华蟾素胶囊联合化疗治疗转移性乳腺癌的效果及对免疫功能的影响

曾世彬 徐焱尧 李鹰飞

【摘要】 目的：觀察华蟾素胶囊联合TX方案化疗治疗转移性乳腺癌的效果和对免疫功能的影响。

方法：回顾性分析2015年6月-2018年9月本院收治的106例乳腺癌患者的临床资料，根据治疗方法不同分为对照组52例和观察组54例。对照组采用多西他赛联合卡培他滨片治疗，观察组在对照组基础上联合华蟾素胶囊治疗。两组患者化疗4个疗程后行影像学检查评价疗效，并在治疗前后抽取两组患者外周血检测细胞因子水平及免疫功能变化。结果：治疗后，观察组DCR、ORR均显著高于对照组（P<0.05）。观察组治疗后血清IL-2水平明显高于治疗前，IL-6水平显著低于治疗前;对照组治疗后血清IL-2水平明显低于治疗前，IL-6水平显著高于治疗前（P<0.05）。观察组治疗后血清IL-2明显高于对照组，而IL-6水平显著低于对照组（P<0.05）。与治疗前比较，观察组治疗后CD3+、CD4+、NK细胞水平均明显升高，而CD8+细胞水平显著下降，CD4+/CD8+比值显著升高（P<0.05）。对照组治疗后CD3+、CD4+、NK细胞水平和CD4+/CD8+比值均显著低于观察组，而CD8+水平显著高于观察组（P<0.05）。治疗后，观察组DCR亚组CD4+、NK细胞水平均明显高于对照组的DCR亚组，CD8+细胞水平明显低于对照组的DCR亚组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：华蟾素胶囊联合TX方案化疗可有效提高转移性乳腺癌患者的临床效果，增强免疫功能。

【关键词】 华蟾素胶囊; 转移性乳腺癌; 免疫功能

【Abstract】 Objective：To observe the efficacy of Cinobufotalin Capsules combined with TX regimen in the treatment of metastatic breast cancer（MBC）and its effects on immune function.Method：Clinical data of 106 breast cancer patients admitted to our hospital from June 2015 to September 2018 were retrospectively analyzed，according to different treatment methods，the patients were divided into control group（n=52）and observation group（n=54）.The control group was treated with Docetaxel combined with Capecitabine Tablets，and the observation group was treated with Cinobufotalin Capsules on the basis of control group.Imaging examination was performed after 4 courses of chemotherapy in the two groups to evaluate the efficacy，and peripheral blood samples of the two groups were taken before and after treatment to detect cytokine levels and immune function changes.Result：After treatment，DCR and ORR in the observation group were significantly higher than those in the control group（P<0.05）.After treatment，the level of serum IL-2 in the observation group was significantly higher than that before treatment，and the level of IL-6 was significantly lower than that before treatment;after treatment，the level of serum IL-2 in the control group was significantly lower than that before treatment，and the level of IL-6 was significantly higher than that before treatment（P<0.05）.After treatment，the level of serum IL-2 in the observation group was significantly higher than that in the control group，while the level of IL-6 in the observation group was significantly lower than that in the control group（P<0.05）.Compared with before treatment，the levels of CD3+，CD4+，NK cells in the observation group increased significantly after treatment，while the levels of CD8+ decreased significantly，and the ratio of CD4+/CD8+ increased significantly（P<0.05）.After treatment，the levels of CD3+，CD4+，NK cells and the ratio of CD4+/CD8+ in the control group were significantly lower than those in the observation group，while the level of CD8+ was significantly higher than that in the observation group（P<0.05）.After treatment，the levels of CD4+ and NK cells in the DCR subgroup of the observation group were significantly higher than those in the DCR subgroup of control group，and the level of CD8+ cell was significantly lower than that in the DCR subgroup of control group，with statistically significant differences（P<0.05）.

Conclusion：Cinobufotalin Capsules combined with TX regimen chemotherapy can effectively improve the clinical efficacy and enhance immune function of patients with MBC.

【Key words】 Cinobufotalin Capsules; Metastatic breast cancer; Immune function

First-authors address：The First Peoples Hospital of Fuzhou，Fuzhou 344000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.17.001

乳腺癌是威胁中国妇女健康最常见的恶性肿瘤之一[1]，根据中国恶性肿瘤发病和死亡分析，乳腺癌位居女性恶性肿瘤发病率首位，死亡率位居第5位，且发病率逐年升高[2-3]。尽管乳腺癌治疗方案不断规范化及多学科综合治疗，但是5年内仍有20%～60%乳腺癌患者发生转移，大部分转移性乳腺癌（metastatic breast cancer，MBC）患者难以治愈，平均生存时间为2～3年[4]。近年来研究表明，华蟾素的药理作用是通过抑制肿瘤细胞的生长、诱导其凋亡、增强机体免疫功能等多方面发挥其抗肿瘤作用[5]。华蟾素与化疗药物联合应用在非小细胞肺癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤治疗中可以提高效果，减轻毒副反应[6-8]，但在乳腺癌的临床应用文献报道较少。本研究采用华蟾素联合化疗治疗转移性乳腺癌患者，观察联合用药疗效，并探索其抗肿瘤机制。现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2015年6月-2018年

9月本院收治的106例乳腺癌患者的臨床资料，

（1）纳入标准：①经组织病理学及影像学检查确诊转移性乳腺癌（Ⅳ期）[9];②具有CT/MRI可测量可评估的靶病灶;③所有患者ECOG PS评分≤2分，预计生存时间>3个月;④心、肝、肾等重要脏器功能无明显异常;⑤依从性好。（2）排除标准：

①对试验相关药物过敏或有用药禁忌证;②转移至脑或中枢神经系统且未得到控制者;③妊娠期及哺乳期妇女;④精神异常及有乙醇或其他药物滥用者;

⑤近期内服用过免疫调节剂等对研究指标有影响的药物。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 治疗方法 对照组采用TX方案化疗：多西他赛注射液（生产厂家：齐鲁制药有限公司，批准文号：国药准字H20041128，规格：2 mL∶40 mg）联合卡培他滨片（生产厂家：齐鲁制药有限公司，批准文号：国药准字H20133361，规格：500 mg×12片）治疗，具体用法：多西他赛75 mg/m2静脉滴注，d1，卡培他滨片1 000 mg/m2，口服d1～14，早、晚餐后30 min口服，21 d为1个疗程;观察组在对照组化疗基础上，同时予华蟾素胶囊（生产厂家：陕西东泰制药有限公司，批准文号：国药准字Z20050846，规格：250 mg×20粒）口服，500 mg/次，3次/d，持续口服3个月。两组患者均化疗4个疗程。

1.3 观察指标 （1）IL-2、IL-6检测：在治疗前和完成4个疗程化疗后分别抽取两组患者清晨空腹外周静脉血5 mL，应用离心机（美国Beckman公司），3 000 r/min，离心10 min，收集离心管上层的血清，-20 ℃保存待检。应用酶联免疫吸附法（ELISA）进行检测，试剂盒均由武汉博士德生物技术开发公司提供，严格按试剂说明书方法进行测定。（2）免疫细胞检测。治疗前和完成4个疗程化疗后分别采集患者外周静脉血2 mL加入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中，加入20 μL鼠抗人CD3、CD4、CD8、NK直标荧光抗体，混匀，闭光条件下孵育30～40 min，4 ℃、3 000 r/min，离心10 min，冲洗、过滤后加入PBS缓冲液400 μL，采用流式细胞仪（美国 BD公司）进行检测。

1.4 疗效评价标准 两组均化疗4个疗程后影像学检查评估疗效，根据实体瘤评价标准RECIST 1.1评价疗效。（1）完全缓解（complete response，CR）：所有目标病灶消失，任何病理性淋巴结（无论是否为目标病灶）短轴值必须<10 mm;（2）部分缓解（partial response，PR）：以临界直径的总和为参照，所有目标病灶直径的总和至少减小30%;（3）疾病稳定（stable disease，SD）：以目标病灶半径的总和最小值为参照，既达不到缓减标准，也达不到恶化标准者;（4）疾病进展（progress disease，PD）：以目标病灶直径总和最小值为参照（包括最小值等于临界值），所有目标病灶直径总和至少增加20%[10]。另外，直径总和增加的绝对值必须>5 mm（出现新的病灶也可认为是恶化）。客观缓解率（overall response rate，ORR）=（CR+PR）/总例数×100%，疾病控制率（disease control rate，DCR）=（CR+PR+SD）/总例数×100%。

1.5 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 对照组52例，观察组

54例，均为女性，病理类型：浸润性导管癌89例，浸润性小叶癌10例、髓样癌4例，腺样囊性癌

2例，黏液癌1例。两组患者的年龄、PS评分、月经状态、ER/PR状态、三阴型、既往化疗情况比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

2.2 两组患者近期疗效比较 治疗后，观察组DCR为75.93%，显著高于对照组的55.77%，差异有统计学意义（字2=4.799，P=0.028）;观察组ORR为62.96%，显著高于对照组的40.38%，差异有统计学意义（字2=5.409，P=0.020）。见表2。

2.3 两组患者治疗前后外周血细胞因子比较 治疗前，两组血清IL-2、IL-6水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。治疗后，观察组血清IL-2水平明显高于治疗前，IL-6水平显著低于治疗前，差异均有统计学意义（P<0.05）。对照组治疗后血清中IL-2水平明显低于治疗前，差异有统计学意义（P<0.05）;对照组治疗后的IL-6水平与治疗前比较，差异无统计学意义（P>0.05）。观察组患者治疗后血清IL-2水平明显高于对照组，差异有统计学意义（t=-4.744，P=0.003），而IL-6水平显著低于对照组，差异有统计学意义（t=3.941，P=0.008）。

2.4 两组患者治疗前后免疫功能指标比较 治疗前，两组免疫功能指标比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。与治疗前相比，对照组患者治疗后的CD3+、CD4+、NK细胞水平和CD4+/CD8+比值均明显降低，而CD8+水平显著升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。与治疗前相比，观察组患者CD3+、CD4+、NK细胞水平和CD4+/CD8+比值均明显升高，而CD8+水平显著下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗后，对照组患者CD3+、CD4+、NK细胞水平和CD4+/CD8+比值均低于观察组，而CD8+水平明显高于观察组，差异均有统计学意义（t=-2.649、-6.147、-5.878、-3.647、5.003，P=0.013、0.000、0.000、0.009、0.002）。见表4。

2.5 兩组患者治疗后免疫功能与疗效相关性分析 两组患者治疗后按疗效进行亚组分析，分为DCR亚组及PD亚组，对照组亚组间的CD4+、CD8+、NK细胞水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;在观察组中，DCR亚组CD4+细胞水平明显高于PD亚组，而CD8+细胞水平明显低于PD亚组，差异均有统计学意义（P<0.05），两亚组的NK细胞水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。观察组中DCR亚组CD4+、NK细胞水平均明显高于对照组的DCR亚组（t=-9.568、-2.404，P=0.000、0.027）;观察组DCR亚组的CD8+细胞水平明显低于对照组DCR亚组，差异有统计学意义（t=23.760，P=0.000）。见表5。

3 讨论

化疗具有免疫抑制效应，对肿瘤特异性免疫反应会造成严重的影响[11]。蒽环类及紫杉类药物是治疗转移性乳腺癌的首选药物[12]，但可诱导心脏毒性的发生及骨髓功能的损伤[13]。近年来肿瘤学家研究提出“诱导缓解-强化治疗-免疫重建-巩固治疗-免疫恢复”的多阶段治疗模式，是希望在最大限度杀灭肿瘤细胞之后能恢复患者免疫功能，使机体免疫细胞能杀灭残留的肿瘤细胞，从而达到治愈肿瘤的作用，因此通过优化治疗策略，以重建与恢复免疫功能，是近年来肿瘤研究领域焦点之一和有待攻克的研究课题。

祖国医学在调动机体的抗病能力，增强免疫力，减轻副作用方面，有着独特的长处。华蟾素主要成分蟾蜍毒素、蟾蜍色胺具有一定抗肿瘤作用。有研究表明，在肿瘤综合治疗中，华蟾素联合化疗可以增效减毒，协同提高患者的生活质量，延长生存期[6-8，14]。

本研究结果显示，采用华蟾素联合TX方案治疗转移性乳腺癌，较单纯化疗显著提高了临床获益，其DCR及ORR明显升高，亦证实华蟾素具有抗肿瘤作用。

抗肿瘤免疫治疗策略是逆转肿瘤逃避免疫检测和排斥反应的耐受状态[15]，其中细胞免疫是机体抗肿瘤的主要免疫机制，主要是通过T淋巴细胞、NK细胞、巨噬细胞等体内的免疫活性细胞完成的。其中NK细胞毒性无MHC限制，不依赖抗体即可杀伤肿瘤细胞，可抑制乳腺癌肿瘤干细胞的转移扩散[16]，是机体防御肿瘤的天然屏障。T淋巴细胞不仅是细胞

免疫的效应细胞，而且还是重要的免疫调节细胞，CD4+细胞与CD8+细胞作为机体内细胞免疫和体液免疫的重要调节者存在着一定的平衡关系，是维持免疫内环境稳定的重要因素[17]。IL-2可以促进T淋巴细胞的增殖反应，增强T、B淋巴细胞的免疫应答、NK细胞功能及单核细胞的吞噬作用。IL-6可以调节机体的免疫反应，促进肿瘤的生长，与肿瘤的发生发展具有密切关系[18]。高水平的IL-6与乳腺癌患者肿瘤负荷，体力状况相关，是预后不良的生物标志物[19]。本研究对照组采用TX方案4周期化疗后，IL-2明显降低，IL-6明显升高，对照组患者CD3+、CD4+、NK细胞水平均明显降低，而CD8+水平显著升高，CD4+/CD8+比值明显下降，提示T细胞免疫功能受损;但在观察组采用华蟾素联合化疗后，IL-2明显升高，IL-6明显降低，CD3+、CD4+、NK细胞水平均明显升高，而CD8+细胞显著下降，CD4+/CD8+明显升高，提示华蟾素通过升高IL-2水平增强免疫功能，降低IL-6水平，使受损的免疫功能得到恢复与增强，与既往文献[7，20]研究相似。

对两组患者DCR亚组分析显示，观察组DCR亚组CD4+、NK细胞水平均明显升高，CD8+细胞水平明显降低，提示观察组应用华蟾素治疗增强了机体免疫杀伤力。

综上所述，华蟾素联合TX化疗能够有效提高转移性乳腺癌患者的临床疗效，调节T淋巴细胞，NK细胞水平，增强免疫功能。但是本研究样本量较小，缺乏对患者远期疗效的随访观察，因此还有待于临床试验进一步深入研究。

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（收稿日期：2019-02-18） （本文编辑：张爽）