基蛋生物肌酸激酶同工酶项目性能验证

吴允凤，刘玉兰，刘 展，孙艳艳

（首都医科大学附属教学医院北京市石景山医院检验科，北京100041）

POCT（point of care test），又称即时检验，是检验医学发展的新领域，它的快速发展得益于当今高新技术的发展和综合应用，也顺应了目前高效、快节奏的工作方式，满足了医师和患者在时间上的需求，可使患者尽早得到诊断和治疗［1］。CK-MB是目前临床应用较多的POCT项目之一，尤其在急诊科和重症病房的应用非常有意义［2］。我院新进基蛋生物Getein1600荧光免疫定量分析仪一台，我们实验室参考EP9-A2、EP15-A、EP6-A对正确度、精密度、线性范围进行性能验证。

材料和方法

1 仪器与试剂

待验证仪器为基蛋生物Getein1600荧光免疫定量分析仪，及其配套CK-MB试剂。参比仪器为雅培I2000全自动免疫分析仪及其配套试剂。雅培ARCHITECT i2000化学发光分析仪性能良好，可以为临床提供准确、可靠的实验数据，被广大临床医生所认可。

2 验证方法

2.1 正确度试验 参考EP9-A2用患者样本进行比对，每天选择8个临床患者样本（样本在具有临床意义范围即线性范围内均匀分布）进行测定。本实验共化5 d时间，对40个不同的临床患者样本，用本科已有的雅培I2000作为参比仪器和Getein 1600全自动免疫层析分析仪分别进行检测和数据处理。

2.2 精密度验证 依据EP15-A及样品浓度参考值范围，选择本院3个标本，并对上述3个浓度的样品每天分析1次，每个浓度重复检测3次，连续检测5 d，记录结果。

2.2 线性验证 依据EP6-A将高浓度和低浓度血清质控品按比例4H＋0L、3H＋1L、2H＋2L、1H＋3L和0H＋4L配制成5个浓度的测试样品，在2 h内对每个浓度样品检测4次，计算平均值，并与理论值进行回归分析。

3 统计学处理

利用SPSS17.0软件、MedCalc 11.4.2.0对所有数据进行统计学处理。

结 果

1 正确度验证

以雅培I2000检测结果作为X轴，以Getein 1600全自动免疫层析分析仪检测结果作为Y轴，结果分析如图1所示，两组数据线性回归曲线为Y＝0.9112X＋0.6655，r＝0.9936＞0.975；根据图2所示，Bland-Altman分析结果显示，在一致性界限的上限为1.20，下限为0.85，仅2.5%（1／40）的数据落在95%界限以外；也就是说基蛋生物Getein 1600 CKMB项目测值是雅培I2000测值的0.85～1.20倍；如表1所示，在医学决定水平处预期相对偏倚为0.22ng／mL，预期相对偏倚为4.40%；从临床上考虑，这种差异可以满足本院的临床需求，因此这两种方法具有较好的一致性。

图1 两种方法测定CK-MB结果散点图

图2 两种方法测定CK-MB结果Bland-Altman图

表1 在医学决定水平处预期相对偏倚

2 精密度验证

如表2所示，低浓度水平样本（4.58 ng／mL）所测得总不精密度为8.75%；中浓度水平样本（10.47 ng／mL）所测得总不精密度为9.29%；高浓度水平样本（14.99ng／mL）所测得总不精密度为6.45%。试剂盒说明书声明CK-MB批内不精密度≤10%，总不精密度≤15%。精密度验证结果符合试剂盒说明书要求。

表2 不精密度检测结果（CK-MB）

3 线性验证

CK-MB项目线性范围参考品理论值与测试平均值回归系数R2＝0.9901，回归方程为Y＝1.0405X＋0.8205，如图3所示。说明书声明的分析测量线性范围是2.5～80 ng／mL，试验数据表明，该检测系统在3.06～72.51ng／mL浓度区间呈线性，该分析测量范围通过验证。

图3 CK-MB检测结果的线性范围

讨 论

随着国民经济水平的提高，社会的进步，人们健康理念的转变，国家医疗体制的改革，临床医疗及急救医学发展的需要，促进了POCT技术的发展。POCT是一类极具潜力的检测技术，它快速简便、效率高、成本低，有检验周期短、标本用量少等优点。同时，其试剂稳定且便于保存和携带，已经被广泛用于临床，甚至自我检测［3］。急性心肌梗死（AMI）属于急性冠状动脉综合征的类型之一，一旦确诊，治疗的时间越早，预后效果越佳，患者存活率越高［4］。心肌酶谱是用于诊断AMI的最早标志物，连续的酶学检查可方便了解梗死面积的大小及溶栓的治疗效果。CK-MB升高快，清除快，相关文献报道，CK-MB在未行PCI治疗时峰值出现在12～24 h。所以快速准确的用POCT检测CK-MB，能为AMI的早期诊断提供简便、快捷、准确的检测方法，为早期溶栓、急诊PCI等有效心肌再灌注治疗，改善冠状动脉供血，提高患者生活质量，降低死亡率，改善预后提供重要的前提条件［5-6］。

正确度、精密度、线性范围是性能验证中最为常用的指标。我们参考了EP9-A2文件做正确度验证，但未完全按照其做法。我们选取了40个样本分5 d做完，且样本浓度涵盖线性范围，但只是做了单次测定未进行重复测试。本实验室雅培全自动荧光免疫分析仪检测系统采用原装配套试剂，同时操作人员经过系统培训，整个系统一直参加全国卫生部临床检验中心的室间质评活动，质评结果均优秀，是一可靠检测系统，以此作为参照系统对基蛋生物Getein1600荧光免疫定量分析仪检测系统作对比检测。分析验证方法的数据与参比试验方法数据，二者在统计学意义上无差异，证明其正确度验证良好。总不精密度是完整地权衡了批内、批间及天间种种误差因素，较为真实地反映了分析仪总的精密度，并且为了更好地检出不稳定的误差。已明确提出检测系统的批内不精密度应为美国的临床实验室室间质量评估CLIA’88允许误差的1／4，天间标准差应为该允许误差的1／3，达到这样要求的检测系统，可认为它的随机误差属于可接受的水平［7］。本次检测CLIA’88推荐CK-MB允许误差为30%，CK-MB的1／4允许误差为7.5%，CK-MB的1／3允许误差为10%。实验结果显示采用基蛋生物Getein1600荧光免疫定量分析仪检测CK-MB的低、中浓度水平样品总不精密度结果均小于1／3 CLIA’88允许误差，在可接受范围内。而厂家说明书声称的批内和总精密度范围分别为10%和15%，则均在可接受范围内。

目前临床上所用检测CK-MB的POCT仪器品牌多样，苏荣等［7］验证过美国Biosite Biagnostics公司生产的Triage Metet荧光免疫干式快速定量诊断仪检测CK-MB的正确性、精密度良好，符合实验室要求。黄静沁等［8］实验得出CK-MB采用POCT法与电化学发光法有很强的相关性结果。目前POCT的管理缺乏统一的标准，只对血糖项目做出了规范化标准的专家共识［9］。对其他POCT项目仪器的准入和性能验证，迫切需要有关部门做出统一的规范化标准，以供实验室参考执行。我们所验证的基蛋生物的这款仪器是国产仪器，经验证其正确度良好、批内精密度稍稍超过国际规定范围，总精密度良好，线性范围良好，均符合厂家说明书声称标准。