循环miRNA-21在急性冠脉综合征早期诊断中的表达水平及其临床意义研究

microRNAs是一类进化上高度保守的非编码小分子单链RNA，在转录水平负性调控靶基因表达，在细胞与组织之间传递信息[1]，研究表明其参与调控动脉粥样硬化的形成与发展。miRNA不仅存在于细胞内，更可稳定存在于血液循环中，这为临床检测提供了有利条件。在心血管病领域中多角度的miRNA-21相关研究显示，其与冠心病发生发展存在诸多关联[2-4]。本研究测定临床实际中急性起病的ACS病人和非心源性胸痛病人间血浆miRNA-21的含量变化情况，旨在阐明急性冠脉综合征(ACS)病人与miRNA-21表达水平的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 入选2016年11月—2017年3月就诊于山西医科大学第一医院胸痛中心的ACS病人，临床确诊后将病人分为3组，急性心肌梗死(AMI)组、不稳定型心绞痛组(UA组)和非心源性胸痛组(对照组)，各30例。分组的理论依据为第3版的心肌梗死全球定义[5]、中国急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南(2015)[6]和非ST段抬高型急性冠状动脉综合征诊断和治疗指南(2016)[7]。纳入标准：年龄20～85岁，性别种族不限；发病时间在12 h内病人。排除标准：年龄<20岁，>85岁；各种疾病晚期病人；既往有心肌梗死、心肌病、结构性心脏病、恶性心律失常、经皮冠状动脉介入术(PCI)、冠状动脉旁路移植术(CABG)史；急性心力衰竭；急性心包炎；病毒性心肌炎；感染性心内膜炎；急重症感染；各种肿瘤性疾病；严重的风湿免疫性疾病；严重心、肝、肾功能不全者；精神失常者。

1.2 方法 受试者于发病入院即刻抽取肘静脉血5 mL，EDTA抗凝后冷藏，8 h内分离血浆并于-80 ℃冻存。经miRcute 血清/血浆miRNA 提取分离试剂盒高效提取血浆中小片段RNA，采用加尾法对目标基因进行反转录形成cDNA，每份样品中外加1 ng线虫miRNA-39作为内参基因，依据SYBR Green原理行q-PCR检测各组血浆内的miRNA-21水平，结果以2(CT[miRNA-21]- CT[cel-miRNA-39])呈现。同时抽取的血样进行心肌肌钙蛋白I(cTnI)和N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)检测，该数据均来自山西医科大学第一医院检验科标准化测定结果。病人诊疗期间完善一般资料。

2 结 果

2.1 各组临床资料比较 各组间年龄、性别、体质指数及取样时血压、心率记录等方面差异无统计学意义。详见表1。

表1 各组一般资料比较

注：1 mmHg=0.133 kPa

2.2 miRNANA-21、cTnI和NT-proBNP水平比较 miRNA-21等指标不符合正态分布，以四分位间距表示。组间比较同样使用非参数检验，结果显示：AMI组相比于UA组、对照组，miRNA-21的表达水平差异有统计学意义(P<0.001)；UA组和对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05)，两组间miRNA-21的表达水平差异有统计学意义。详见表2。

表2 各组miRNA-21、cTnI和NT-proBNP检测值比较(四分位间距)

与AMI组比较，1)P<0.001；与对照组比较，2)P<0.05

2.3 Pearson检验进行相关性分析 AMI组的miRNA-21、cTnI和NT-proBNP采用Pearson检验进行相关性分析，结果示miRNA-21与cTnI呈正相关，相关系数为r=0.851；miRNA-21与NT-proBNP呈正相关，相关系数为r=0.421。经ROC曲线分析得到，miRNA-21的曲线下面积为0.879，P<0.01，95%CI为(0.784，0.974)；cTnI的曲线下面积为0.982，P<0.01，95%CI为(0.943，1.000)。详见图1。

图1 ROC曲线分析图

3 讨 论

本研究表明，AMI组较对照组miRNA-21的表达差异有统计学意义，miRNA-21和急性心肌梗死发病具有密切的关系，目前，国内外相关研究结论不一致[10]。急性心肌梗死后miRNA-21表达上调，可推测miRNA-21具有作为新的心肌损伤标志物的潜力；UA组miRNA-21的表达相较对照组也有统计学意义，可见miRNA-21对不稳定型心绞痛有一定的预测作用；本研究中AMI组miRNA-21和cTnI呈正相关，相关系数为r=0.851，可以说是高度相关的两组指标，据此推测在急性心肌梗死中，miRNA-21升高和cTnI升高的作用机制可能有相似或者相近之处，或是miRNA-21表达与cTnI的含量变化存在关联；但UA组较对照组中miRNA-21有差异性表达，最终的临床诊疗证实UA组冠状动脉造影显示均有严重的冠状动脉狭窄，证明了疾病存在，推测miRNA-21较cTnI在诊断UA中更有优势。根据ROC曲线计算结果，miRNA-21可以作为诊断急性心肌梗死的检验标准；而相比cTnI的曲线下面积，miRNA-21对急性心肌梗死的检验效能不及cTnI，cTnI在检测急性心肌梗死准确性更高。本结果还显示miRNA-21与NT-proBNP呈正相关，相关系数并不高(r=0.421)，推测急性心肌梗死引起miRNA-21表达上调的因素中，NT-proBNP相关的心力衰竭因素也起到了一定作用，但不是主要相关因素。

ACS病人急性起病时，其循环miRNA-21的表达水平是上升的，miRNA-21在ACS的早期诊断有一定价值。