尿微量白蛋白检测试剂盒性能评价

胡 芳，尚小玲，冯 琴，戴海英，汪宏良

［鄂东医疗集团黄石市中心医院（湖北理工学院附属医院）医学检验科，湖北 黄石435000］

尿微量白蛋白（microalbuminuria，mALB）是一种带负电的小分子蛋白，分子量为69kD。正常状态下很难通过肾小球基底膜，只有少量的白蛋白可以通过［1］。当肾小球出现损伤时，尿中mALB水平会升高。mALB是肾脏早期损害的一个非常敏感的指标，对高血压糖尿病等肾病具有重要的临床参考价值，在诊断早期或轻微肾脏损害方面具有重要的提示作用。本文旨在评价北京九强生物的尿微量白蛋白（mALB）免疫比浊法试剂盒各性能能否满足临床需求。

材料和方法

1 仪器与试剂

罗氏Cobas8000全自动生化分析仪，北京九强mALB试剂盒以及配套校准品和质控品，罗氏mALB检测试剂盒（169398-01）及其配套校准、质控品。

2 检测方法

按照仪器及试剂盒说明书，用配套校准品对北京九强及罗氏试剂盒进行定标，检测各自质控品，使结果处于靶值允许偏差范围内，以备进行后续实验。

3 评价方案

3.1 精密度 参考NCCLSEP5-A2文件［2］，同一天内连续测量高、低质控品20次，分别计算均值、标准偏差（SD）和变异系数（CV）。准备高、低质控品各1份，在同一天上下午将两水平质控品各测两次，连续测定20 d，分别计算其均值、SD和CV。对所有数据进行统计学分析，评价日间不精密度。参考厂家说明书标准，判断标准＜10%。

3.2 准确度 选取90例患者清晨洁净中段尿样本，在罗氏Cobas8000全自动生化分析仪上使用北京九强及罗氏mALB试剂盒检测，统计数据做相关图，计算线性回归方程。

3.3 线性范围 参考NCCLS EP6-A文件要求［3］，取高浓度样本（接近线性最高点400 mg/L）、低浓度样本各一份，按照10/10，9/10……1/10，1/20，1/40，1/80稀释，重复测定3次，计算每点均值作为Y轴，以理论值为X轴，做散点图并进行直线回归分析。

3.4 最大稀释倍数 取线性最高点附近400 mg/L样本1例，用纯化水稀释2倍、5倍、10倍、20倍、40倍、80倍以及纯化水。理论值与实测值进行相对偏倚计算。

3.5 前带性能 称取固体纯品配制成高值样本，作为前带实验最高点，按照不同比例稀释得到不同浓度水平样本，每个样本测3遍。每个水平的理论值根据最低点实测值计算得到。

3.6 特异性 按照说明书标示的干扰物质及浓度进行抗干扰实验，每种干扰物质最高浓度为：VC浓度4g/L，DB浓度250mg/L，GLU浓度40g/L，KCl浓度10g/L，NaCl浓度20g/L，UREA浓度40g/L。并取高浓度（100mg/L）、低浓度（40mg/L）尿液样本各1份，将每个干扰物质配制成最高浓度的10倍浓度的母液，将各母液与尿液样本按照1：9比例进行混合，用水与样本比例1：9作为空白对照，每个样本测3次，计算回收率。

4 统计学处理

采用SPSS10.0统计分析软件进行统计学分析。

结 果

1 精密度

检测北京九强mALB试剂盒其配套高、低水平质控品的日内不精密度分别为0.61%和0.70%，日间不精密度为1.83%和2.95%，高、低水平质控品的浓度分别为169.45mg/L和43.71mg/L（靶值允许偏差在20%内）。

2 准确度

北京九强与罗氏mALB试剂盒90例样本结果对比：相关性方程为Y＝1.0169X+5.7251，相关系数r＝0.9987，两试剂检测值结果的偏倚为1.051mg/L。结果表明，样本检测值无明显偏差，两试剂盒相关性良好。

3 线性范围

从线性结果来看，理论值与实测值相关性良好，在样本浓度0～400 mg/L范围内，回归方程为Y＝423.79X+1.0808，相关系数r＝0.9998，结果呈线性。

4 最大稀释倍数

按照稀释方法稀释后得到的结果如表1所示，在进行40倍稀释时，回收率在90%～110%范围内，符合判定标准，临床可报告范围上限为16000mg/L。

表1 最大稀释倍数实验结果

5 前带性能

在样本浓度小于550mg/L时，实测浓度和理论浓度基本一致。随着样本浓度升高，并在2178.1mg/L处出现拐点，表明开始出现前带反应。但是当样本浓度升高至43000mg/L时，检测结果仍在线性范围（400mg/L）以外。具体结果见表2。本实验结果，说明在临床中能够避免高值样本出现假阴结果的情况。在临床应用中，检测结果大于线性上限时建议对样本进行稀释复测，确定样本的真实浓度。

表2 前带性能结果

6 特异性

抗干扰实验结果表明，说明书中6个干扰物的添加浓度均未对检测结果出现干扰，各点回收率均在90%～110%标准范围内。

表3 特异性实验结果

讨 论

尿微量白蛋白的检测是临床的一个重要指标，病理性增高见于糖尿病、高血压、早期妊高症。检测尿中早期出现的mALB有利于早期发现肾脏损伤并进行干预，在肾脏损害尚处在可逆转的时期及时进行治疗［4-5］；对妊娠妇女的尿微量白蛋白和血清白蛋白检测，能够及早发现妊高症［6］。有研究表明，mALB检测对高血压和糖尿病肾病的早期发现与治疗有重要意义，尿微量白蛋白在单纯高血压/单纯糖尿病和高血压合并糖尿病时，已有明显升高；当发展到糖尿病肾病时，尿mALB即已远远高于健康对照组，其检测灵敏度高于尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）［7］。

目前测定mALB的方法有：放射免疫法、免疫比浊法、ELISA法、化学发光法等。其中，放射免疫法应用最早，是公认的mALB检测的金标准；但是此方法使用的仪器较贵且存在放射性污染等问题，在临床应用中具有很大的局限性［8］。ELISA方法成本低，但是操作繁琐、影响结果的因素较多、结果重现性差等问题也制约着在临床中的应用。化学发光法是近年来使用较多的方法，其优点是灵敏度和准确度较好，但缺点是成本较贵。免疫透射比浊法具有操作简单、检测速度快、结果重现性好等优势，在临床应用中有明显优势。北京九强mALB检测试剂盒性能的评价结果显示，该试剂盒精密度好、准确度高、线性范围宽、前带性能好，在全自动生化上能满足临床检测的需求。