高盐饮食对自发性高血压大鼠肾脏的影响及左旋氨氯地平的作用

夏南，张焕鑫，赵继先，李波

高血压是临床常见的心血管病之一，是由遗传、环境等多种危险因素相互作用所致。在影响血压的诸多因素中，盐扮演着极其重要的角色，其摄入量与人群血压水平、高血压患病率，乃至靶器官损害密切相关。目前已有学者在人和动物身上证实了高盐饮食对血压的影响[1,2]，临床研究表明，日均盐摄入量每增加100 mmol，收缩压可升高10.2 mmHg（1 mmHg=0.133kPa）。除了对血压的影响，盐可作为独立危险因素对靶器官造成损害[3,4]。高盐饮食可导致心肌肥厚，增加冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的发病风险，其对肾脏的影响亦不可小觑。Henry等学者发现高盐饮食可引发自发性高血压大鼠和WKY大鼠的肾纤维化，这些变化与转化生长因子-β1（TGF-β1）的过表达有关[5]。肾纤维化与高血压可互为因果，不予以控制将会导致恶性循环，除了限制盐摄入量，针对盐敏感性高血压的药物干预也极为重要。钙离子拮抗剂在治疗盐敏感性高血压及对靶器官的保护方面已得到广泛的证实，但其作用机制仍不明确。本研究目的是观察高盐饮食对自发性高血压大鼠血压、肾脏的影响，左旋氨氯地平干预的疗效及具体作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物分组16周龄自发性高血压大鼠30只[合格证号SCXK（京）2009-0004]，置于室温20～22℃、相对湿度40%饲养，颗粒饲料喂养[许可证号SYXK（鄂）2009-0049]，自由饮水。随机分为3组：正常盐组（含0.4%NaCl饲料喂养，n=10）、高盐组（含4%NaCl饲料喂养，n=10）、高盐+左旋氨氯地平干预组（含4%NaCl饲料喂养+左旋氨氯地平灌胃，n=10），左旋氨氯地平由吉林省天风制药有限公司提供，剂量为5 mg/（kg·d），每日定时灌胃一次，连续14周。

1.2 尾动脉收缩压测量标准尾部测压法测鼠尾动脉收缩压（BP 98-A Softron动物无创血压测量仪）。分别于实验前、实验第2、4、6、8、10、12、14周时测量血压。每只大鼠间隔3 min测量5次，记录血压变化＜6 mmHg的三次读数，取平均值作为大鼠血压值。

1.3 取材及肾脏指标检测大鼠16周时断头处死，取出双侧肾脏去除肾被膜后用生理盐水清洗干净，置于滤纸上吸干水分，用电子天平称重记录，计算双肾肥大指数。在滤纸上将肾脏沿长轴冠状切为三部分，将中间部分在生理盐水中漂洗后吸干迅速放入装有4%多聚甲醛的瓶中固定，石蜡切片后每组10只大鼠共取30张切片做HE染色、Masson染色及免疫组化检测TGF-β1、p-Smad2和Smad4含量。

1.4 统计学方法采用SPSS 18.0进行统计学分析，计量资料以（±s）表示，组内、组间比较采用重复测量的方差分析、单因素方差分析，两两比较方差齐使用LSD法，方差不齐使用Tamhane's T2法。P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 血压的变化各组大鼠基础尾动脉压相似。与正常盐组相比，高盐组收缩压第六周时明显升高（P＜0.05），持续到实验末，高盐+左旋氨氯地平干预组收缩压低于正常盐组和高盐组（P＜0.05）（图1）。

图1 自发性高血压大鼠尾动脉收缩压趋势图

2.2 双肾肥大指数16周时，与正常盐组相比，高盐组、高盐+左旋氨氯地平组的双肾肥大指数显著增高（P＜0.05），高盐组与高盐+氨氯地平组相比无统计学意义（表1）。

表1 SHR大鼠双肾肥大指数（n=20，±s）

表1 SHR大鼠双肾肥大指数（n=20，±s）

注：与高盐组相比，aP＜0.05；与高盐+氨氯地平组相比，b P＜0.05

分组 双肾重量/体重（mg/g）正常盐组 5.16±0.47高盐组 6.97±0.51a高盐+氨氯地平组 6.78±0.83b

2.3 肾组织HE染色肾脏组织HE染色切片可见，高盐组肾小球存在球囊粘连硬化，正常盐组、高盐+氨氯地平组未见球囊粘连（图2）。

图2 肾脏组织HE染色（×400）

2.4 Masson染色高盐组肾小管间质中存在明显的纤维化，高盐+氨氯地平组未见间质纤维化。（图3）。

图3 肾脏组织Masson染色（×200）

2.5 肾脏组织免疫组化检测TGF-β1表达通过免疫组化染色，TGF-β1定位于胞浆，阳性信号为棕黄色，高盐组TGF-β1的表达较正常盐组增多，高盐+氨氯地平组TGF-β1表达较另外两组减少（图4）。高盐组肾脏组织TGF-β1表达的平均光密度值（MOD）高于正常盐组（P＜0.05），高盐+氨氯地平组肾脏组织TGF-β1表达的MOD低于另外两组（P＜0.05）（表2）。

图4 肾脏组织TGF-β1表达（×200）

表2 SHR大鼠肾脏组织TGF-β1的表达比较（n=5，±s）

表2 SHR大鼠肾脏组织TGF-β1的表达比较（n=5，±s）

注：正常盐组与高盐组相比，aP＜0.05；正常盐组、高盐组与高盐+氨氯地平组相比，bP＜0.05

分组 TGF-β1（MOD）正常盐组 0.124±0.036高盐组 0.145±0.064a高盐+氨氯地平组 0.067±0.019b

3 讨论

原发性高血压的机制复杂，是遗传及环境因素等多因素共同作用的结果，摄盐量增加与高血压的发生、发展乃至靶器官的损害密切相关。而高血压靶器官损害对人群危害巨大，严重者可致死、致残，据统计在美国高血压合并肾损害的死亡率为10%，高血压肾病目前已成美国终末期肾衰的第二大病因，在我国高血压合并肾损害不在少数，我国高血压人群中盐敏感性高血压约占60%，据统计我国人群日常盐摄入量明显高于欧美国家，北方更甚，而2013年世界卫生组织发布了膳食盐及钾摄入新指南建议成年人每天摄入钠不应超过2000 mg，即不超过5 g盐。高盐饮食无疑会加剧肾脏等靶器官损害。因此，通过限盐及合理的药物治疗以降低血压减少靶器官的损害是高血压治疗的关键。

高血压肾损害的主要病理表现为系膜基质增生、肾小球硬化及间质纤维化。其中，组织纤维化与TGF-β高表达有确切关系。TGF-β是一类分泌型信号分子，它参与调节各种不同的细胞反应，包括增殖、分化、迁移和凋亡[6]。临床和实验证明TGF-β在肾脏疾病发展的过程中起着至关重要的作用，它可促进细胞外基质的合成分泌，抑制其降解，诱导肾间质的成纤维细胞聚集，是促进肾脏纤维化的关键因子[7,8]。在许多肾脏病患中可发现TGF-β沉积增加，组织和尿液中的TGF-β水平往往被作为肾脏疾病预后的检测指标。拮抗TGF-β信号可防止终末期肾脏疾病的肾损伤进一步发展[9]。TGF-β有三种同分异构体：TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3，其中TGF-β1在肾组织中含量最多。1998年就有学者发现正常肾脏过表达TGF-β1可导致纤维化[10]。TGF-β1刺激肾小球系膜细胞纤维化的通路是TGF-β1/smad。TGF-β信号从细胞膜表面传递至细胞核的机制中，smad2的磷酸化起着关键性作用，磷酸化后的smad2对smad4的亲和力增强，两者结合成复合物后转运到细胞核，在细胞核应答TGF-β的转录功能[11]。高盐饮食不仅使炎症因子水平增加，可导致TGF-β的高表达[12,13]，高盐可激活内皮细胞上的大电导钙依赖性钾通道（BKCa），该通道的激活可促进信号通过富含脯氨酸的酪氨酸激酶-2、c-Src、Akt（也被称为蛋白激酶B）和丝裂原活化蛋白激酶途径导致内皮产生TGF-β[14]，我们研究发现高盐组较正常盐组TGF-β表达增加。

氨氯地平是第三代钙离子拮抗剂，它的降压效果以及在靶器官保护方面的作用是肯定的，但是它对肾脏起保护作用的具体机制仍不十分明确。曾有学者通过实验证实，氨氯地平可通过其抗氧化、抗凋亡机制对抗阿霉素介导的肾毒性损害[15]。近年来，对氨氯地平的研究有了新的进展，Lai等研究发现氨氯地平可抑制自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞TGF-β1的表达从而起到抗增殖的作用[16]。不仅如此，还有研究表明氨氯地平血药浓度为10-4mol/L时可减少单核细胞TGF-β的分泌，从而抑制单核细胞增殖起到抗动脉粥样硬化的作用[17]。最近有学者通过细胞实验证明了氨氯地平可通过抑制TGF-β/smad信号通路中间物p-smad2和smad4的表达，进而抑制阿霉素对鼠肾小球系膜细胞产生的毒性作用[18]。我们的实验中亦观察到，氨氯地平干预后SHR大鼠肾脏纤维化程度减轻，同时TGF-β1表达下降。也有文献指出相较于氨氯地平单药治疗，与ACEI或ARB等药物联用，在降低炎症因子、降压及靶器官保护方面的获益更大[19]。

综上所述，高盐饮食与高血压及靶器官损害密切相关，高血压防治首先在于饮食习惯和生活方式的转变，在减少盐摄入的基础上，对于血压控制不达标的患者予以药物治疗，必要时可联合用药，最终目的是控制危险因素，保护靶器官。