甲状腺乳头状微小癌的病理特征与BANCR表达的相关性

郭 苗 李王丽

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲状腺癌最常见的组织学类型，占比在70%以上[1-2]。甲状腺微小乳头状癌(papillary microcarcinoma，PMC)为直径≤1 cm的甲状腺乳头状癌，在临床上具有恶性程度低、预后良好等特点，可长期处于亚临床状态，甚至终身无症状[3-4]，早期诊断可减少不必要的手术创伤及术后并发症，改善患者的预后[5-6]。PMC的病理组织学多呈滤泡样结构，缺乏边界，常无包膜；不过甲状腺乳头状增生也常常会表现为有乳头结构，与PMC的病理特征有一定的相似，常规的影像学诊断可出现漏诊情况[7]。长链非编码RNA(LncRNA)是一类长度超过200 nt，不具有编码蛋白质功能的基因片段，在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、转移、分化中发挥重要作用[8]。BARF基因激活的非编码RNA(BARF activated long non-coding RNA，BANCR)是新发现的一种lncRNA，BRAF基因可通过Ras/ERK信号通路参与调控细胞生长、分裂、凋亡、分化等生物学事件，其异常表达可能导致肿瘤形成[9]。有研究表明BANCR在肺癌、胃癌、结肠直肠癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤的发生和发展过程中起重要的作用[10-11]，但是在PMC中的表达情况还无相关报道。本文具体探讨了PMC的病理特征与BANCR表达的相关性，现总结报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究时间为2015年2月到2018年1月，选择在我院诊治的83例PMC患者作为观察组。纳入标准：符合PMC的诊断标准，且在术中得到确认；单侧发病；均未接受放、化疗；除外合并其它恶性肿瘤患者。同期选择在我院诊治的83例甲状腺乳头状增生患者作为对照组，符合甲状腺乳头状增生的诊断标准。2组患者的年龄、体重指数、发病位置、病灶直径、性别等基线资料对比，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。2组患者的临床与随访资料完整，研究得到了医院伦理委员会的批准，患者也在自愿条件下签署了知情同意书。

表1 2组一般资料对比

1.2 试剂与仪器

RNA逆转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒由大连TaKaRa公司提供，RNA提取试剂TRIzol购于美国Sigma公司。荧光实时定量PCR(real-timequantitative PCR， qRT-PCR)试剂盒购自上海生工公司。BANCR引物、GAPDH引物用DNAMAN软件设计并由大连TaKaRa公司合成。

引物序列：GAPDH正向引物：5'-AGAGGCAGGGATGATGTTCTG-3'，反向引物：5'-GACTCATGACCACAGTCCATGC-3'；BANCR正向引物：5'-ACAGGACTCCATGGCAAACG-3'，反向引物：5'-ATGAAGAAAGCCTGGTGCAGT-3'。

1.3 检测方法

采用TRLzol一步法提取2组病灶组织标本的总RNA，紫外分光光度计检测RNA浓度，反转录为cDNA后，进行qRT-PCR操作(20 μl)：50×ROX mix 0.4 μl，SYBRqPCR Mix 10 μl，cDNA产物1 μl，上下游引物各1 μl(10 μmol/l)，加去RNase水补足至20 μl，反应条件：95 ℃预变性1 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min，35个循环。根据公式2-ΔΔCt可以计算BANCR在不同组织中的相对表达量，相对表达量≥1.5为高表达。

1.4 病理数据收集

记录观察组患者的临床病理参数，包括临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度等。

1.5 统计方法

选择SPSS 22.00软件对本研究的计量数据与计数数据分析，以均数±标准差、率等进行表示，采用卡方χ2检验对计数数据进行分析，采用t检验对计量数据进行分析，多因素分析采用多因素逐步回归方法，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 BANCR表达情况对比

观察组BANCR相对表达量为(2.05±0.17)，高表达率为48.2%；对照组分别为(0.45±0.07)和3.6%，观察组显著高于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 2组BANCR表达情况对比

2.2 BANCR表达与PMC病理特征的相关性

在观察组中，BANCR高表达与PMC的临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度都有显著相关性(P<0.05)，见表3。

2.3 影响因素分析

在观察组中，以BANCR高表达作为因变量，以临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度作为自变量并给予赋值，多因素逐步回归方法分析结果显示临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度均为BANCR高表达主要的危险因素(P<0.05)，见表4。

表3 PMC患者的BANCR表达与病理特征的相关性(例，%)

3 讨论

PMC占甲状腺癌总数的70.0%左右，女性发病率高于男性，当前在我国的发病人数和死亡人数呈上升趋势[12]。虽然恶性肿瘤具有异质性，但是由于PMC与良性肿瘤的临床特点比较类似，导致诊断困难。虽然借助病理诊断可以减少漏诊率，但是术中冰冻切片的局限性限制了诊断的准确率[13]。常规影像学诊断的特异性也有待提高，且检查费用也相对比较高。为此建立可靠、可行的检测手段，对于PMC患者的早期诊断和治疗具有重要的临床价值[14]。

研究表明PMC的发生、发展、转移是一个涉及多分子和多基因相互作用的复杂过程，其中肿瘤抑制基因的突变、原癌基因的异常表达等均与PMC发生发展相关[15]。LncRNAs可以调控蛋白编码基因的表达，其是通过影响邻近基因顺式调节编码蛋白质的基因进行反式调节，并可参与调节细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和重新编程等过程[16]。相关研究证据显示LncRNAs常常在多种不同肿瘤类型中呈现异常表达情况，与相关肿瘤的诊断和预后有一定的相关性[17]。BRAF基因位于7号染色体长臂，是鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体，为一种原癌基因。BRAF在细胞外环境和细胞核之间起着连接作用，可使2个酪氨酸激酶受体发生二聚化，可被多种生长因子及激素激活，进而活化下游蛋白，与肿瘤的生成、增殖、分化有很好的相关性。本研究显示观察组BANCR相对表达量为(2.05±0.17)，高表达率为48.2%；对照组分别为(0.45±0.07)和3.6%，观察组显著高于对照组(P<0.05)，表明BANCR在PMC中呈现高表达状况。相关研究也发现BANCR可以通过自噬机制促进PMC的增殖，通过抑制细胞周期蛋白来影响甲状腺癌细胞株TSHR的表达，影响甲状腺癌细胞的增殖和生长[18]。

表4 PMC患者BANCR表达的影响因素分析(n=83)

PMC生长缓慢，可在甲状腺内局限数年至数十年，预后相对比较好，但其中也有大约15.0%的患者存在侵袭表型[19]。在病理诊断过程中，由于部分PMC的形态特征不明显，特别是呈滤泡状排列的病例，需要与某些增生性病变进行合理鉴别诊断。BANCR是一类位于人9号染色体上长度为693 bp的LncRNA，可在肿瘤细胞生长和转移过程中发挥重要作用。BANCR能提高MEK/ERK通路的活性，降低E钙黏素表达，改变整合素的表达，从而促进癌细胞侵袭和转移[20]。相关研究也表明BANCR高表达组的生存时间较BANCR低表达组显著缩短，提示BANCR的高表达可能与PMC的预后不良有关[21]。本研究显示在观察组中，BANCR高表达与肿瘤的临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度都有显著相关性(P<0.05)。相关研究表明BANCR可通过调节E-cadherin表达，在肿瘤细胞的上皮间质转化中发挥重要作用，是肿瘤发生发展过程中的关键因子[22]。

当前手术与放疗治疗PTC的效果比较好，但是依然有部分患者可出现复发与转移情况。有研究显示在甲状腺癌组织及细胞中BANCR表达量较正常甲状腺组织显著升高，过表达BANCR能够激活细胞自噬，抑制细胞凋亡，促进细胞的自我更新，从而促进甲状腺癌细胞增殖[23]。本研究多因素逐步回归方法分析结果显示临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度为BANCR高表达主要的危险因素(P<0.05)。相关研究也发现BANCR表达下调可促进上皮间质转化从而增强了肺癌侵袭性，增加了患者的不良预后风险[24]。不过本研究也有一定的局限性，样本量还不够大，没有对患者预后进行随访，可能存在一定的研究偏差，将在下一步研究中进行深入分析。

总之，BANCR在PMC中呈现高表达状况，与临床分期、淋巴结转移、远处转移、分化程度等病理特征有显著相关性，有利于辅助鉴别诊断PMC。