维药巴那都克布祖热颗粒中京尼平苷酸含量测定*

关永强，古丽娜·沙比尔△，阿迪力·艾斯托拉，凯撒·苏莱曼，石磊岭

(1.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830001； 2.新疆维吾尔自治区和田地区维吾尔医药研究所，新疆 和田 848000)

巴那都克布祖热处方乃维吾尔族沿袭至今的经典用药成方，记录在维吾尔医药古籍文献《卡拉巴丁·卡地丁》中[1]，具有清热利尿、消肿止痛、止咳化痰、退热解渴等功效[2]，用于治疗前列腺炎、膀胱炎、尿道感染等泌尿系统疾病[3]。该处方由车前子、葫芦巴、菊苣子等8味药材组方，车前子作为清除剂[4]，起到软坚散结、清除脓性体液及废物、清理尿路、渗湿通淋、止咳平喘等作用[5－6]。京尼平苷酸为车前子中的主要药用成分，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法测定巴那都克布祖热颗粒剂中京尼平苷酸的含量[7－14]，为控制其内在质量提供依据，也为后续产业化标准的建立打下基础[15]。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC－2010HT型高效液相色谱仪，LC－2010HT紫外检测器(日本岛津公司);Mettler Toledo AB265－S型分析天平（瑞士梅特勒 －托利多公司）；UPT－1－5型超纯水机（四川优普超纯科技有限公司）；超声清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）。

1.2 试药

京尼平苷酸对照品（供含量测定用，纯度97.4%，批号为111828－201604，中国食品药品检定研究院）；甲醇(色谱纯，Fisher Scientific公司）；冰乙酸(分析纯，天津市天达净化材料精细化工厂）；水为超纯水；所有药材均购自新疆安萨尔维吾尔药业有限公司；巴那都克布祖热颗粒(实验室自制，批号分别为20160714，20160715，20140718）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：GEMINI C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm，广州菲罗门科学仪器有限公司）；检测波长：254 nm；流速：1 mL ／min；柱温：30 ℃；流动相：甲醇（A）－0.5%冰醋酸溶液（B），过 0.22 μm 微孔滤膜并超声脱气，梯度洗脱（表 1）。

表1 流动相梯度洗脱表

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订流动相梯度洗脱，记录色谱图，详见图1。结果京尼平苷酸峰理论板数不低于3 000。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

取京尼平苷酸对照品适量，精密称定，置25 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液(京尼平苷酸质量浓度为0.103 24 g／L)。取样品(批号为 20160714)约 1 g，精密称定，置 10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超声提取30 min，静置至室温，加甲醇至刻度，摇匀，过0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。称取除车前子原料外的其他药材及辅料，按处方及工艺制备阴性样品，取1 g，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超声提取30 min，静置至室温，加甲醇至刻度，摇匀，过0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密吸取2.2项下对照品溶液2，5，10，15，20，25 μL，进样测定峰面积。以各对照品进样量（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝787 630X＋10 548，r2＝0.999 9（n＝6）。结果表明，京尼平苷酸进样量在0.206～2.581μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液(京尼平苷酸质量浓度为 0.103 g／L)10 μL，重复进样 6次，测定峰面积。结果的 RSD为0.24%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品（批号为20160714），精密称定，各6份。按2.2项下方法制备供试品溶液，精密进样 10 μL测定，记录峰面积。结果的 RSD为 1.45%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取样品（批号为20160714）1 g，精密称定，各6份。按2.2项下方法制备供试品溶液，分别于0，1，2，4，6，8 h 时进样测定，记录峰面积。结果的 RSD为1.51%（n＝6），表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验：取样品（批号为 20160714）0.5 g，精密称定，共6份。分别加入对照品溶液(京尼平苷酸0.139 6 g ／L)9 mL，制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结果见表2。

表2 京尼平苷酸加样回收试验结果(n＝6)

2.4 样品含量测定

分别取样品（批号分别为 20160714，20160715，20140718）各 1 g，精密称定，共 3份。按 2.2项下方法制备供试品溶液，依次进样测定，记录峰面积，计算3批样品的京尼平苷酸含量。结果见表3。

表3 3批样品京尼平苷酸含量测定结果(n＝3)

3 讨论

本研究中参考2015年版《中国药典(一部)》车前子中京尼平苷酸含量测定的检测方法进行梯度洗脱，试验中采用甲醇∶0.5%冰醋酸的流动相进行洗脱，京尼平苷酸峰在约14.2 min时出峰，在454 nm波长处有最大紫外吸收，理论板数大于4 000，且峰形良好。样品中京尼平苷酸出峰时间为14.2 min，且样品峰与其他峰分离度好。阴性对照试验表明，除车前子外的其他原辅料不干扰样品中京尼平苷酸的含量测定。该方法简便、准确、专属性强、灵敏度高，重复性、精密度等各项指标均良好，为巴那都克布祖热颗粒质量标准中的含量测定提供了参考，可快速、有效地通过京尼平苷酸含量检测来考察制剂内在质量。2015年版《中国药典(一部)》中规定车前子中京尼平苷酸含量应不低于0.5%，本研究中通过对制剂中京尼平苷酸的含量考察，应不低于0.2%才合格。