肿瘤坏死因子-α 、白介素-10 及肿瘤坏死因子α诱导蛋白-2在母胎免疫调节中作用的研究

贾亦鸿 王丽丽 赵 敏

1.山西省晋中市榆次区妇幼保健院(030600 )2.山西医科大学研究生学院;3.山西省妇幼保健院

研究显示，母胎界面Thl型细胞/Th2型细胞(Th1/Th2)的平衡与妊娠结局关系密切[1-3]。本研究通过测定复发性流产(RSA)妇女和正常妊娠妇女胎盘绒毛组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白-2(TIPE2)的表达，探讨其在母胎免疫调节中的作用。

1 对象与方法

1.1 对象

选择2017年9月-2018年8月本院收治的RSA稽留流产患者30例为病例组，均经详细询问病史及系统检查，排除染色体异常、感染性疾病及内分泌、遗传、 解剖、自身免疫等方面的异常。选择同期就诊要求终止妊娠的33例正常健康早孕妇女作为对照组，既往无不良孕史，本次妊娠期间无腹痛、阴道流血等先兆流产的症状和体征，经超声证实胚胎发育正常，因故放弃妊娠。两组均行负压吸引术终止妊娠。本研究通过山西省妇幼保健院医学伦理委员会批准，标本的收集均经本人及家属知情同意并签字。

1.2 样本收集和处理

收集两组负压吸引术后的绒毛组织，经无菌生理盐水洗涤至表面无明显的血迹后，置10%中性甲醛溶液中固定，乙醇脱水，常规石蜡包埋及切片，贴附于三氨丙基二乙氧甲硅烷( APES)处理的载玻片上，4℃保存备用。

1.3 检测方法

石蜡标本4mm连续切片，经65℃烤箱中过夜，脱蜡，水化，柠檬酸盐缓冲液抗原修复，滴加一抗湿盒4℃过夜，PBS冲洗3次，滴加二抗，DAB显色，苏木素复染，脱水，透明及中性树脂封片，显微镜下观察显色结果。

1.4 结果判定

阳性细胞染色定位于细胞胞浆，呈棕黄色。采用双盲法观察染色强度：不着色为阴性(-)；淡棕黄色及深棕黄色为阳性(+) 。

1.5 统计学方法

采用SPSS23.0统计软件。计数资料比较用χ2检验，相关性分析用Spearman相关分析法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

两组对象均为单胎，年龄、孕产次及妊娠时间差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组对象一般情况比较

2.2 绒毛组织中TNF-α、IL-10、TIPE2的表达

病例组绒毛组织中TNF-α的阳性表达比率高于对照组，IL-10、TIPE2的阳性表达比率低于对照组(增P<0.05)。见表2。

表2 两组绒毛组织中TNF-α、IL-10、TIPE2表达比较[例(%)]

2.3 绒毛组织中TIPE2与TNF-α、IL-10相关性

采用Spearman相关分析，病例组中TIPE2与TNF-α呈负相关(r=-0.725，P<0.05)，与IL-10呈正相关(r=0.915，P<0.05)。对照组中TIPE2 与TNF-α、IL-10均无相关性(r=0.032，P>0.05；r=0.186，P>0.05)。

3 讨论

随着免疫学的迅速发展，RSA的免疫学病因日益受到重视。正常妊娠中，胚胎的绒毛外滋养细胞具有极强的侵袭能力，能够通过水解细胞外基质及基底膜侵入子宫蜕膜，进而使胚胎顺利植入[4]。当母胎界面免疫耐受无法顺利建立、母体免疫应答对胚胎产生排斥时，多种细胞因子能够攻击胚胎的绒毛外滋养细胞，促进细胞发生凋亡和损伤[5]。Thl型细胞分泌TNF-α等，Th2型细胞则分泌IL-10等，正常情况下，Th1与Th2动态平衡，两者通过负反馈调节，相互影响及制约，但Th1型细胞因子增高不利于妊娠的维持，母体对胎儿的识别及妊娠的维持主要是通过占优势的Th2型细胞因子实现[6]。Wegmann等[7]发现，正常妊娠是以Th2型细胞因子为主的生理现象。Rezaei等[8]也发现RSA组血清中TNF-α水平明显高于正常早孕组，并认为Th1型细胞因子的表达水平升高可被看作预测妊娠结局的指标。董瑞英等[9]等研究证实，RSA患者经被动或主动免疫治疗后，Th2型细胞因子表达水平明显提高，Th1型细胞因子表达水平下调，促进Th1/Th2平衡向Th2型细胞因子转换，自然杀伤细胞(NK)活性下降，诱导免疫耐受，有助于RSA患者妊娠成功。杨华等[10]认为 Th1型细胞因子占优势不利于受精卵着床及胎儿存活。Yuan等[11]研究发现，RSA患者 Th1/Th2比值显著增大。赵英等[12]研究结果显示，RSA患者外周血Th1/Th2比值向Th1偏移，蜕膜组织中细胞凋亡加重，进而造成RSA。本研究结果显示，病例组绒毛组织中TNF-α高于对照组、IL-10低于对照组，与以往研究结果一致，母-胎界面的免疫耐受的关键在于Th1与Th2型因子之间动态平衡，Th1与Th2型细胞因子的动态平衡被打破，可能导致病理妊娠的发生。

TIPE2是2002年由孙宏宏等发现的一种基因[13], 在炎症和维持免疫稳态方面具有负调节作用。 TIPE2可促进M2型巨噬细胞分化[14]，并在调节性Treg细胞(T细胞)的免疫抑制功能中发挥重要作用[15]。因此，通过促进M2巨噬细胞的分化，TIPE2可能在支持妊娠中发挥重要作用。 本研究结果显示病例组绒毛组织中TNF-α表达高于对照组，IL-10及TIPE2的表达低于对照组，TIPE2和IL-10呈正相关，TIPE2和TNF-α之间呈负相关，而对照组绒毛组织中TIPE2与TNF-α、IL-10无相关性。TIPE2可能与母胎界面Th1/Th2平衡有关，从而导致RSA的发生。