通脉止渴胶囊薄层色谱鉴别

郑荣先

通脉止渴胶囊是我院自制制剂，由葛根、天花粉、当归、川芎等14 味中药组成，具有益气养阴、活血通络功效。方中以葛根、黄芪、麦冬、黄精、天花粉益气养阴，扶正固本；配以当归、川芎、桃仁、红花、地龙、蜈蚣等以活血通脉。葛根主要有效成分为葛根素，天花粉降血糖主要成分是天花粉凝集素蛋白[1]，当归、川芎的主要有效成分为挥发油类，几味药物均具有有效的薄层色谱法指标控制成分及方法。为了更好地控制该制剂的质量，保证临床用药安全有效，采用薄层色谱法对通脉止渴胶囊中葛根、天花粉、当归、川芎进行定性鉴别，与《中华人民共和国药典》（2015 版）及有关文献报道，对该制剂中4 味药物质量进行控制，建立起更加科学、可行的多指标成分质量控制方法，通过实验研究，用薄层层析法确定通脉止渴胶囊的质量标准，操作方法简便，结果准确、可靠。

1 仪器与试药

ZF-2 型三用紫外分析仪；PQ3120 超声波清理器；102 型电热恒温干燥箱；328A 分析天平；硅胶G 板；葛根素对照品、天花粉、当归、川芎对照药材，葛根素对照品（110752-201313），川芎对照药材（120918-200809）为中国药品生物制品检定所提供，天花粉对照药材（121361-201603），当归对照药材（120927-201516）为中国食品药品检定研究院提供；分别缺葛根，天花粉，当归、川芎阴性对照样品；处方自制制剂供试品三批；其他试剂均为分析纯，生产单位为天津市凯通化学试剂有限公司。

2 通脉止渴胶囊中部分药物薄层色谱鉴别方法和结果

参照《中华人民共和国药典》2015 版一部各味 中药药材的TLC 鉴别方法鉴别[2]，具体如下。

2.1 葛根的薄层色谱鉴别

供试品溶液的制备：取本品内容物20 g，研细，加乙酸乙酯30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 ml 甲醇使溶解，作为供试品溶液。点样量：5 μl；对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。点样量：5 μl；阴性对照溶液的制备：取处方中除去葛根的其他药味，按处方比例制成缺葛根的阴性对照样品。取阴性对照样品50 ml，同供试品溶液的制法，制成阴性对照溶液。点样量：4 μl；展开剂：三氯甲烷-甲醇-水（7：2.5：0.25）为展开剂，展开，展距：上行展开8 cm；显色：取出，晾干，置氨蒸气中熏15 min；检视：置紫外光灯（365 nm）下检视。见图1。

图1 葛根的薄层色谱鉴别

2.2 天花粉的TLC 鉴别

供试品溶液的制备：取本品15 g，研细，加稀乙醇40 ml，超声处理30 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。点样量：4 μl；对照药材溶液的制备：取天花粉对照药材2 g，加稀乙醇20 ml，超声处理30 min，滤过，取滤液作为对照药材溶液。点样量：2 μl；阴性对照溶液的制备：取处方中除去天花粉的其他药味，按处方比例制成缺天花粉的阴性对照样品。取阴性对照样品50 ml，同供试品溶液的制法，制成阴性对照溶液。点样量：4 μl；展开剂：正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水（8：2：2：3），展距：上行展开8 cm；显色：取出，晾干，喷以茚三酮试液；检视：在105 ℃加热至斑点显色，缺天花粉阴性对照药材在与对照药材和三批供试品色谱相应的位置上无相同颜色的荧光斑点显示。见图2。

图2 天花粉的薄层色谱鉴别

2.3 当归、川芎的TLC 鉴别

供试品溶液的制备：取本品15 g，研细，加乙酸乙酯30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml 使溶解，作为供试品溶液。点样量：5 μl；对照药材溶液的制备：取当归、川芎对照药材各1 g，加乙酸乙酯30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml 使溶解，作为对照药材溶液。点样量：5 μl；阴性对照溶液的制备：取处方中除去当归、川芎的其他药味，按处方比例制成缺当归、川芎的阴性对照样品。取阴性对照样品30 ml，同供试品溶液的制法，制成阴性对照溶液。点样量：5 μl；展开剂：环己烷-乙酸乙酯（9：1），展距：上行展开8 cm；显色：取出，晾干；检视：置紫外光灯（365 nm）下检视。见图3。

2.4 4味药物TLC 鉴别结果

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照在相应位置无斑点，表明阴性对照无干扰。比较不同厂家的薄层板及不同的温湿度条件，结果色谱图中均斑点清晰、分离效果较好。故列入该制剂质量标准控制。

3 薄层色谱法鉴别中需要注意问题

3.1 薄层色谱法在2015年版国家药典委员会单独纳入四部通则色谱法项下薄层色谱法（0502），用于 鉴别、检查、或含量测定[3]。操作中仍需要加强规范，样品溶液制备、展开剂、点样、展开（预饱和、温湿度控制、Rf 值展距）、显色、摄像与记录及图谱分析与评价等，每一个环节对薄层色谱鉴别均具有重要影响。

图3 当归、川芎的薄层色谱鉴别

3.2 医院处方制剂共14 味中药组成，成分复杂，待测定成分受其他因素干扰较大，易影响分离效果，影响定性定量的分析。几组药物溶液制备采取溶剂提取法，根据该中药饮片含有各种有效成分在溶剂中的溶解性，分别选取对活性成分溶解度大，对其他成分溶解性小的溶剂而达到该成分的提取，进行薄层鉴别。

3.3 采用微升毛细管手动点样，注意控制点样量，点样量大斑点分离度差，点样量小斑点显示清晰度不够，根据情况选用圆点状或窄细的条带状进行点样。

3.4 按照《中华人民共和国药典》，主要考虑溶剂的极性和溶剂的选择性，控制基线至展开斑点中心的距离与基线至展开剂前沿的距离的比值（Rf）在0.2～0.8，达到最佳的分离效果。

3.5 选用的是烟台市化学工业研究所生产的硅胶G板，根据展开的效果选用适当的展开方法。将点好样的供试品、对照药材、阴性对照药材的薄层板放入预饱和完展开缸中，浸入展开剂的深度为距原点5 mm，密闭。均上行展开8 cm，取出薄层板，晾干，置紫外灯下（365 nm）检测。

3.6 比较不同厂家的薄层板及不同的温湿度条件，结果温度控制在25 ℃，相对湿度70%时，色谱图中均斑点清晰、分离效果较好。

3.7 处方中葛根薄层色谱展开后取出，晾干，置氨蒸气中熏15 min，置紫外光灯（365 nm）下检视荧光斑点。天花粉薄层色谱展开后取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105 ℃加热至斑点显色。当归、川芎薄层色谱展开后取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视荧光斑点，

4 讨论

以硅胶G 板作为吸附剂，分析速度快，在365 nm紫外灯下检视，斑点荧光灵敏度高，持续时间长，便于观察。温度在室温进行色谱分析，色谱效果较好，温度过低，展开剂易分层。

各药物选择溶媒合理，超声震荡法，提取完全，效果好。对缺相应药物阴性对照溶液，结果在相应位置无斑点，表明阴性对照无干扰。

通脉止渴胶囊以糖尿病患者为适用对象，在临床实践治疗中以中医药理论为指导，糖尿病仍以消渴之“阴虚”为根本病机，治疗应以益气养阴，活血通脉为法。方中以葛根、黄芪、麦冬、黄精、天花粉益气养阴，扶正固本；配以当归、川芎、桃仁、红花、地龙、蜈蚣等以活血通脉以治标，诸药合用，共奏益气养阴、活血通脉功效。薄层色谱鉴别中选取方中均具有有效治疗成分药材，建立起多指标成分控制制剂质量的薄层色谱鉴别方法。

葛根具有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通筋活络、解酒毒功效，主要含葛根素，是其特有的有效成分，在心脑血管系统、糖尿病、肠道系统等组方配伍中应用广泛。葛根素能降低血糖、血液黏度，具有降低改善脂肪细胞的胰岛素抵抗，增强脂肪细胞对葡萄糖提取和利用的能力[4]，因此葛根素能控制血糖浓度，抑制糖蛋白基化的进程，能有效降低血糖，预防和治疗糖尿病并发症。该制剂中选用成分确定，专属性强的中药饮片，能有效控制质量。按照《中华人民共和国药典》及有关文献报道采用薄层色谱法对葛根进行鉴别，专属性强，重现性好，选择的展开剂分离效果显著，斑点清晰，可作为该制剂的质量控制方法。

天花粉功效清热泻火，生津止渴，消肿排脓，文献中报道，天花粉发挥其药理活性的主要成分包括天花粉蛋白（Trichosanthin,TCS）、天花粉凝集素（Trichosanthes kirilowii lection,TKL）、天花粉多糖、瓜氨酸，此外还包括皂苷类和黄酮类成分等[5]；天花粉复方制剂有降血糖作用，降血糖活性化合物是植物凝集素类化合物，具有抗脂肪分解和及促进脂肪合成等胰岛素样作用[6]；天花粉中分离得到5 种降血糖有效成分，TrichosanA、B、C、D、E 具有降低正常小鼠的血糖作用[7]；天花粉为“消渴圣药”，在治疗糖尿病及终止妊娠方面具有极高的新药开发利用价值[8]。

当归有补血活血，调经止痛，润肠通便等功效，当归含有挥发油、有机酸、多糖和黄酮等成分，药理作用广泛，当归“补血”对机体造血作用明显，通过刺激与造血相关细胞、分子等对造血系统产生影响，达到“补血”作用。“活血”对循环系统作用明显，通过抑制血小板凝聚达到治疗效果，对糖尿病、银屑病等治疗效果明显[9]；川芎有活血行气，祛风止痛的功效。川芎挥发油中含有苯酞、烯萜醇、脂肪酸类化合物。藁本内酯、丁基苯酞（3）、丁烯基酞内酯（4）等苯酞类化合物和α-蒎烯（15）、胡萝卜烯醇（17）等烯萜、烯醇类化合物在川芎挥发油中含量相对较高且稳定，可作为川芎挥发油指纹图谱的指标成分[10]。两味药物均含有挥发油类有效成分，可用水蒸气蒸馏法提取，方法简单易行，经济实用。

4 味药物均为方中重要药物，治疗作用明显，成分确定，作为方剂质量控制品种，色谱识别度高，斑 点清晰，结果可靠，因此，可作为通脉止渴胶囊质量控制的依据。