4种真空采血管对生化检测项目结果影响的评估

瞿培培，肖春海，董志武

(上海市第六人民医院金山分院检验科，上海 金山 201599)

标本采集是临床实验室检测前质量控制的重要环节，血清/血浆的良好分离对保证结果的准确性至关重要。目前临床实验室普遍使用分离胶促凝试管或无添加剂真空试管用于常规生化项目检测，使用肝素锂抗凝试管用于急诊生化项目检测。

分离胶促凝管中的分离胶是具有触变性的惰性胶体，其比重稳定为1.05 mmol/L，高于血液液体成分(1.02 mmol/L)，低于血液有形成分(1.08 mmol/L)。受离心力作用分离胶可以将血清/血浆与血液有形成分隔开来[1-3]。促凝剂一般是硅石粉、碳素粉等促凝物质的混合物，可以激活凝血因子，启动凝血反应，促进血液凝固，达到快速分离血清的目的。但有实验证明，在促凝剂的作用下纤维蛋白原快速转变为纤维蛋白会造成红细胞挤压变形而发生轻微溶血，导致K+和LDH等项目检测结果出现偏差[4]。分离胶促凝管一般至少需要放置15 min，而无添加剂真空试管至少需要放置30 min后才能有效分离血清。而对于肝病、血液病或放化疗患者，血液完全凝固则需要更长时间。如果标本久置不仅延长检验结果回报时间(turn-around time，TAT)，耽误危急病人的诊治，而且标本未凝固完全情况下离心会导致分离胶上层的血清层出现纤维蛋白丝甚至是凝块，造成仪器采样针的堵塞的严重后果[5-6]。而肝素锂抗凝试管中血浆与红细胞直接接触，长时间存放容易造成血糖等物质的体外降解和红细胞内某些高浓度物质的释放，不利于标本的复检。

为解决上述问题，本研究利用肝素锂分离胶试管采集静脉血标本，检测常规生化指标，与其它三种试管进行比较以评估肝素锂分离胶试管在临床生化检查应用上的可行性。

1 资料与方法

1.1 病人和标本

2016年6 月～2016年 9月间我院门诊和住院的100名志愿者空腹8 h后于上午7点～9点采集静脉血液标本各5 mL分别放置于肝素锂分离胶试管、分离胶促凝试管、肝素锂抗凝试管和无添加剂真空试管。

1.2 真空采血管

所有真空采血管由广州阳普医疗有限公司提供(批号160521)。

1.3 仪器与试剂

cence湘仪L550离心机，西门子全自动生化分析仪ADVIA 2400，胆汁酸(TBA)试剂由澳斯邦生物工程有限公司提供，其余试剂均为西门子生化仪原装配套试剂。所有操作严格按照试剂说明书和科室SOP文件执行。

1.4 检测项目

丙氨酸氨基转移酶(ALT)，天门冬氨酸氨基转移酶(AST)，γ-谷氨酰基转移酶(GGT),碱性磷酸酶(ALP)，总胆红素(TBIL)，直接胆红素(DBIL)，总胆汁酸(TBA)，总蛋白(TP)，白蛋白(ALB)，血糖(GLU)，尿素氮(BUN)，肌酐(CREA)，尿酸(UA)，甘油三酯(TG)，胆固醇(TC)，血钾(K+)，乳酸脱氢酶(LDH)共17项。

1.5 方法

标本采集后立即颠倒混匀5～6次，分离胶促凝管和无添加剂真空试管室温静置30 min后1 700×g离心10 min。肝素锂分离胶试管和肝素锂抗凝试管混匀后立即离心，上清液1 hr内测定17项常规生化指标。将测定好的标本置于4 ℃冰箱，分别于6 hr，12 hr，24 hr，48 hr和72 hr测定GLU、K+及LDH。

1.6 统计学处理

2 结 果

2.1标本采集后1 hr 4种真空采血管检测常规生化指标结果1 hr内检测4种试管17项常规生化指标，其中TP、K+差异有统计学意义(P<0.05)，ALT、AST、GGT等指标差异无统计学意义(P>0.05)；肝素锂分离胶管与分离胶促凝管及无添加剂真空管测的TP、K+值差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2GLU，K+和LDH随标本保存时间检测结果

24 hr时肝素锂抗凝试管及无添加剂真空试管分别与其1 hr血糖测得值间差异有统计学意义(P<0.05)；48 hr后肝素锂分离胶管与其1 hr血糖测得值间差异有统计学意义(P<0.05)，，72 hr内分离胶促凝管血糖测得值间差异无统计学意义(P>0.05)，血糖保存稳定性高。见表2，图1。

24 hr后肝素锂抗凝管和无添加剂真空管的K+值与其1 hr测得值间差异有统计学意义(P<0.05)；48 hr后肝素锂分离胶管的K+值与其1 hr测得值间差异有统计学意义(P<0.05)，而72 hr内分离胶促凝管K+值与其1 hr测得值间差异无统计学差异(P>0.05)，见表3，图2。

24 hr后肝素锂分离胶管LDH值与其1 hr测得值间差异有统计学意义(P<0.05)。48 h后肝素锂抗凝管和无添加剂真空管LDH值与其1 hr测得值间差异有统计学意义(P<0.05)，72 hr内分离胶促凝管LDH测得值间差异无统计学意义(P>0.05)。见表4，图3。

肝素锂分离胶分离胶促凝管肝素锂抗凝管无添加剂真空管FPALT27.20±27.6226.85±27.7625.85±27.2727.03±27.630.0190.996AST24.00±14.2723.73±14.1623.53±13.8223.98±14.410.0100.999GGT35.52±37.2335.33±37.0334.22±35.7935.92±38.30.0150.997ALP93.15±37.5592.60±38.0291.80±36.8094.2±37.980.0290.993TBIL14.83±6.0014.68±5.9614.90±6.0114.70±6.030.0120.998DBIL4.29±1.764.25±1.754.39±1.764.54±1.690.2210.882TBA3.27±1.973.35±1.873.23±1.913.27±1.940.0300.993TP78.42±7.3874.43±6.9277.47±7.4175.18±7.142.7090.047∗ALB45.44±4.8144.15±4.8145.04±4.7644.6±4.850.5300.663GLU6.57±2.326.44±2.326.49±2.366.31±2.390.0850.968BUN5.67±4.355.86±4.665.79±4.615.93±4.680.0230.995CRE61.05±18.9960.65±19.1161.98±18.7859.62±18.520.1070.956UA323.13±108.28320.70±106.54324.28±107.82319.83±107.070.0150.998K+3.98±0.474.21±0.504.01±0.474.24±0.503.1440.028∗TG1.45±0.541.44±0.531.43±0.531.45±0.540.0150.997CHOL5.05±1.036.42±8.815.01±1.015.11±1.040.9710.434LDH157.8±31.06156.57±31.01151.04±31.94155.96±30.460.3640.779

表2 GLU浓度随标本保存时间的检测结果均值

表3 K+浓度随标本保存时间检测结果均值

表4 LDH浓度随标本保存时间检测结果均值

76543210血糖值1612244872t/min肝素锂分离胶管分离胶促凝管肝素锂抗凝管无添加真空管

图1 GLU浓度随标本保存时间的变化曲线

图2 K+浓度随标本保存时间的变化曲线

图3 LDH浓度随标本保存时间的变化曲线

3 讨 论

根据实验数据的统计学分析结果，1 hr内肝素锂分离胶管与分离胶促凝管及无添加剂真空管测的TP、K+值差异有统计学意义。其中肝素锂抗凝血浆中的TP和K+值均高于分离胶促凝管及无添加剂真空试管分离的血清TP和K+值。可能由于肝素对抗凝血活酶及凝血酶的形成，阻止血小板聚集，不影响细胞体积，不溶血，能快速分离出血浆。而分离胶促凝管和无添加剂真空试管分离的血清，经过了血液凝固，血小板受到破坏，释放了一定量的钾离子，导致血清K+值偏高。多数人认为血浆K+更能反映体内的真实情况，是首选的标本类型[7-8]。由于血浆中纤维蛋白原未经血液凝固过程被消耗，所以肝素锂分离胶管和肝素锂抗凝管抗凝血浆的TP值略高于其他两管分离出的血清TP值约2～4 g/L，急性时相反应期更加高一些[9-10]。根据本研究及相关文献数据[11]，使用肝素分离胶管替代常规的分离胶促凝管和无添加剂真空试管进行常规生化项目的快速检测是可行的。

在日常检验工作中，我们不仅要关注检测结果的准确性，标本保存的稳定性方面同样值得重视。一般规定标本保存时间为7 d，但是根据目前实验室和临床需求，标本复检时间一般在24 h左右。超过48 h的标本复检结果对于临床意义不大。临床医生更倾向于重新采样检测，更真实的反映病人变化情况。

GLU是检验科生化检测中常见的项目。在临床检测中若是全血放置，由于红细胞糖酵解作用会使GLU浓度每小时下降5%～7%。因此应及时分离血清/血浆进行检测[12-14]。本研究结果显示1 h内4种真空采血管GLU测得值差异无统计学意义，48 h肝素锂分离胶管GLU与其1小时测得结果差异有统计学意义，标本保存稳定性优于肝素锂抗凝试管和无添加剂真空试管，这可能与肝素锂分离胶管中分离胶有很大关系。分离胶将红细胞与血浆隔离开，避免了红细胞对GLU糖酵解作用，在一定程度上保证了GLU检测值的稳定性，能满足临床需求。对K+的检测影响方面，48 hr时肝素锂分离胶管的K+与其1 小时测得值间差异有统计学意义，但优于肝素锂抗凝试管及无添加剂真空试管。这由于分离胶隔开红细胞与血浆，避免红细胞中释放的K+进入血浆。据文献报道[15]，血浆LDH受血小板的影响较大，离心力1 700×g 5 min并不能将血小板全部沉降。在检测时血小板裂解释放LDH会使其升高。可通过延长离心时间消除血小板对LDH检测的影响。故本研究设定离心时间为10 min。24 h肝素锂分离胶管LDH值与其1 hr测得值间差异有统计学意义，检测其与1 hr测得值间的相关系数为0.987，P<0.001，两者相关性好，对临床复检影响不大。

4 结论

肝素分离胶管抗凝作用强，不易造成细胞变形和溶血，可部分替代分离胶促凝管和无添加剂真空试管进行常规生化的检测。易受保存方式影响的三个生化项目GLU、K+和LDH上，肝素分离胶管的保存效果优于肝素抗凝管，可替代肝素锂抗凝管用于急诊生化项目的检测。