，地贫筛查主要以初步诊断（MCV、血红蛋白电泳、MCH等）为主。基因诊断虽是地贫诊断的金标准（可通过DGGE、SSCP、DNA序列测定等检测技术对未知地贫基因进行直接、准确地筛查）[11，16-18]，其检测条件、技术、经验以及检测费用相对较高，对有条件的地区或人群相对首选适用。故而对于大多数婚检、产检的人群而言，为预防地贫患儿的出生探索更为有效适用的筛查方法尤为重要。

本研究对比分析平均红细胞体积（MCV）、血红蛋白电泳以及联合检测结果，发现对于检测特异度而言，与血红蛋白电泳、MCV+血红蛋白电泳联合检测相比，单一MCV检测特异度（64.75%）最低，这是因为对于地贫患者而言多表现出MCV降低趋势，但是缺铁性贫血或小细胞低色素贫血中亦会出现MCV偏低的情况，因而MCV对于地贫筛查而言特异性相对受限[19-20];血红蛋白电泳是一种借助血红蛋白具有不同等电点进而有效分离并鉴定血红蛋白成分的技术，筛查地贫时可在一定程度上有效提示α地中海贫血或β地中海贫血，是地贫筛查的主要且常用手段，但是对于轻度地贫无明显的特異性症状，通过血红蛋白电泳筛查可能会出现假阳性或假阴性，故而需要更精确的筛查诊断方法（条件许可时通过基因检测直接确诊）。本研究结果发现MCV+血红蛋白电泳联合检测较单一检测方法大大提高了敏感度、特异度、准确度、PPV和NPV。

本研究缺陷在于未能探讨MCV检测、红细胞（RBC）脆性试验、血红蛋白电泳、两两联合以及三者联合筛查地贫结果，因此将来应做进一步研究，以为临床地贫筛查提供更有价值的参考。

总之，MCV检测、血红蛋白电泳检测对婚检、产检人群地中海贫血筛查均具有一定的临床指导意义，与单一方法检测相比，MCV+血红蛋白联合检测地贫具有更高的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值，检测效果更佳，对临床诊断治疗更具指导性意义。

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（收稿日期：2019-03-20） （本文编辑：张爽）