胎盘组织中KiSS-1及Bcl-2表达与重度子痫前期及围生结局关系

张安红 徐桂琴 张文琴 孙 博

南京医科大学附属江宁医院(211100)

子痫前期为孕妇常见的严重并发症之一，其发生机制尚未明确，可能与多种因素共同作用有关[1]。近年来研究发现肿瘤转移抑制基因-1(KISS-1)和B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)与子痫前期的发生可能相关。为观察胎盘组织中KISS-1、bcl-2表达水平与重度子痫前期及围生结局的相关性，开展了本次研究，为妊娠期高血压疾病的预防和治疗开辟新思路。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选择2017年1月-2018年6月本院收治的行剖宫产的重度子痫前期患者60例为观察组，同期收治的正常晚期妊娠行剖宫产孕妇30例为对照组。观察组纳入标准[2]：①符合人民卫生出版社《妇产科学》第8版中相关重度子痫前期的诊断标准；②妊娠前无高血压、肾病病史；③单胎。排除标准[3]：①轻度子痫前期或子痫的患者。②既往有高血压、肾病病史。对照组纳入标准：①孕38～42周；②无任何合并症和并发症；③胎儿正常发育；④单胎妊娠。排除标准：①既往有不良妊娠史。②有原发性高血压、糖尿病、慢性肾炎等疾病病史。本研究经医院伦理委员会批准，两组孕妇均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1标本收集和处理剖宫产术中收集胎盘标本，选择两块重量3g母体面胎盘组织，剪膜和漂洗，将一块-80℃收集蛋白和RNA；另一块胎盘制作成1.5cm×2cm×3cm组织，放入10%中性甲醛溶液8～24h后取出，制作成蜡块，-20℃中，行RT - PCR、Western blot、免疫组化方法检测。

1.2.2阳性结果判定标准KiSS-1:使用0.1M PBS缓冲液代替一抗作为空白对照，标本细胞浆着色呈黄色，复染后细胞核呈蓝色为阳性。bcl-2：染色后细胞浆为浅黄色、棕黄色、棕褐色为阳性结果。

1.2.3研究指标比较两组KiSS-1及Bcl-2在RT-PCR检测中与β-actin的相对吸光度比值，以及KiSS-1及Bcl-2免疫组化的平均光密度和阳性率；分析两组围产儿结局，包括新生儿体重，Apgar评分，胎儿宫内窘迫，胎儿宫内生长受限，新生儿窒息，早产儿，低出生体重儿，围产儿死亡等。使用Pearson统计方法分析KiSS-1及Bcl-2表达水平与新生儿窒息、新生儿体重、Apgar评分等围生结局关系。

1.3 统计分析

2 结果

2.1 一般情况

观察组年龄(27.4±4.5)岁(22～41岁)，孕(1.5±0.3)次(1～4次)，产(0.7±0.2)次(0～2次)。对照组年龄(27.8±4.7)岁(22～42岁)，孕(1.5±0.3)次(1～4次)，产(0.8±0.2)次(0～2次)。两组比较未见差异(P>0.05)。

2.2 两组KiSS-1及Bcl-2表达水平比较

观察组KISS-1/β-actin、Bcl-2/β-actin的相对吸光度均高于对照组， KiSS-1及Bcl-2的阳性表达率高于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 两组KiSS-1及Bcl-2表达比较

2.3 两组孕产结局比较

观察组发生胎儿宫内窘迫、宫内生长受限、新生儿窒息、早产儿、低出生体重儿比例高于对照组(P<0.05)，围产儿死亡率两组无差异(P>0.05)；新生儿体重和Apgar评分低于对照组(P=0.000)见表2。

表2 两组孕产结局比较

2.4 KiSS-1及Bcl-2表达水平与围生结局相关性

Pearson统计分析,KiSS-1及Bcl-2表达水平与新生儿窒息、新生儿体重、Apgar评分均呈负相关(P<0.05)，见表3。

表3 KiSS-1及Bcl-2表达水平与围生结局相关性

3 讨论

子痫前期的发生与多种因素有关[4]，其特征性病理生理变化包括滋养细胞异常分化造成胎盘浅着床和血管内皮损伤，重铸螺旋动脉失败以及严重的炎性反应的发生，最主要原因被认为是胎盘缺陷[5]。子宫基质和血管受到滋养层细胞的滋润，进而为胎盘提供养分和血液，使胎盘能够顺利的发育[6]。目前对于造成子痫前期发生滋养细胞侵蚀水平降低的原因还没有统一结论，但是子宫壁能够被滋养层有效滋养，这个能力的神奇之处和肿瘤颇为相似。

作为一种新型的抑制肿瘤转移的基因，KiSS-1不仅能为妊娠期滋养细胞提供滋养能力和促进滋养行为发生，更是胎盘形成发育过程中必不可少的一种基因，任何与滋养细胞浸润异常的相关性疾病都和KiSS-1有关。Horikoshi等[7]研究表明人类胎盘组织滋养细胞可使KiSS-1表达，且在不同妊娠周期和孕周中表达不同，孕周越大在绒毛组织中表达越明显，因此认为KiSS-1基因可能参与孕早期滋养细胞侵润的调控。Bcl- 2作为一种线粒体膜蛋白，有抑制和调节细胞凋亡作用，能够对各种因子导致的细胞凋亡产生抑制作用，增加细胞的存活时间，是一种十分关键的调节性因子，在很多生理以及病理凋亡中起重要作用。Bcl- 2对线粒体释放Cytc有抑制作用，且能够使诱导因子凋亡，对Caspase- 3激活与合成起到抑制作用，两者呈负相关性。这种平衡一旦被打破，则滋养细胞就会出现过度凋亡，进而造成迁移入蜕膜和侵袭子宫肌层螺旋动脉减少, 增加子宫胎盘阻力, 造成胎盘和胎儿缺血缺氧，导致血压升高、蛋白尿等相关临床症状[8]。

本研究中观察组KISS-1/β-actin、Bcl-2/β-actin的相对吸光度及KiSS-1及Bcl-2阳性表达率均高于对照组，说明胎盘组织中的KISS-1及Bcl-2表达水平与重度子痫前期密切相关，可能参与了重度子痫前期的发生发展过程[9-11]。观察组发生胎儿宫内窘迫、宫内生长受限、新生儿窒息、早产儿、低出生体重儿比例高于对照组，说明重度子痫前期对围生结局有影响作用,与张君娜等结果一致[12]。新生儿体重和Apgar评分低于对照组，KiSS-1及Bcl-2表达水平与新生儿窒息、新生儿体重、Apgar评分均呈负相关，说明KiSS-1及Bcl-2的降低可能与不良围生结局相关[13]。

综上所述，胎盘组织中KiSS-1及Bcl-2表达水平与重度子痫前期及围生结局密切相关，通过对KiSS-1及Bcl-2表达水平的研究能够为妊娠期高血压疾病的预防和治疗开辟新途径，同时对降低孕产妇和围生儿的病死率有极其重要的意义。