知黄溃疡合剂对口腔溃疡模型大鼠的药效学研究*

唐志立 ，彭贤东 △，王娅俐 ，王 丹 ，谭正怀 ，张仕瑾 ，胡晓燕 ，张 燕 ，郭廷东

（1.四川省南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院药学部，四川 南充 637000；2.四川省中医药科学院，四川 成都 610041）

复发性阿弗他溃疡（RAU）又称复发性阿弗他口炎、复发性口腔溃疡、复发性口疮，专指一类原因不明、具有周期性反复发作但又有自限性的口腔黏膜溃疡性损害，患病率高达10% ～20%，居口腔黏膜病首位[1]。中医治疗主要有内服牛黄解毒丸、外用青茶散等，有一定效果，但其存在治标不治本、治疗时间长和相当部分人群不适的问题。知黄溃疡合剂原方出自《辨证录》引火汤，根据中医药理论对原方进行加减，作为医院临床常用经验方，由熟地黄、黄柏、知母、玄参等组方，具有补肾水、泻火解毒、滋阴降火等功效，治疗复发性口腔溃疡有良好的疗效。但由于原方为传统汤剂，不方便服用和携带，本课题组前期采用现代制剂技术制成了中药新制剂知黄溃疡合剂。本研究中进一步评价知黄溃疡合剂对大鼠口腔溃疡的治疗作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物、仪器与试药

动物：SPF级SD大鼠，雌性，体质量180～220 g，由四川省中医药科学院实验动物中心提供，动物合格证号为SCXK(川)2013－19。四川省中医药科学院药理毒理研究所SPF屏障系统，室内温度20～22℃，相对湿度40%～70%，12 h明暗交替照明，合格证号为 SYXK（川）2013－100，自由饮水。标准饲料由四川省中医药科学院实验动物中心提供。

仪器：JA1003A型电子天平（上海精天电子仪器有限公司）；JY10001型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；CX21FS1C型生物显微镜（奥林巴斯＜广州＞工业有限公司）。

试药：知黄溃疡合剂为黑褐色液体(每1 mL相当于1.5 g原生药，批号为 170323，四川省南充市中心医院)，本试验剂量按每1 kg体质量原生药1 g计算；桂林西瓜霜（桂林三金药业股份有限公司，批号为161205，规格为每片 3.5 g）；冰醋酸（AR，成都长联化工试剂有限公司，批号为20130728，规格为每瓶500 mL，含量为99.5%），临用时用氯化钠注射液配成20%醋酸溶液；水合氯醛（AR，成都市科龙化工试剂厂，批号为2016020101，规格为每瓶 250 g）；0.9% 氯化钠注射液（昆明南疆制药有限公司，批号为C160210D，规格为每瓶 500 mL）。

1.2 方法

1.2.1 模型建立[2]

取SD大鼠60只，实验前置室内适应环境7 d，室温20～22℃，标准饲料饲养，自由饮水。于造模前24 h禁食，正常饮水，次日将大鼠用水合氯醛（350 mg／kg）腹腔注射麻醉，于大鼠口腔右侧颊部黏膜下注射20%醋酸，每只0.05 mL，正常对照组大鼠注射等量0.9%氯化钠注射液，24 h后即可形成口腔溃疡。

1.2.2 试验分组及给药

造模第2天（24 h后）除正常对照组外，将造模成功的60只大鼠随机分为5组，即模型对照组、阳性对照组（桂林西瓜霜200 mg／kg）及知黄溃疡合剂高、中、低剂量组（16，8，4 g 原生药 ／kg）。知黄溃疡合剂灌胃给药（留约0.5 mL药液缓慢注入大鼠口腔，使药液与溃疡面充分接触）；桂林西瓜霜直接取药粉，给药时将药粉（大鼠剂量的1／4）均匀涂于溃疡面上，剩余药粉（大鼠剂量的3 ／4）以 0.5% 羧甲基纤维素钠（CMC － Na）溶液制备成混悬液后灌胃。模型对照组和正常对照组分别灌胃等量0.5%CMC－Na溶液，每天 2次，连续 5 d，末次给药后1 h处死动物，肉眼观察溃疡表面愈合情况并分级；取溃疡处口腔黏膜用甲醛固定，做HE染色观察。

1.2.3 评级指标

溃疡表面愈合情况分级：0级，肉眼观察溃疡恢复至正常状态；Ⅰ级，表面无明显假膜；Ⅱ级，溃疡表面有薄层黄白色假膜，周围无水肿；Ⅲ级，溃疡表面假膜较厚，且周围伴有炎性水肿[3]。

病理组织学检查：大鼠使用20%醋酸制作口腔黏膜溃疡模型，知黄溃疡合剂灌胃，每天2次，连续5 d后，取溃疡部黏膜组织，经10%福尔马林充分固定，梯度酒精脱水，石蜡包埋，制成3～5 μm病理切片，在光学显微镜下观察大鼠口腔黏膜结构，口腔溃疡组织学分级标准参考文献[4－5]，结合本研究实际情况，拟订诊断标准，详见表1。

1.3 统计学处理

采用 SPSS 11.0统计学软件处理。以均数±标准差（s）表示，行 t检验和秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对醋酸致大鼠口腔溃疡愈合级数的影响

经肉眼评价各组动物溃疡愈合级数，阳性对照组（桂林西瓜霜200 mg／kg）与知黄溃疡合剂中剂量组溃疡愈合程度显著提高，与模型对照组比较有显著性差异（P＜0.01）；知黄溃疡合剂高剂量组大鼠口腔黏膜溃疡恢复情况较模型对照组有一定改善，但差异无统计学意义（P ＞0.05）。详见表 2。

表1 口腔黏膜溃疡组织学分级标准

表2 各组大鼠口腔溃疡愈合级数比较

2.2 大鼠口腔黏膜溃疡部位组织学分级

结果见表3。

表3 各组大鼠病理组织学分级比较

2.3 对大鼠口腔溃疡模型病理组织的影响

由图1可见，正常对照组大鼠口腔黏膜上皮完整，间质偶见淋巴细胞，组织结构清晰，未见组织坏死及增生等情况；模型对照组大鼠口腔黏膜上皮可见大片缺损，溃疡大且深，大量组织坏死、炎性细胞浸润，坏死区域周边少量新生肉芽组织；阳性对照组及知黄溃疡合剂中剂量组大鼠口腔黏膜上皮缺损及溃疡范围缩小，坏死组织及炎性细胞浸润较少，坏死区域较多新生肉芽组织填充，溃疡恢复情况与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；高剂量组大鼠口腔黏膜溃疡恢复情况较模型组大鼠有一定改善，但差异无统计学意义（P＞0.05）；低剂量组大鼠口腔黏膜溃疡恢复情况较差，与模型对照组大鼠损伤程度相当（P＞0.05）。

图1 各组大鼠口腔溃疡模型病理组织学检查结果（×40）

3 讨论

RAU的主要特征是标实本虚，热壅阴伤，即火热内盛，上攻口舌，热壅血滞、瘀热互结是RAU的重要病理因素，根据中医辨证分为心脾积热型、阴虚火旺型、气血亏虚型[6]。目前，RAU的病因和发病机制仍不清楚，故尚无特效疗法。对于重型RAU，多采用局部注射肾上腺皮质激素治疗，疗效显著，但该方法易造成局部周围组织的损伤，患者对局部注射激素具有恐惧感，易产生心理负担，远程患者复诊困难，应用受局限[7]。采用中草药及其方剂治疗复发性口疮，主要是通过改善微循环、补充微量元素或调节机体免疫功能，从而达到治疗目的。此外，临床应用中成药与中西医结合治疗复发性口疮，如口服中成药牛黄解毒丸，外用药物青茶散[8－10]。但以上疗法均存在治标不治本、治疗时间长和相当部分人群不适的缺陷。

知黄溃疡合剂原方出自《辨证录》引火汤，原方由熟地、麦冬、巴戟天、茯苓、五味子组方。重用熟地以滋水填精为君；麦冬、五味子滋养肺金，金水相生，以助熟地滋水为臣，其中五味子酸敛，使即补之阴而固封；茯苓补土以制水；巴戟天水火并补，水火既济，水下趋，火不得不随，有引火归原之功，功同桂附。该方原用于咽喉肿痛属阴蛾者，现代临床加减后将其应用于干燥综合征、原发性三叉神经痛、盗汗等疾病。经加减后作为临床经验方，主要由熟地黄和黄柏、知母、玄参等中药材组方，具有补肾水、泻火解毒、滋阴降火等功效，治疗RAU有良好疗效。

黄柏为常用中药，商品药材为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid的干燥树皮，味苦，性寒，有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮的功效，临床用于湿热泻痢、黄疸尿赤、带下阴痒、热淋涩痛、脚气痿 、骨蒸劳热、盗汗、遗精、疮疡肿毒，湿疹湿疮。盐黄柏滋阴降火，用于阴虚火旺、盗汗骨蒸等症[11]。现代医学认为，口腔溃疡的基本病理过程是炎性反应，细胞因子如肿瘤坏死因子－α(TNF－α)、白细胞介素(IL)等发挥重要作用。在炎性反应中，其中TNF－α主要由单核巨噬细胞合成、分泌，同时又以自分泌和旁分泌的方式激活其他细胞如单核巨噬细胞和中性粒细胞，使其产生并释放大量IL －1、IL －6、IL －8、前列腺素 E2（PGE2）等炎性介质，激发炎症的连锁反应，加重机体损伤，在炎性反应中起核心作用。黄柏主要成分为生物碱，对TNF－α的产生有一定抑制作用，从而减轻了炎症损伤，这可能是黄柏治疗口腔溃疡的作用机制[12]。

综上所述，知黄溃疡合剂对大鼠口腔溃疡均有治疗作用，可以防治口腔溃疡。经组织学检查，知黄溃疡合剂(每1 kg体质量8 g原生药)对20%醋酸制作的口腔黏膜溃疡模型有较好的疗效。