无创DNA检测在诊断高龄孕妇胎儿非整倍体中的应用

陈梅连 邹晓红 胡利辉

（肇庆市高要区人民医院 广东 肇庆 526040）

随着计划生育政策的改革调整，高龄孕妇数量也在逐年增加，医学研究证实，随着孕妇年龄的增长，胎儿出生缺陷和发育异常风险也会增加。所以，加强出生缺陷检测和产前检查，对于人口素质的提高具有重要意义。无创DNA产前检测(NIPT)是一种安全性较高的无创侵入性产前检查方法。本研究对无创DNA检测在诊断高龄孕妇胎儿非整倍体中的应用价值进行了分析。

1.资料和方法

1.1 一般资料

本研究选择分析我院产科2015年1月-2018年10月接受产前检查2460例产妇的医疗档案，孕周12～26周，平均（20.5±4.2）周，年龄35～39岁孕妇2350例，年龄40岁以上孕妇110例。

表 羊水染色体核型和NIPT结果分析

1.2 方法

第一，NIPT检测方法。在无菌条件下抽取10ml外周血，置于EDTA抗凝管中，离心处理后提取血浆，游离出血浆中的DNA，PCR扩增后形成待分析文库，通过高通量测序方法实施覆盖度测序，并应用生物信息学分析技术对胎儿染色体非整倍体异常的患病风险进行计算，常见异常包括性染色体异常、13-三体、18-三体、21-三体等。对于低风险检测结果的孕妇，通过电话随访了解胎儿出生后生长发育情况，对结果假阴性情况进行验证。若孕妇NIPT检测结果证实为高风险，则可在获得孕妇认可后实施羊水穿刺，并作出准确判断。

第二，羊水细胞染色体核型分析。针对于NIPT检测结果为高风险的孕妇，超声监测下在云18～24周时实施羊膜腔穿刺手术，抽取20ml羊水样本，实验室培养，确定细胞分裂最旺盛时收获细胞，常规制备染色体实施G显带后核型分析，全部样本均进行50个分裂相计数，确定出2个完整的核型。

第三，观察指标和诊断标准。染色体异常的阳性诊断标准为羊水细胞染色体核型分析结果，NIPT检测为阳性的孕妇均接受电话随访，确定胎儿围生期临床表现，并以此为阴性诊断标准，对NIPT检测方法的阳性预测值、阴性预测值、特异度和敏感度进行计算。通常情况下，青春期前无法准确判断出性染色体异常情况，因而本研究不对孕妇的特异度和敏感度等指标进行检测。

1.3 统计学分析

数据采用SPSS20.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

NIPT检测结果证实，性染色体高风险患者42例，其中，实施羊膜腔穿刺术治疗患者34例，拒绝羊水穿刺而继续妊娠患者8例，最终失访。共有4例21-三体高风险患者不愿接受侵入性产前诊断性检查，其中，直接引产患者2例，接受孕24周系统超声检查，并确诊为多发性畸形患者2例，并实施引产术终止妊娠。同时，NIPT检测证实共有2418例患者检查结果为阴性，并接受电话随访，结果证实孕妇均顺利分娩，新生儿保健检查证实无表型异常。NIPT检测结果与金标准羊水染色体核型分析比较证实，高龄孕妇胎儿非整倍体检查，阴性预测值为100.00%，阳性预测值为90.91%，特异度为99.93%，敏感度为100.00%。见表。

3.讨论

产前筛查与诊断是目前临床上最为常用的胎儿唐氏综合征检查和诊断方法，且产前检查的主要目标也在于胎儿非整倍体情况的早期检查和干预，以往临床使用的超声影像学检查和血清学筛查方法存在假阳性率过高以及敏感性不足的问题，因而临床应用价值不足[1]。随着计划生育正常的改革和调整，高龄孕妇数量也逐渐增加，由此所导致的孕育异常核型胎儿问题逐渐凸显。高龄妊娠是胎儿非整倍体问题产前检查的主要指征，然而，高龄孕妇通常胎儿来之不易更加珍惜，因而对于羊水穿刺这种侵入性检查存在疑虑，害怕出现感染或是流产等问题，这就大大降低了孕妇及家属对于产前诊断的依从性[2]。产前检查常用有创性操作包括脐血细胞、羊水和绒毛培养的核型分析检查，这也是非整倍体染色体疾病产前诊断的金标准，然而，侵入性检查也存在一定阴道流产风险，这就会大大增加孕妇及其家属的心理负担[3]。

无创DNA产前检测是一种较为准确可靠的产前筛查技术，能够对21-三体综合征、18-三体综合征和13-三体综合征等进行相对准确的判断，因而更加适用于高龄孕妇和产前高风险筛查，结合无创DNA检测结果对是否需要产前介入性诊断进行分析[4-5]。尽管无创DNA检测属于一种非诊断性检查方式，其阳性结果仍然需要深入的有创性诊断加以验证，且对于染色平衡易位的检出率较低，无法准确判断染色体结构异常问题，但是，这一检查方法具有更高的准确性，能够有效避免产前穿刺问题，减少有创检查导致流产、胎儿宫内感染的发生风险，具有假阳性率低、更加准确、检测时间更早和安全性更高的优势[6-7]。

综上所述，无创DNA检测是一种安全、可靠、快速的高龄孕妇胎儿非整倍体检测方法，有助于降低新生儿缺陷率，因而推广应用价值较高。