多指标综合评分法优选抗感胶囊提取工艺

朱广平　戴雨晨　刘顺　倪文澎

摘要：目的 优化抗感胶囊提取工艺。方法 采用单因素考察结合正交试验设计法，以方中金银花和连翘的有效成分绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷A的含量和浸膏得率为综合评分指标，考察溶剂用量、提取时间、提取次数3个因素对抗感胶囊水提工艺的影响，并进行验证试验。结果 最优提取工艺为：加12倍量水，回流提取2次，每次提取1.5 h。结论 本研究优选的提取工艺简单、稳定可行，对抗感胶囊的生产工艺制定具有一定的指导意义。

关键词：抗感胶囊；绿原酸；木犀草苷；连翘酯苷A；综合评分法；提取工艺

中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2019）03-0077-05

Abstract： Objective To optimize the extraction technology of Kanggan Capsules. Methods Single factor test combined with orthogonal test design was used， and the contents of chlorogenic acid， cynaroside and forsythoside A in Lonicerae Japonicae Flos and Forsythiae Fructus in Kanggan Capsules and extract yields were taken as comprehensive evaluation indexes to examine the effects of solvent dosage， extraction time and extraction times on the extraction technology of Kanggan Capsules. Validation test was conducted. Results The optimal extraction technology was as follows： 12 times of water extracted twice under reflux for 1.5 h each time. Conclusion The optimal extraction technology is simple， stable and feasible， which has certain guiding significance for the preparation of Kanggan Capsules.

Keywords： Kanggan Capsules； chlorogenic acid； cynaroside； forsythoside A； comprehensive evaluation method； extraction technology

抗感合劑为江苏省中医院院内制剂，由金银花、连翘等12味药组成，既有辛凉透邪清热之效，又有芳香辟秽解毒之功，可疏散风热、清利咽喉、清热解毒、宣肺止咳，用于风热感冒引起的发热、头痛、咳嗽、鼻塞、流涕、咽痛等，临床应用10余年疗效显著。但合剂在使用中存在携带不便、顺应性不好等问题。胶囊具有质量稳定、剂量准确、顺应性好且便于携带等优点，故将抗感合剂改剂型为胶囊。为了提高有效成分含量，本试验采用单因素与正交试验法，以绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷A含量及浸膏率为综合评价指标，采用综合评分法优化抗感胶囊提取工艺。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪，含四元泵（G1311A）、柱温箱（G1316A）、DAD检测器（G1314A）、工作站（Chemstation）；Kromasil 100-5-C18色谱柱（5 ?m，4.6 mm×250 mm，编号M05CLA25）；10万分之一电子分析天平（BP-211D型，德国Sartorius）；万分之一电子天平（AX224ZH/E，美国OHAUS Corp）；DW调温电热器（2000 mL，上海平环燃烧设备工程技术有限公司）；电热套（5000 mL，上海羌强仪器设备有限公司）；KQ-1000E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HH-4数显型恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9123A，上海精宏实验设备有限公司）；移液器（1000 ?L，德国Eppendorf）。

组方药物金银花、连翘、拳参、板蓝根、绵马贯众、升麻、薄荷、苦杏仁、荆芥、桔梗、川芎、甘草，均购自安徽井泉中药饮片有限公司，批号分别为20170801、20171001、20170801、20170601、20171001、20170801、20171001、20171001、20170801、20170601、20170501、20170801。绿原酸（批号Y24J7K16726）、木犀草苷（批号Y26A9H59973）、连翘酯苷A（批号Y04J8H39276）对照品，均购自上海源叶生物科技有限公司，纯度均≥98%。乙腈、甲酸为色谱纯（科龙化工试剂厂），水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 绿原酸含量测定

2.1.1 色谱条件

流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；检测波长：327 nm；柱温：30 ℃，流速：1 mL/min[1]221。

2.1.2 对照品溶液的制备

精密量取适量绿原酸对照品，用50%甲醇定容，制成浓度为193.8 ?g/mL对照品贮备液。精密量取上述贮备液1 mL于10 mL棕色瓶中，用50%甲醇定容，即得浓度为19.38 ?g/mL的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备

取1/10处方量药物饮片，加水浸泡提取后过滤，滤液浓缩成100 mL提取液，备用。取制备好的提取液1 mL于50 mL棕色瓶中，超声15 min，用50%甲醇定容，0.45 ?m滤膜过滤，即得。

2.1.4 阴性对照溶液的制备

精密吸取缺金银花和拳参的提取液1 mL，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.1.5 专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.1.1”项下色谱条件测定，色谱图见图1。阴性对照色谱图中，在绿原酸相同保留时间处未见相关吸收峰，表明其对测定无干扰，方法专属性良好。

2.1.6 线性关系考察

精密量取绿原酸对照品10.24 mg，置于5 mL容量瓶中，定容至刻度，取该对照品液及稀释2、4、6、8、10倍的对照品溶液分别进样，以色谱峰面积为纵坐标，进样对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程Y=25.032X+1949，r=0.999 7，绿原酸的线性范围为204.8～2048 ?g/mL。

2.1.7 金银花饮片中绿原酸含量测定

精密称定金银花粉末（过4号筛），按“2.1.3”项下方法制备，分别精密吸取“2.1.2”项下对照品溶液与供试品溶液各10 ?L，按“2.1.1”项下色谱条件测定，得金银花饮片中绿原酸含量为1.9%，符合药典规定（不得少于1.5%）。

2.2 木犀草苷含量测定

2.2.1 色谱条件

流动相A为乙腈、B为0.5%冰醋酸溶液，梯度洗脱（0～15 min，10%～20%A；15～30 min，20%A；30～40 min，20%～30%A），检测波长为350 nm，柱温30 ℃，流速1 mL/min[1]221。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密量取木犀草苷对照品适量，用70%乙醇定容，制成浓度为201.2 ?g/mL对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液1 mL，置10 mL棕色瓶中，用70%乙醇定容，即得21.02 ?g/mL对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备

取1/10处方量药物饮片，加水浸泡提取后过滤，滤液浓缩成100 mL提取液，备用。取制备好的提取液1 mL于50 mL容量瓶中，超声15 min，用70%乙醇定容，0.45 ?m滤膜过滤，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备

精密吸取缺金银花的提取液1 mL，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.2.5 专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.2.1”项下色谱条件测定，色谱图见图2。阴性对照色谱图中，在木犀草苷保留时间处未见相关吸收峰，表明其对测定无干扰，方法专属性良好。

2.2.6 线性关系考察

精密量取木犀草苷对照品3.91 mg，置于5 mL容量瓶中，定容至刻度。取该对照品溶液及稀释20、40、60、80、100倍的对照品溶液分别进样，以色谱峰面积为纵坐标，进样对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程Y=32.244X-109.17，r=0.999 9，结果表明，木犀草苷的线性范围为7.82～782 ?g/mL。

2.2.7 金银花饮片中木犀草苷含量测定

精密称定金银花粉末（过4号筛），按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液与供试品溶液各10 ?L，进样测定，得金银花饮片中木犀草苷含量为0.27%，符合药典规定（不得少于0.050%）。

2.3 连翘酯苷A含量测定

2.3.1 色谱条件

流动相：乙腈-0.4%冰醋酸（15∶85）；检测波长：330 nm，柱温：30 ℃，流速：1 mL/min[1]170。

2.3.2 对照品溶液的制备

精密量取连翘酯苷A对照品适量，用70%甲醇定容，制成419.2 ?g/mL对照品贮备液，精密量取对照品贮备液1 mL，置于10 mL棕色瓶中，用70%甲醇定容，即得浓度为41.29 ?g/mL的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备

取1/10处方量药物饮片，加水浸泡提取后过滤，滤液浓缩成100 mL提取液，备用。取制备好的提取1 mL于50 mL容量瓶中，超声15 min，用70%甲醇定容，0.45 ?m滤膜过滤，即得。

2.3.4 阴性对照溶液的制备

精密吸取缺连翘的提取液1 mL，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3.5 专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液适量，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，色谱图见图3。阴性对照色谱图中，在连翘酯苷A相同保留时间处未见相关吸收峰，表明其对测定无干扰，方法专属性良好。

2.3.6 線性关系考察

精密量取连翘酯苷A对照品12.045 mg，置5 mL容量瓶中，定容至刻度。取该对照品溶液和稀释2、4、6、8、10倍的6份对照品溶液分别进样，以色谱峰面积为纵坐标，进样对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程Y=15.811X+424.48，r=0.999 4，结果表明连翘酯苷A的线性范围为240.9～2409 ?g/mL。

2.3.7 连翘饮片中连翘酯苷A含量测定

精密称定连翘粉末（过5号筛），按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取“2.3.2”项下对照品溶液与供试品溶液各10 ?L，测定，得连翘饮片中连翘酯苷A含量为4.2%，符合药典规定（不得少于0.25%）。

2.4 浸膏率测定

精密吸取样品提取液5 mL，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，置于105 ℃烘箱中，干燥至恒重，取出，移至干燥器内，冷却30 min，迅速精密称定质量。以干燥品计算供试品的浸膏得率。浸膏率（%）=固含物质量（g）÷加入供试品溶液体积（mL）×100%。

2.5 单因素考察

2.5.1 溶剂用量

在其他煎煮条件固定的情况下，分别加6、10、15倍量水，按上述方法测定煎液中绿原酸的含量。结果显示，溶剂用量为10倍时，绿原酸含量最高；溶剂用量不足10倍量时，溶剂用量越少含量越低；溶剂用量高于10倍量时，溶剂用量越高含量越低。因此，综合单因素考察结果，选择8、10、12倍量溶剂进行正交试验。

2.5.2 提取时间

在其他煎煮条件固定的情况下，分别提取30、90、150 min，按上述方法测定煎液中绿原酸的含量。结果显示，提取时间在90 min以内，提取时间越长，绿原酸含量越高；当提取时间为150 min时，绿原酸含量甚至低于提取30 min时。综合考虑单因素考察结果，选择正交试验提取时间为60、90、120 min。

2.6 正交试验优选提取工艺

2.6.1 正交试验设计

根据前期单因素考察结果，选择浸膏率、绿原酸含量、木犀草苷含量、连翘酯苷A含量为考察指标，以溶剂用量、提取时间、提取次数为试验因素，设计L9（34）正交试验，筛选水提工艺条件。因素与水平见表1。

2.6.2 正交试验及结果

根据“2.6.1”项下设计方案做正交试验，得9份样品，按上述方法分别测定3个指标成分绿原酸、木犀草苷、连翘酯苷A的含量。另取9份制备好的供试品，按“2.4”项下方法测定浸膏率。

用多指标试验全概率法[2-3]进行数据处理，设Bi为第i号试验，Aj为第j个指标，i=1，2，3，…，n，j=1，2，3，…，k，且A1，A2，A3，…，An互不相容，设各指标的重要程度之比为A1∶A2∶A3，…，Ar=M1∶M2，…，Mr，则：

由直观分析结果可知，以综合评分为考察指标，各因素的影响顺序为B>C>A；由方差分析结果可知，各因素对提取工艺均无显著影响（P>0.05）。结合直观分析和方差分析结果，同时根据生产节能、省时的实际需要，确定优选工艺为A3B2C2，即用12倍量的水提取2次，每次1.5 h。

2.7 验证试验

按抗感膠囊处方比例称取处方药物饮片3份，按优选的提取工艺条件平行制备3份样品。按上述方法分别测定浸膏率、绿原酸含量、木犀草苷含量、连翘酯苷A含量，结果见表4，RSD分别为1.14%、0.29%、1.63%、0.65%，表明优选出的抗感胶囊水提工艺稳定、可行。

3 讨论

中药复方制剂成分多样，采用多指标进行综合评分可有效避免复方制剂质量不稳定等问题。相对于单一指标成分，多指标成分评价更能反映复方的整体性、复杂性和有效性[4]。多指标综合评分法中权重系数的赋予是综合评分是否科学合理的表现[5-6]。抗感胶囊方中君药为金银花和连翘。绿原酸为金银花的主要有效成分，故权重系数设为0.3；木犀草苷含量次之，权重系数设为0.1。连翘酯苷A是连翘的主要成分，权重系数设为0.3。中药浸膏质量的优劣对中药制剂成型工艺及制剂成品的质量具有重要作用[7]，因此权重系数设为0.3。验证试验表明，本研究优选出的抗感胶囊提取工艺条件比较合理。

本试验仅选取主要指标成分，未能全面研究复方中药味的成分。另外，寻找简便、准确的多指标含量测定方法亦可为本复方的开发利用奠定基础。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 彭兰兰，王燕莉，杜锦文.用多指标试验全概率评分法研究乳癖康糖浆提取工艺[J].深圳中西医结合杂志，2015，25（8）：171-173.

[3] 周琴妹，陈晓斌.用多指标试验全概率评分法研究敛疮液制备工艺[J].中成药，2005，27（3）：347-348.

[4] 李磊，程虹毓，朱玉野，等.多指标综合评分法优化栀子柏皮汤的提取工艺[J].中成药，2015，37（2）：306-310.

[5] 杨铭，张莉，葛迎利，等.以多种数学模型探求降脂颗粒组方配伍优化的研究[J].中国中药杂志，2011，36（24）：3439-3443.

[6] 刘东平，张文朋，李端.多指标试验结果的数据处理[J].包头医学院学报，2015，31（10）：127-128.

[7] 李远辉，伍振峰，杨明，等.制备工艺对中药浸膏物理性质影响的研究现状[J].中国医药工业杂志，2016，47（9）：1143-1150.

（收稿日期：2018-05-10）

（修回日期：2018-06-22；编辑：陈静）