中西药联用对实验性牙周炎大鼠的治疗作用

牛志英，彭 云

(1.郑州市口腔医院，河南 郑州 450000； 2.河南中医药大学第一附属医院, 河南 郑州 450000)

牙周炎是口腔科常见的感染性疾病，病程持续时间长，好发于成年人群，严重影响患者的日常工作和生活。临床上多以西药治疗为主，但效果并不理想。骨碱性磷酸酶[1-2](bone alkaline phosphatase, BALP)是成熟期骨形成的中期指标，反映骨形成的速率。骨形态发生蛋白2[3-4](bone morphogenetic protein-2,BMP-2)、骨形态发生蛋白4[5](bone morphogenetic protein-4,BMP-4)可以促进骨形成，在破坏骨组织修复过程中起重要作用。本研究建立大鼠牙周炎动物模型，以中药自拟方联合西药同时治疗，通过对大鼠牙周炎临床症状及血液指标，以及外周血中BALP、BMP-2、BMP-4的含量测定考察中西药联用对牙周炎大鼠的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 动 物

健康SD雄性大鼠48只，SPF级，体质量180～220 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0006。饲养于IVC动物房，自由饮食水，适应性饲养 3 d后开始造模。

1.2 药品、试剂与仪器

中药自拟方由青皮、荆芥、防风、黄芩、桔梗、连翘、生地黄、升麻、生石膏、甘草、皂角刺、蒲公英、细辛组成。青皮(批号1805221)、荆芥(批号1803281)、防风(批号1803025)、黄芩(批号1805312)、桔梗(批号1808012)、连翘(批号1806111)、生地黄(批号1802201)、升麻(批号1806193)、生石膏(批号1801081)、甘草(批号1804052)、皂角刺(批号1805253)、蒲公英(批号1807122)、细辛(批号1806224)，均购自河南省中医药研究院附属医院中药房，由安徽普仁中药饮片有限公司生产，经检验均符合2015版《中国人民共和国药典》一部质量标准，水煎浓缩，4 ℃保存，备用。替硝唑片，东北制药集团沈阳第一制药厂产品，批号1804032；罗红霉素片，石药集团欧意药业有限公司产品，批号385180855。根据人与大鼠体表面积折算系数，大鼠给药剂量为中药自拟方(15 g/kg)、替硝唑片(100 μg/g)、罗红霉素片(31 μg/g)。XFA6130型动物血液细胞分析仪，南京普朗医疗设备有限公司产品；JS15-01电子天平，上海蒲春计量仪器有限公司产品。BALP、BMP-2、BMP-4试剂盒，上海拜力生物科技有限公司产品。

1.3 动物模型的建立

取10只大鼠作为正常对照组，常规饮食。其余38只大鼠以质量分数为100 g/L的水合氯醛腹腔注射麻醉，于鼠板上固定，参照文献方法[6]，使用正畸结扎丝对大鼠双侧上颌部第二磨牙结扎，术后喂养自制高糖饲料、0.2 g/mL糖水建立大鼠牙周炎动物模型。正常对照组常规饮食。

4周后随机抽取8只大鼠观察牙周，可见结扎部位牙龈红肿明显，周围附着食物残渣，触之易出血；牙周组织HE染色，电镜下观察到牙龈上皮组织内出现大量炎性细胞，已形成牙周袋，表明造模成功。造模成功后，造模大鼠的饮食改为常规饮食。将造模成功的大鼠麻醉后取出结扎丝，随机分为模型对照组、西药组和中西药组3组，每组10只。西药组给予替硝唑片(100 μg/g)+罗红霉素片(31 μg/g)；中西药组给予替硝唑片(100 μg/g)+罗红霉素片(31 μg/g)+中药自拟方水煎液(15 g/kg)；正常对照组和模型对照组给予同体积的纯化水。均灌胃给药，1 d 1 次，连续 7 d。

1.4 检测指标

给药期间观察各组大鼠的精神行为活动、饮食、饮水等一般情况，参照文献方法[7]检测牙龈出血指数、菌斑指数和探诊深度。末次给药后 1 h，经腹主动脉取血，采用全自动血球计数仪分析大鼠血常规，酶联免疫吸附法测定血清中BALP、BMP-2、BMP-4的含量。

1.5 统计学方法

2 结 果

2.1 各组一般情况对比

造模3 d后，大鼠食欲减退，精神萎靡，少动倦怠，毛发无光泽，牙龈红肿。随着造模时间延长，上述症状逐渐加重。造模结束时，大鼠牙龈组织红肿明显，触之易出血，形成牙周袋。给药后大鼠食欲增加、活动增多，牙龈逐渐恢复。中西药组大鼠牙龈红肿明显减退，几乎未见牙周袋；模型对照组牙龈红肿，未见明显好转；正常对照组大鼠一切正常。由表1可知：与模型对照组对比，中西药组大鼠治疗后体质量明显增加(P<0.01)。与西药组对比，中西药组大鼠体质量明显增加，差别有统计学意义(P<0.05)。由表2可知：与模型对照组对比，中西药组与西药组的牙龈出血指数均降低，差别有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；中西药组菌斑指数降低，差别有统计学意义意义(P<0.01)，西药组无差别。与西药组对比，中西药组探诊深度降低，差别有统计学意义(P<0.01)。

表1各组大鼠不同时期体质量对比

组 别造模前/g造模后/g治疗后/g正常对照组194.1±5.38244.8±25.70265.9±24.30模型对照组192.0±3.74201.5±10.15**210.4±13.21**西药组195.3±6.12199.6±13.26**218.1±21.74**中西药组194.0±4.85203.5±12.38**241.0±25.40##△

注：与正常对照组对比，**P<0.01；与模型对照组对比，##P<0.01 ；与西药组对比，△P<0.05

表2各组大鼠牙周炎临床指标对比

组 别牙龈出血指数菌斑指数探诊深度/mm正常对照组0 0.27±0.110.02±0.01 模型对照组2.36±0.281.84±0.22**1.39±0.21**西药组1.04±0.19#1.16±0.09**1.25±0.16**#中西药组0.91±0.25##1.02±0.14**##1.13±0.15**##△△

注：与正常对照组对比，**P<0.01；与模型对照组对比，#P<0.05，##P<0.01 ；与西药组对比，△△P<0.01

2.2 各组大鼠血常规指标对比

与模型对照组对比，中西药组大鼠血白细胞计数、中心粒细胞计数降低，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与西药组对比，中西药组的白细胞计数、中心粒细胞计数降低，差别有统计学意义(P<0.05)；红细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量对比，差别无统计学意义。见表3。

表3各组大鼠血常规指标对比

组 别红细胞计数/(×1012·L-1)白细胞计数/(×109·L-1)中性粒细胞计数/%血小板计数/(×109·L-1)血红蛋白/(g·L-1)正常对照组6.50±0.4114.21±1.476.29±1.24192.50±61.34141.06±14.70模型对照组7.13±0.2518.36±1.34**9.54±2.80**216.74±41.31155.31±12.46西药组6.94±0.7616.52±1.52**##7.72±2.12**#200.83±30.26152.65±10.38中西药组7.01±0.2015.08±1.55##△6.63±1.61##△198.04±24.59154.27±13.29

注：与正常对照组对比，**P<0.01；与模型对照组对比，##P<0.01；与西药组对比，△P<0.05

2.3 各组大鼠血清BALP、BMP-2、BMP-4含量对比

与正常对照组对比，西药组和中西药组大鼠的血清BALP、BMP-2、BMP-4含量升高，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组对比，西药组仅BMP-2差别有统计学意义(P<0.05)；中西药组3项指标均呈现显著性差异(P<0.05或P<0.01)。与西药组对比，中西药组BALP、BMP-2的含量明显较高，差别有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4各组大鼠血清BALP、BMP-2、BMP-4含量对比

组 别BALPBMP-2BMP-4正常对照组39.05±7.257.31±0.8571.95±5.23模型对照组46.26±5.33*9.59±1.33**72.81±4.25西药组52.14±5.20**#10.86±1.25**#77.68±6.34*中西药组58.11±5.86**##△12.31±1.63**##△78.22±5.48*#

注：与正常对照组对比，*P<0.05，**P<0.01；与模型对照组对比，#P<0.05，##P<0.01； 与西药组对比，△P<0.05

3 讨 论

牙周炎是一种慢性炎症，主要临床表现为牙龈红肿、出血。若未及时治疗会出现溃疡，牙齿松动，甚至脱落，严重影响正常进食。罗礼君等[8]运用益肾清火方治疗牙周炎大鼠3个月，发现中药组血清中IL-1β的含量明显下降，与模型组对比差别有统计学意义。刘丽等[1]研究甘草液对牙周炎大鼠的治疗机制，发现甘草液能够促进破坏骨组织中BALP和BMP-4的表达，从而具有一定的治疗效果。另有研究[9-10]发现，中药黄芩除能降低血液中白细胞、中性粒细胞的水平外，还能提高牙周组织和血清中BMP-2的的含量，加速坏损牙周组织的修复和再生。

本研究采用中西药联用治疗实验性牙周炎大鼠，结果表明中西药组无论是牙周组织恢复情况还是血液指标的含量均优于西药组。此为牙周炎临床新药的研发提供了新的思路。