胃癌组织中AKT1与STMN1表达的关系及其临床意义

马子涵，贾西云，徐 倩，陈发帅，彭方慧，巴 楠，张自森

(1.郑州大学第五附属医院肿瘤内科，河南 郑州 450052；2.新乡医学院第一附属医院普通外科，河南 卫辉 453100)

胃癌是我国常见恶性肿瘤，发病率居第2位[1]，是一种多基因参与的异质性疾病。蛋白激酶B(AKT)呈癌基因特性，本课题组前期研究[2-3]中发现，AKT参与了胃癌细胞增殖和化疗敏感性调节。微管不稳定蛋白STMN1也呈癌基因特性，其高表达可促进肿瘤细胞增殖和侵袭，与胃癌化疗耐药和不良预后相关[4]。AKT和STMN1在肿瘤细胞信号传导机制中密切相关，AKT1/STMN1信号通路的异常激活促进肿瘤细胞增殖与耐药[5-6]，STMN1基因沉默也可通过AKT1信号通路抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭[7]。然而，AKT1和STMN1在胃癌发生中的关系及其临床意义并不明确。本文通过检测42例胃癌及其对应癌旁组织中AKT1与STMN1表达，分析两者之间的相关性及与临床病理学参数的关系，为进一步探讨两者在胃癌诊断和治疗中的应用价值提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2015年6月至2018年5月于郑州大学第五附属医院行胃癌根治术的42例胃癌患者的石蜡包埋胃癌组织及其对应癌旁组织标本，癌旁组织距离肿瘤组织边缘均>5 cm，所有患者均经组织病理学证实为腺癌，术前未进行放、化疗。42例患者中，男34例，女8例，年龄42～81岁，中位年龄65岁。本研究经郑州大学第五附属医院医学伦理委员会审查同意。

1.2 免疫组化染色方法组织标本经常规甲醛固定、脱水、石蜡包埋等处理，切片、脱蜡后用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，以已知阳性标本作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照，实验步骤按照S-P免疫组化试剂盒说明书进行，最后用罗氏全自动免疫组织化学染色仪检测AKT1和STMN1表达。其中AKT1(75692)抗体购自美国Cell Signaling Technology公司，STMN1(11157-1-AP)抗体购自武汉三鹰生物技术公司。

1.3 免疫组化染色判断标准AKT1以细胞核或细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性表达，STMN1以细胞质内出现棕色至棕黄色颗粒为阳性表达。观察阳性细胞百分比及染色强度，计数阳性细胞百分比(阴性为0分，1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分)，评判阳性细胞染色强度(无阳性染色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色为3分)。最终结果以阳性细胞百分比及染色强度评分相乘进行评估，>6分为阳性表达，≤6分为阴性表达。

1.4 统计学处理采用SPSS 22.0进行统计分析，计数资料用百分数表示，组间比较用χ2检验或Fisher确切概率法，AKT1、STMN1相关性分析用Spearman等级相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 AKT1、STMN1在胃癌组织及其对应癌旁组织中的表达胃癌组织中AKT1阳性表达率61.90%(26/42)，高于癌旁组织的23.81%(10/42)，差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中STMN1阳性表达率35.71%(15/42)，高于癌旁组织的7.14%(3/42)，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、2。

表1 AKT1在胃癌及其对应癌旁组织中的表达 n(%)

表2 STMN1在胃癌及其对应癌旁组织中的表达 n(%)

2.2 胃癌组织中AKT1、STMN1阳性表达与临床病理学参数的关系胃癌组织中AKT1阳性表达与TNM分期、T期有关(P均<0.05)，而与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移无关(P均>0.05)。胃癌组织STMN1阳性表达与肿瘤部位有关(P<0.05)，而与性别、年龄、TNM分期、T期及淋巴结转移无关(P均>0.05)。见表4。

2.3 胃癌组织中AKT1与STMN1表达的相关性胃癌组织中AKT1与STMN1的表达呈正相关(r=0.380，P<0.05)。见表3。

3 讨论

胃癌发病率高，早期诊断难度大，多数患者确诊时已是中晚期，丧失了根治机会。充分了解胃癌发生、发展的分子机制对实现胃癌的精准诊断、精准治疗及改善预后具有重要意义[8]。

表3 胃癌组织中AKT1、STMN1阳性表达与临床病理学参数的关系

表4 AKT1和STMN1在胃癌组织中表达的相关性 n

AKT信号通路在调节肿瘤细胞生长、增殖、代谢等生物学功能中发挥重要作用，已成为备受关注的抗肿瘤治疗靶点[9]。我们前期的研究[2-3]也发现AKT信号通路参与了胃癌细胞增殖和药物敏感性调节。AKT有3个同源异构体，即AKT1、AKT2和AKT3，分别具有不同的生物学作用，而肿瘤细胞增殖和凋亡调节主要与AKT1有关[10-11]。抑制AKT1表达能逆转胃癌细胞的多药耐药[12]。本研究结果显示，胃癌组织中AKT1阳性表达率61.9%，显著高于癌旁组织，AKT1阳性表达与TNM分期及T分期有关，提示AKT1可能主要参与胃癌的发生、发展。

STMN1是一种微管不稳定蛋白，在有丝分裂的调控中起着重要作用，在多种肿瘤中存在高表达。STMN1高表达与多种恶性实体肿瘤密切相关，可促进肿瘤细胞恶性行为，不仅是一种肿瘤预后标志物，也是一个有价值的治疗靶点[13]，并已尝试用于复发肿瘤的治疗[14]。STMN1高表达与胃癌的发生、发展、化疗耐药和不良预后相关，其高表达可促进胃癌细胞增殖[4,15]。本研究结果显示，胃癌组织中STMN1阳性表达率35.7%，显著高于癌旁组织；STMN1阳性表达仅与肿瘤部位有关，这提示STMN1与胃癌原发部位相关，可能有助于原发肿瘤起源部位确定；STMN1阳性表达与TNM分期、T分期、淋巴结转移等无关，这提示STMN1仅参与胃癌的发生，可能是一个早期分子事件。值得说明的是，本研究中STMN1阳性表达率低于文献[15]报道，这可能主要是所采用免疫组化阳性判断标准的不同所致，也可能存在病例的区域性和个体性差异影响。

有研究[16]显示，AKT1可能是一个区分胃癌和胃炎的生物标志物。STMN1在早期结肠癌中高表达，可能是区分结肠良恶性病变的鉴别诊断标志物[17]。本研究结果表明，胃癌组织中AKT1与STMN1呈高表达且存在正相关关系，提示两者共同参与胃癌的发生，在胃癌组织良恶性鉴别中两者联合使用可能具有辅助鉴别诊断价值。研究[5-7]发现，AKT1和STMN1在肿瘤细胞增殖调控中存在共同机制，STMN1可通过AKT1信号通路调节胃癌细胞的增殖、侵袭和转移，AKT1信号通路的激活也可调节STMN1促使肺癌细胞产生耐药，而两者的相互调控机制尚未阐明。进一步揭示胃癌中AKT1和STMN1之间相互作用的分子机制，可能为胃癌精准诊疗提供新的靶点。

综上所述，AKT1和STMN1蛋白在胃癌组织中高表达并呈正相关性，提示两者共同参与了胃癌的发生，联合检测对胃癌的诊断和鉴别诊断有一定辅助价值，其共同的分子机制还需要进一步研究。