外周血T-SPOT.TB 检测结核TAM受体水平在痰涂片阴性肺结核的诊断价值

刘德平 刘黎 陈慧冬 杨金边 石应元 刘德军

武汉市传染病医院1结核病科；3检验科（武汉430023）；武汉科技大学天佑医院2感染科，4检验科（武汉430064）；5深圳市伟光医院急诊科（广东深圳518000）

临床中实现结核病的早期快速诊断是实现早治疗的基础，也是临床中控制和预防结核病传播的重要手段［1］。结核分枝杆菌培养及痰涂片是临床中确诊结核病的传统方法，但常规痰涂片耗时较长在患者确诊后多已错过最佳治疗时机［2］。而痰涂片阳性率较低，仅为10%至30%。此外，有研究结果显示，痰涂片阴性肺结核患者接触者感染概率约在10%～20%之间，因而临床中及时且准确的对痰涂片阴性结核病患者进行确诊，具有十分重要的意义［3］。现有的常规检测手段无法有效实现快速筛检要求，而近年来迅速发展的分子生物学技术为痰涂片阴性肺结核的诊断提供了诸多有效手段［4］。结核感染T 细胞斑点试验（Dot blot test for tuberculosis infected T cells，T-SPOT.TB）是近年来飞速发展的医学诊断技术，其可通过检测受试者外周血中MTB 抗原刺激活化的T 细胞释放的干扰素，是目前较为敏感的细胞学检测技术之一［5］。TAM（Tyro3/Axl/Mer receptor tyrosine kinase）细胞缺失常导致出现自身免疫性疾病和慢性炎症发生，而当TAM 信号异常时常伴随出现诸多病理性改变［6］。但T-SPOT.TB 检测结核TAM 受体水平在痰涂片阴性肺结核诊断中的应用仍鲜有报道。因而笔者选取我院收治的痰涂片阴性肺结核患者作为研究对象，分析在痰涂片阴性肺结核中外周血T-SPOT.TB 检测结核TAM 受体水平的诊断价值。

1 资料方法

1.1 一般资料 经我院伦理委员会批准，选取2016年1月至2018年3月间我院收治300 例痰涂片阴性疑似肺结核患者作为本组研究对象，其中确诊肺结核150 例患者作为观察组，非肺结核150例患者作为对照组。观察组中男89 例，女61 例，年龄（45.83±9.28）岁，对照组中男93 例，女57 例，年龄（47.19±10.02）岁，两组患者一般临床资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 入组排除标准

1.2.1 入组标准 （1）患者均经胸部X 线检查；（2）患者伴随出现咳嗽、咳痰症状大于2 周；（3）至少3 次痰涂片检测阴性；（4）观察组患者符合《痰涂片阴性活动性肺结核的诊断治疗与管理》标准［7］；（5）对本研究知情并签署知情同意书。

1.2.2 排除标准 （1）恶性肿瘤患者；（2）痰涂片检查阳性；（3）经病理检查无法确诊；（4）主动申请退出本研究。

1.3 方法 采集所有受试者空腹静脉血5 mL，取2 mL 离心收集血清，采用酶联免疫吸附法检测血清中TAM 水平，所用试剂盒均购买自联科生物科技有限公司，所有操作均严格遵照试剂盒说明书进行操作，若TAM ≤60 pg/mL 则判定为TAM 阳性。取3 mL 血样，使用Oxford Immunotec 公司试剂盒检测外周血T-SPOT.TB 水平，若符合如下任一标准则判定T-SPOT.TB 阳性：（1）若对照无反应性孔点数≥6，抗原A 或抗原B 有反应性样本斑点数≥无反应性孔点数×2；（2）对照无反应性孔点数在0～5 之间，抗原A 或抗原B 有反应性样本数-对照无反应性孔点数≥6。在行联合诊断时，若所有指标均为阳性则判定为系列联合诊断阳性，若任一指标为阳性则判定平行联合诊断阳性。

1.4 统计学方法 本组研究中使用SPSS 19.0 行统计学分析，采用均值±标准差表示计量资料，采用百分率表示计数资料，行t及χ2检验分析组间数据差异，以《痰涂片阴性活动性肺结核的诊断治疗与管理》标准作为金标准，分析各指标的诊断价值，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血中TAM 受体水平检测结果 本组研究结果显示，观察组患者血中TAM 受体水平高于对照组，且差异存统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 患者血中TAM 受体水平检测结果Tab.1 Serum TAM receptor levels in patients x±s

2.2 外周血T-SPOT.TB 水平检测结果 本组研究结果显示，观察组患者A 孔斑点数及B 孔斑点数均明显高于对照组，且差异存统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 外周血T-SPOT.TB 水平检测结果Tab.2 Test results of T-SPOT.TB level in peripheral blood x±s

2.3 各指标检测结果 本组研究结果显示，TAM受体诊断阳性数为153 例，T-SPOT.TB 诊断阳性数为166 例，平行联合诊断的阳性为197 例，系列联合诊断的阳性为116 例，见表3。

表3 各指标检测结果Tab.3 Test results of various indicators例

2.4 各指标诊断价值分析结果 本组研究结果显示，平行联合诊断的敏感度为98.67%，系列联合诊断的特异度为98.67%，平行联合及系列联合诊断的AUC 为0.984 和0.974，且联合诊断曲线下面积（AUC，Area Under Curve）均显著高于TAM 受体和T-SPOT.TB 单独诊断，且差异存统计学意义（P＜0.05），见表4、图1。

表4 各指标诊断价值分析结果Tab.4 Diagnostic Value Analysis of Indicators%

图1 各种诊断ROC 曲线Fig.1 Various diagnostic ROC curves

3 讨论

痰涂片阴性肺结核的快速诊断是临床中较为棘手的亟待解决的问题，有助于患者获取及时有效治疗，具有较高的临床应用价值［8］。有研究指出，急慢性炎症反应与免疫细胞大量凋亡和结构细胞聚集密切相关，此时需要大量吞噬细胞发挥其胞葬作用进而起到促进炎症消退。有效清除凋亡细胞可有效促进机体恢复稳态［9］。在炎症消退过程中，存在可有效识别凋亡细胞的一类受体，可防止炎症反应诱发的继发感染。有研究［10］指出，TAM 配体Gas6 作为桥接分子可有效连接细胞表面TAM，促进细胞吞噬，因此在清除凋亡细胞中起到十分重要作用。有学者指出，血中TAM 水平与系统性红斑狼疮处于活动期与否密切相关，相较于健康者及非活动期系统性红斑狼疮患者，活动期系统性红斑狼疮患者血中TAM 水平显著升高，认为TAM 可作为临床中评估系统性红斑狼疮的生物学标志物之一［11］。一般情况下，TAM 在免疫监视及防御过程中起到十分重要的作用，且免疫系统异常在结核病的发生及发展过程中均起到十分重要的作用［12］。

近年来，随着免疫学技术的发展，T-SPOT.TB是近年来发展的新型诊断结核感染的方法，日益受到广大临床医师的重视。有大量研究结果显示，采用T-SPOT.TB 在对结核进行诊断时均具有较高的特异性和敏感性，且其检测结果并不受卡介苗接种与否的影响［13］。有学者指出，T-SPOT.TB 在对结核病进行诊断时具有较高的诊断价值，采用小样本研究结果显示，外周血及胸水中T-SPOT.TB水平进行检测具有较高的特异性和敏感性［14］。国外有研究结果显示，外周血中T-SPOT.TB 水平可作为诊断和评估结核病的重要指标［15］。

本组研究结果显示，观察组患者血中TAM 水平显著高于对照组，且观察组外周血T-SPOT.TB 水平显著高于对照组。对患者血中TAM 水平及TSPOT.TB 水平检测在结核并中的诊断价值分析结果显示，采用血中TAM 水平及T-SPOT.TB 水平联合诊断可显著提高单纯采用血中TAM 水平或TSPOT.TB 水平的诊断价值，采用平行联合诊断时可有效提高诊断的敏感度，采用系列联合诊断时可显著提高诊断特异度。分析认为，在结核病的发生及发展过程中包括TAM 在内的TAM 受体异常起到是十分重要的作用，且T-SPOT.TB 水平检测可有效对结核病进行诊断。

综上所述，通过检测外周血T-SPOT.TB 检测结核TAM 受体水平可有效提高临床中痰涂片阴性结核病的诊断价值，在临床中具有较高的应用价值。但本组研究临床样本数较少，有待后续扩大临床样本数深入研究。