IL-6启动子-572C/G和-597G/A基因多态性与2型糖尿病下肢血管病变的关系

王艾云

天津市北辰区中医医院 300400

下肢血管病变(Vascular disease of lower extremity，VDLE)是T2DM患者较为常见的一种合并症，往往会引起肢端坏疽症状的发生，对患者的生活质量产生较大的影响。目前，临床上关于T2DM合并VDLE的发病机制尚未完全明晰。相关文献报道称[1]：该病可能是与机体免疫功能异常存在一定的关联性，属于一种因自身免疫系统紊乱而导致的一种炎性反应。当血管内皮细胞受到损伤时，机体相关炎性因子如IL-6的表达水平以及活性显著增高。IL-6是介导免疫反应以及炎性反应的一种十分重要的递质，可引起多种细胞发生增殖反应。而遗传因子如启动子基因的多态性能够显著提高IL-6的表达水平以及活性，可能是T2DM合并VDLE发病的一个十分重要的影响因素[2]。本研究主要探讨了IL-6启动子-572C/G和-597G/A基因多态性与T2DM合并VDLE发病之间的相关关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年8月—2018年8月于我院接受诊疗的190例T2DM患者作为观察对象，均为汉族患者，且相互之间无亲缘或者血缘关系。男女比例为90∶100；年龄为43～69岁，平均年龄(57.29±6.56)岁；BMI范围为20～28，平均BMI 24.38±2.12。VDLE诊断标准为：经血管彩色多普勒超声诊断，动脉内膜厚度增加在1mm以上，血管管壁欠光滑或者粗糙，存在血管管腔狭窄或者闭塞。将本组入选对象分为合并VDLE组(n=99)与未合并VDLE组(n=91)。另外选择同期于我院参加体检的85名健康者作为对照组。上述3组入选对象在性别及年龄方面的差异均无统计学意义。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA提取方法:上述3组入选对象均于晨起空腹状态下抽取肘静脉血3.0ml，采用EDTA进行抗凝，于-80℃的冰箱中进行保存，将外周血基因组DNA进行提取，采用分光光度仪对光度值进行测定，据此对DNA纯度以及浓度水平进行计算。

1.2.2 基因分析方法:将限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法(Restriction fragment length polymorphism polymerase chain reaction，PCR-RFLP)对IL-6启动子区-572C/G与-597G/A基因多态性进行测定分析。引物序列见表1。

表1IL-6启动子区-572C/G与-597G/A基因多态性引物序列

PCR反应体系：采用体积为2.5μl的10×PCR缓冲液，4.0μl的浓度为10mmol/L的dNTP，取上、下游引物各为1.0μl，1.0μl的模板DNA，0.2μl的浓度为5U/μl的Taq DNA酶，然后加水至25μl。具体条件为：94℃温度条件下预变性时间为5min，变性时间为40s，58℃退火时间为1min，35次循环之后72℃条件下延伸5min。PCR产物采用质量水平为1.5%的琼脂糖凝胶电泳鉴定之后，采取限制性内切酶BsrB I于37℃条件下消化约120min，再使用浓度为2%的TBE琼脂糖进行电泳试验(见图1、2)，采用紫外凝胶成像分析仪对上述PCR结果进行仔细观察。

图1IL-6启动子-572C/G的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果示意图

注：1、2、3、4道分别代表DL2000 DNA标记物、基因型C/C、G/C以及G/G。

1.3 观察指标 比较合并VDLE组、未合并VDLE组以及对照组IL-6启动子-572C/G与-597G/A的基因型及等位基因频率分布情况；IL-6启动子-572C/G与-597G/A基因电泳试验结果。

图2IL-6启动子-597G/A的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果示意图

注：1、2、3、4道分别代表DL2000 DNA标记物、基因型G/G、G/A以及A/A。

2 结果

2.1 3组入选对象IL-6启动子-572C/G的基因型及等位基因频率分布情况对比 合并VDLE组CG、GG、G频率均显著高于未合并VDLE组与对照组(P均<0.05)，见表2。

表23组入选对象IL-6启动子-572C/G的基因型及等位基因频率分布情况比较[n(%)]

注：aP<0.05，VS对照组；bP<0.05，VS未合并VDLE组。

2.2 3组入选对象IL-6启动子-597G/A的基因型及等位基因频率分布情况对比 合并VDLE组GA、AA、A频率均显著低于未合并VDLE组与对照组(P均<0.05)，见表3。

表33组入选对象IL-6启动子-597G/A的基因型及等位基因频率分布情况比较[n(%)]

注：aP<0.05，VS对照组；bP<0.05，VS未合并VDLE组。

3 讨论

相关文献报道称：自身免疫性炎症与T2DM大血管病变存在密切的关联性，也有学者认为[3]：糖尿病及其大血管合并症是自身免疫所介导的炎性疾病。某些重要的炎性因子及其免疫标志物，如IL-6等因子均可能与糖尿病大血管合并症存在紧密的关联性。IL-6属于一种功能多元化的细胞因子，其在免疫系统、造血系统及神经系统之中均存在着十分重要作用，该指标水平上升也是导致糖尿病发病的一个高危因素。当前，临床上关于IL-6与糖尿病大血管病变的研究主要集中于心脑血管病变方面，而IL-6与T2DM合并VDLE之间的相关关系方面的研究则非常少。相关文献资料报道称[4-5]：IL-6启动子-572C/G与-597G/A基因多态性与动脉阻塞性肺疾病呈现出明显关联性。虽然T2DM合并VDLE的发病机理与粥样硬化性病变比较接近，然而其机制更加复杂。因此，探讨IL-6启动子-572C/G与-597G/A基因多态性与T2DM合并VDLE之间相关关系，具有较高临床价值。

本文结果显示：合并VDLE组CG、GG、G频率均显著高于未合并VDLE组与对照组(P均<0.05)，合并VDLE组GA、AA、A频率均显著低于未合并VDLE组与对照组(P均<0.05)。出现上述结果，主要原因在于：IL-6作为一个常见的炎性因子，它在基因水平的单核苷酸多态性与T2DM合并VDLE提供全新的治疗对策。上述结果提示：基于传统治疗，还应该开展相应的抗炎以及抗免疫治疗。随着临床上对糖尿病地不断深化认识，笔者发现血糖水平控制理想并不能减少或延缓合并症的出现，特别是大血管合并症。而越来越多的证据显示：自身免疫功能紊乱以及长期的慢性炎症在糖尿病及其合并症的进展过程中扮演着非常重要的角色。从免疫学的角度来探讨糖尿病及其并发症的发病机制，是今后研究的一个重点方向和焦点。

综上所述，IL-6启动子-572C/G和-597G/A基因多态性与T2DM合并VDLE发病之间存在紧密的相关性，可能参与T2DM及其并发症的发生发展过程。